1. INSTITUTO TECNOLOGICO DE CD.
ALTAMIRANO
TEMA MATERIA
• Microscopia Biología Celular
• Técnicas de estudio de las
células
I Semestre
Ing. Agronomía
27 De Octubre Del 2012
ALUMNO FACILITADORA
Erick Echeverría Rodríguez Biol. Jazmín Cortes
Sarabia

2. La microscopía es la técnica de
producir imágenes visibles de
estructuras o detalles demasiado
pequeños para ser percibidos a
simple vista. En este campo ha
habido gran impulso por parte de
la física. Es el conjunto de
técnicas y métodos destinados a
hacer visible los objetos de
estudio que por su pequeñez
están fuera del rango de
resolución del ojo normal.

3. Anton van Leeuwenhoek (Holanda, 1632-1723), un vendedor
de telas, aficionado a pulir lentes, logró fabricar lentes lo
suficientemente poderosas como para observar bacterias,
hongos y protozoos, a los que llamó "animálculos".
El primer microscopio compuesto fue desarrollado por Robert
Hooke. A partir de éste, los avances tecnológicos permitieron
llegar a los modernos microscopios de nuestro tiempo, los
que existen de varios tipos y son usados con diferentes fines.
Hooke, utiliza un microscopio compuesto para estudiar
cortes de corcho y describe los pequeños poros en forma de
caja a los que él llamó "células". Publica su libro
Micrographia.

4. Microscopía
 Óptica
 Flourescencia
 Contraste de Fases
 Confocal
 Microscopía electrónica (TEM y SEM)

5. Un microscopio óptico es un
microscopio basado en lentes
ópticas que nos permiten
observar objetos de puequeño
tamaño. El desarrollo de este
aparato suele asociarse con los
trabajos de Anton van
Leeuwenhoek.
Los microscopios de este tipo
generalmente producen un
aumento de 1000 veces el
tamaño original. El límite lo
tienen en unas 2000 veces. Elementos de un microscopio básico: (1) ocular,
(2) revólver, (3) objetivo, (4) mecanismo de
enfoque, (5) tornillo de enfoque fino, (6) platina,
(7) espejo, (8) condensador.

6. • Principio de funcionamiento
• Las lentes de un microscopio óptico son el condensador, el
objetivo y el ocular.
• La luz que entra en el sistema debe enfocarse sobre la
preparación y para esto se utiliza el condensador. Elevando o
bajando el condensador puede alterarse el plano del foco de
luz y elegirse una posición que consiga el foco preciso.
• El objetivo es la lente situada cerca del objeto que se observa.
El aumento primario del objeto es producido por la lente
objetivo y la imagen se transmite al ocular.
• En el ocular se realiza el aumento final.

7. • Aumento y resolución
• Es importante recordar que un microscopio, aparte de
tener la capacidad de dar AUMENTO al tamaño de la
imagen de la muestra, también tiene PODER
RESOLUTIVO, esto es la capacidad de mostrar distintos
y separados dos puntos muy cercanos.
• Cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor será la
definición de un objeto. Los microscopios de gran poder
resolutivo son especialmente buenos para ver pequeñas
estructuras.

8. • Microscopio óptico de campo oscuro
• El microscopio de campo oscuro utiliza un haz enfocado de luz muy intensa
en forma de un cono hueco concentrado sobre el espécimen.
• El objeto iluminado dipersa la luz y se hace así visible contra el fondo
oscuro que tiene detrás, como las partículas de polvo iluminadas por un
rayo de sol que se cuela en una habitación cerrada.
• Las porciones transparentes del espécimen quedan oscuras, mientras que
las superficies y partículas se ven brillantes.
• Esta forma de iluminación se utiliza para analizar elementos biológicos
transparentes y sin pigmentar, invisibles con iluminación normal, sin fijar la
muestra, es decir, sin matarla.
• También es bastante utilizado en la observación de muestras metalográficas
para la observación de detalles en superficies con alta reflectancia.

9. El microscopio de fluorescencia es una
variación del microscopio óptico, dotado de
luz ultravioleta en el que los objetos son
iluminados por rayos de una determinada
longitud de onda.
La imagen observada es el resultado de la
radiación electromagnética emitida por las
moléculas que han absorbido la excitación
primaria y reemitido una luz con mayor
longitud de onda.
Para dejar pasar sólo la emisión secundaria
deseada, se deben colocar filtros apropiados
debajo del condensador y encima del
objetivo.
Se usa para detectar sustancias con
autofluorescencia (vitamina A) o sustancias
marcadas con fluorocromos.

10. • Es un microscopio óptico modificado que
permite contrastar sustancias de diferente
grosor o densidad.
• Mediante un condensador y un objetivo
especial se controla la iluminación de tal
manera que vaya en diferentes rutas a
través de las distintas partes de una célula.
• El resultado es una imagen con diferentes
grados de brillo y oscuridad.
• Con este método, el material denso aparece
brillante, mientras que las partes de la célula
que tienen una densidad cercana al agua
(citoplasma) aparecen oscuras.
• Se utiliza para visualizar estructuras
celulares sin necesidad de usar colorantes o
matar microorganismos.

11. • El microscopio confocal es en
principio un microscopio óptico que
incluye como fuente de luz un láser y un
sistema electrónico que ayuda a la
captación de imágenes.
• Debido a esto, el microscopio confocal
consigue un aumento en la resolución y
obtener imágenes de secciones ópticas
extremadamentes finas, eliminando así
la interferencia que produce la luz que
llega de los diferentes campos ópticos
de todo el grosor de la muestra que se
observa, consiguiendo así que el
enfoque se realice sobre un único plano
(confocal).
• Las imágenes obtenidas son digitales.

12. • En el Microscopio
Electrónico la luz se sustituye
por un haz de electrones que
pasan por un tubo (con vacío
para mejorar el paso de los
electrones).
• Permite la observación de las
estructuras interiores de las
células.
• Sirve para visualizar virus.
• Tiene una resolución de 10 A
(se pueden ver objetos muy
pequeños, incluyendo algunas
moléculas).

13. • Microscopio electrónico
• Un haz de electrones es lanzado por un cañón en el que
se establece una diferencia de potencial, entre el cátodo
y el ánodo.
• El chorro de electrones pasa a través de la muestra a
observar, que está colocada en una rejilla.
• Los electrones chocan con la muestra y se desvían, y
estas desviaciones son recogidas por la pantalla.
• Observamos la imagen a través de una pantalla que es
excitada por los electrones que llegan a ella
(mecanismo similar a la televisión). Las imágenes las
recogemos mediante una placa fotográfica que es
impresionada directamente por los electrones.

14. • Microscopio electrónico: Principio de
funcionamiento
• En un microscopio óptico, la potencia amplificadora está
limitada por la longitud de onda de la luz visible.
• El microscopio electrónico utiliza electrones para
iluminar un objeto; los electrones tienen una longitud de
onda mucho menor que la de la luz, y pueden mostrar
estructuras mucho más pequeñas.
• La longitud de onda más corta de la luz visible es de
alrededor de 4.000 ángstroms (1 ángstrom es
0,0000000001 metros). La longitud de onda de los
electrones que se utilizan en los microscopios
electrónicos es de alrededor de 0,5 ángstroms.

15. • Microscopio electrónico
• Existen dos tipos básicos de microscopio
electrónico:
1. Microscopio electrónico de transmisión
(TEM)
2. Microscopio electronico de barrido (SEM)

16. Microscopio electrónico de transmisión
(TEM)
• Principio de funcionamiento:
▫ El microscopio electrónico de transmisión emite un haz de electrones
dirigido hacia el objeto que se desea aumentar.
▫ Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y
otros lo atraviesan formando una imagen aumentada de la muestra.
▫ Para utilizar un microscopio electrónico de transmisión debe cortarse la
muestra en capas finas, no mayores de un par de miles de ángstroms.
▫ Los microscopios electrónicos de transmisión pueden aumentar un objeto
hasta un millón de veces.
▫ El primer microscopio electrónico de transmisión fue desarrollado entre
1931 y 1933 por Ernst Ruska y sus colaboradores.
▫ El primer microscopio electrónico de transmisión comercial lo construyó
la compañía Siemens en 1939.

17. Microscopio electrónico de transmisión
(TEM)

18. Microscopio electrónico de barrido (SEM)
• El microscopio electrónico de barrido o SEM
(Scanning Electron Microscopy), es un microscopio
que tiene una gran profundidad de campo, la cual
permite que se enfoque a la vez una gran parte de la
muestra.
• Produce imágenes de alta resolución, que significa
que características espacialmente cercanas en la
muestra pueden ser examinadas a una alta
magnificación.
• La preparación de las muestras es relativamente
fácil pues la mayoría de SEMs sólo requieren que
estas sean conductoras.

19. • En el microscopio electrónico de barrido la
muestra es recubierta con una capa de metal
delgado, y es barrida con electrones enviados
desde un cañón.
• Un detector mide la cantidad de electrones
enviados que arroja la intensidad de la zona de
muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres
dimensiones, proyectados en una imagen de TV.
• Su resolución está entre 3 y 20 nm, dependiendo
del microscopio.
• Inventado en 1981 por Ernst Ruska, Gerd Binnig y
Heinrich Rohrer.

20. • Un microscopio electrónico de barrido crea una imagen
ampliada de la superficie de un objeto.
• No es necesario cortar la muestra en capas, sino que puede
colocarse en el microscopio con muy pocos preparativos.
• El SEM explora la superficie de la imagen punto por punto.
• Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz
muy concentrado de electrones, de forma parecida al barrido
de un haz de electrones por la pantalla de una televisión.
• Los electrones del haz pueden dispersarse de la muestra o
provocar la aparición de electrones secundarios. Los
electrones perdidos y los secundarios son recogidos y
contados por un dispositivo electrónico situado a los lados del
espécimen.

21. • Cada punto leído de la muestra corresponde a un
píxel en un monitor de televisión. Cuanto mayor sea
el número de electrones contados por el dispositivo,
mayor será el brillo del píxel en la pantalla.
• A medida que el haz de electrones barre la muestra,
se presenta toda la imagen de la misma en el monitor.
• Los microscopios electrónicos de barrido pueden
ampliar los objetos 100.000 veces o más.
• Este tipo de microscopio es muy útil porque produce
imágenes tridimensionales realistas de la superficie
del objeto.

22. • Son ampliamente utilizados en la biología celular.
• Aunque permite una menor capacidad de aumento que el
microscopio electrónico de transmisión, permite apreciar con
mayor facilidad texturas y objetos en tres dimensiones que
hayan sido pulverizados metálicamente antes de su
observación.
• Por esta razón solamente pueden ser observados organismos
muertos, y no se puede ir más allá de la textura externa que se
quiera ver.
• Los microscopios electrónicos sólo pueden ofrecer imágenes
en blanco y negro puesto que no utilizan la luz.
• Este instrumento permite la observación y caracterización
superficial de materiales inorgánicos y orgánicos, entregando
información morfológica del material analizado.

23. Microscopio electrónico de barrido (SEM)