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¿QUÉ ES LA ALERGIA?

             ALERGIA


REACCION INMUNE EXACERBADA MEDIADA POR IgE
FRENTE A UN ELEMENTO EXTRAÑO NO PATÓGENO


             ALÉRGENO


     CUALQUIER SUSTANCIA CAPAZ DE
    PROVOCAR UNA REACCIÓN ALÉRGICA
CLASIFICACIÓN DE LOS ALÉRGENOS




     ÁCAROS                PELO ANIMALES




                 POR
              INHALACIÓN




                                 POLEN
 HONGOS
CLASIFICACIÓN DE LOS ALÉRGENOS




              POR
 METALES   CONTACTO    MEDICAMENTOS




                        ALIMENTOS
  LÁTEX
CLASIFICACIÓN DE LOS ALÉRGENOS




                   POR INGESTION
                   Ó INOCULACIÓN

  MEDICAMENTOS




 VENENO INSECTOS                   ALIMENTOS
SÍNTOMAS DE LA ALERGIA
                                        POR INGESTIÓN,
     POR INHALACIÓN
                                         INOCULACIÓN
                                          Y CONTACTO

  RINITIS        ASMA
  ALÉRGICA    BRONQUIAL
  (20-30%)      (5-10%)

                                                 DERMATITIS
                                                POR CONTACTO
ESTACIONAL
PERENNE
OCUPACIONAL

                          URTICARIA/ANGIODEMA
                                 (10-20%)


DERMATITIS
  ATÓPICA
                                      ANAFILAXIA
DIAGNÓSTICO in vivo DE LA ALERGIA

                                PARCHES
                              EPICUTÁNEOS




          SPT
(SKIN PRICK TEST O PÁPULAS)

                                            ESPIROMETRÍA
                                 TEST



      TEST                                     TEST DE
 INTRACUTÁNEOS                              PROVOCACION
DIAGNÓSTICO in vitro DE LA ALERGIA


                                            TEST DEA




       CAP          TEST                         TEST
                                             experimentales



                   Activación basófilos



                 Inmunoblotting multiplex

                                                       ISAC
TRATAMIENTO DE LA ALERGIA

                  ORALES

                 TÓPICOS
 TRATAMIENTO
MEDICAMENTOSO


                CORTICOIDES

                ANTIHISTAMÍNICOS


                            POLEN

INMUNOTERAPIA              VENENOS

                            LÁTEX
EL POLEN COMO VECTOR CAUSANTE DE ALERGIA

    PRINCIPALES ESPECIES DE        POLEN ALERGOGÉNICO
     INTERÉS ALERGOGÉNICO
                                     Presencia de uno o más
                                     componentes alergénicos
      FAMILIA       ESPECIE
                                     Polinización anemófila
      PINÁCEAS    Crytomeria sp.

     URTICÁCEAS   Parietaria sp.
                                    Elevada producción de
                   Quercus sp.      polen
                   Alnus sp.
     FAGÁCEAS
                   Betula sp.
                   Corylus sp.       Polen pequeño tamaño
                                     (< 50 µm)
      OLEÁCEAS    Olea europaea

                  Ambrosia sp.       Amplia distribución
     ASTERÁCEAS
                  Artemisia sp.
                                     geográfica
      POÁCEAS        Todas
ESPECIES DE INTERÉS ALERGOGÉNICO EN ESPAÑA
EL ESTUDIO DE LA AEROBIOLOGÍA




                         Captadores polínicos
                         (Ciclón Burkard)
GENERALIDADES. VARIEDADES
          0
        00 S
      3. DE
                               0
                             25 ES -24 variedades
    s                      s
 n a ED A
U RI                     na DAD
                        U IE       PRINCIPALES
VA                         R
                        VA         -24 variedades
                                   SECUNDARIAS

                                   -50 variedades
                                   DIFUNDIDAS
ALÉRGENOS DEL POLEN DEL OLIVO
CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y CELULAR
                                                                            DE LOS ALÉRGENOS DEL POLEN DEL OLIVO
                                                                            Ole e 1




                                                                             C
                                                                                                              B
                                                                                                                           A
                                                                              Relative amount




                                                                                                                            6.5
                                                                                                                           20.1
                                                                                                                                  36.5
                                                                                                                                  42.7
                                                                                                                                  66.4



                                                                                                                           14.3
                                                                                                                                         kDa
                                                                                 of Ole e 1




                                                                                                                   20.1
                                                                                                            14.3
                                                                                    (%)




                                                                                                                     kDa




                                                                              0
                                                                                  20
                                                                                       40
                                                                                            60
                                                                                                 80
                                                                                                      100
                                                                                                                                               Mw1

                                                                                                                                           Picual
                                                                                                                                           Loaime
                                                                                                                                           Lucio
                                                                                                                                           Frantoio
                                                                                                                                           Gordal

                                                                                                                                           Manzanilla
                                                                                                                                           Arbequina
                                                                                                                                           Hojiblanca
                                                                                                                                           Picudo
                                                                                                                                           Lechín
Castro, A. J. y col. Int. Arch. Allergy Clin Immunol 131, 164-173 (2003).
                                                                                                                                           Commercial
                                                                                                                                           extract
                                                                                                                                           Mw2
                                                                                                                                                        ELECTROFORESIS UNIDIMENSIONAL DE PROTEÍNAS




                                                                                                              a
                                                                                                              c
                                                                                                              b
                                                                                                                                         kDa
                                                                                                                               66.2



                                                                                                                               14.4
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                                                                                                                               25.0
                                                                                                                               45.0
SECUENCIAS DE Ole e 1   CLONACIÓN Y ANÁLISIS DE SECUENCIAS
                                                 REMITIDAS A GENBANK
CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y CELULAR
DE LOS ALÉRGENOS DEL POLEN DEL OLIVO
                                       Ole e 1




                                                 Hamman-Khalifa y col.
                                                 BMC Plant Biol. 8:10
                                                 (2008).
CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y CELULAR
DE LOS ALÉRGENOS DEL POLEN DEL OLIVO
Ole e 1
                                  DE PROTEÍNAS ALERGÉNICAS
                                                             MODELIZACIÓN DE ESTRUCTURA 3-D
CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y CELULAR
DE LOS ALÉRGENOS DEL POLEN DEL OLIVO
Ole e 2

                                MICROSCOPÍA DE BARRIDO LÁSER CONFOCAL
                                                                        INMUNOLOCALIZACIÓN CON ANTICUERPOS
CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y CELULAR
DE LOS ALÉRGENOS DEL POLEN DEL OLIVO
Ole e 1




             ER
                        GC
                                 MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE TRANSMISIÓN
                                                                          INMUNOLOCALIZACIÓN CON ANTICUERPOS
CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y CELULAR
DE LOS ALÉRGENOS DEL POLEN DEL OLIVO
Ole e 1
                                   GERMINACIÓN IN VITRO DE POLEN DE OLIVO
IMPLICACIONES CLÍNICAS del        Personalización de los
  polimorfismo en cultivares          tratamientos

¿Se deben personalizar más las vacunas de olivo?
              ¿Es la variedad de origen del extracto un criterio
              válido de personalización?


              PERSONALIZACIÓN

               VACUNAS DE
 VACUNAS de                   VACUNAS DE        VACUNAS
              EXTRACTOS      EXTRACTOS DE     ENRIQUECIDAS
                                                               VACUNAS CON
 POLVO        DE ÁCAROS     GÉNERO/ESPECIE   CON ALÉRGENOS
                                                                ALÉRGENOS

DE CASA       (GENÉRICO)      DE ÁCAROS                      RECOMBINANTES
                                              NATIVOS


               VACUNAS DE                       VACUNAS
                              VACUNAS DE                       VACUNAS CON
                                              ENRIQUECIDAS
              O. europaea    EXTRACTOS DE                       ALÉRGENOS
                                             CON ALÉRGENOS
              (GENÉRICO)    VARIEDADES                       RECOMBINANTES
                                              NATIVOS


               ESPECIALIZACIÓN
TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA

•  Alché, J.D., Rodríguez-García, M.I., Castro, A.J. y Alché, V. “kit para el diagnóstico de
hipersensibilidad frente a alergenos del polen del olivo y su utilización”. Patente de Invención.
Concedida por la Oficina Española de Patentes y Marcas. Solicitud 200100995, 27 Abril 2001.
Concesión 11 Febrero 2005. Número de publicación: 2 196 952. Se encuentra activa una licencia
de explotación de esta patente al grupo de empresa Allergenome S.L. (Código OTRI-CSIC:
OTT20041097) vigencia 24/11/2004 a 27/04/2021.

• Alché, J.D., Rodríguez-García, M.I., Castro, A.J. y Alché, V. “Perfeccionamientos introducidos en
el objeto de solicitud de patente española Nº P200100995”, Número de solicitud P200600090.
Enero 2006. Concesión 16/06/2010 (Boletín Oficial de la Propiedad Industrial de 6 de julio de
2010). Publicación boletín OEPM 2 326 399. Se encuentra activa una licencia de explotación de
esta patente al grupo de empresa Allergenome S.L. (Código OTRI-CSIC: OTT20070793) vigencia
03/07/2006 a 27/04/2021.

• Alché, J.D., Hamman-Khalifa, A.M., Castro, A.J. y Rodríguez-García, M.I. “ácidos nucleicos y
alérgenos del polen de olivo de variedades definidas de olivo y aplicaciones”. Solicitud
P2000400047. Fecha de prioridad 12 de Enero de 2005. Concesión 26/06/2010 (Boletín Oficial
de la Propiedad Industrial de 6 de julio de 2010). Se encuentra activa una licencia de explotación
de esta patente al grupo de empresa Allergenome S.L./Inmunal/Applied molecular Developent
S.A. (Código OTRI-CSIC: OTT20050549) vigencia 30/05/2005 a 30/05/2025.

• Alché, J.D., Hamman-Khalifa, A.M., Castro, A.J., Jiménez-López, J.C. y Rodríguez-García, M.I.
“ácidos nucleicos y alérgenos del polen de olivo de variedades definidas de olivo y aplicaciones”
PCT correspondiente a la solicitud P2000400047, con fecha 12 de enero de 2006. El número de
solicitud es PCT/ES2006/000008.

• Alché, J.D., Fendri, M. y Rodríguez-García, M.I.: “Método y kit para la identificación varietal del
origen del polen del olivo”. Solicitud P201130568. Fecha de prioridad: 11 abril 2011.
IMPLICACIONES CLÍNICAS del     Nuevas tendencias en
  polimorfismo en cultivares         terapia

 ¿Es necesario crear un recombinante o puedo encontrarlo en la
 naturaleza?. Por ejemplo: existen variedades con polen
 hipoalergénico?
IMPLICACIONES CLÍNICAS del        Nuevas tendencias en
   polimorfismo en cultivares           diagnosis

¿Puede incluirse un protocolo de diagnóstico a variedades en un sistema in
vitro de tipo “high throughput”, “component-resolved” o multiplex?
ALERGIA Y CONTAMINACIÓN
EFECTOS DIRECTOS                   EFECTOS INDIRECTOS
Cambios estructura 3-D alérgenos   Respuesta inflamatoria exacerbada por
                                   inducción de estrés oxidativo en el epitelio
Solubilización de los alérgenos
                                   respitatorio.
Creación de aerosoles
Incremento en el transporte




PRINCIPALES IMPLICADOS:
Dióxido de azufre (SO2)
Dióxido de Nitrógeno (NO2)
Ozono (O3)
Partículas de Escape Diesel
(PED)
ALERGIA Y EL CAMBIO CLIMÁTICO
Efectos directos del incremento de temperaturas:


Mayor producción polínica
Mayor carga alergénica del polen
Periodo de floración extendida en muchas especies
Nuevas especies en un determinado ecosistema
LA HIPÓTESIS DE LA HIGIENE
¿PUEDE TENER ALGUNA VENTAJA LA ALERGIA?




                                 2012

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Qué es la alergia

  • 1.
  • 2.
  • 3.
  • 4. ¿QUÉ ES LA ALERGIA? ALERGIA REACCION INMUNE EXACERBADA MEDIADA POR IgE FRENTE A UN ELEMENTO EXTRAÑO NO PATÓGENO ALÉRGENO CUALQUIER SUSTANCIA CAPAZ DE PROVOCAR UNA REACCIÓN ALÉRGICA
  • 5. CLASIFICACIÓN DE LOS ALÉRGENOS ÁCAROS PELO ANIMALES POR INHALACIÓN POLEN HONGOS
  • 6. CLASIFICACIÓN DE LOS ALÉRGENOS POR METALES CONTACTO MEDICAMENTOS ALIMENTOS LÁTEX
  • 7. CLASIFICACIÓN DE LOS ALÉRGENOS POR INGESTION Ó INOCULACIÓN MEDICAMENTOS VENENO INSECTOS ALIMENTOS
  • 8. SÍNTOMAS DE LA ALERGIA POR INGESTIÓN, POR INHALACIÓN INOCULACIÓN Y CONTACTO RINITIS ASMA ALÉRGICA BRONQUIAL (20-30%) (5-10%) DERMATITIS POR CONTACTO ESTACIONAL PERENNE OCUPACIONAL URTICARIA/ANGIODEMA (10-20%) DERMATITIS ATÓPICA ANAFILAXIA
  • 9. DIAGNÓSTICO in vivo DE LA ALERGIA PARCHES EPICUTÁNEOS SPT (SKIN PRICK TEST O PÁPULAS) ESPIROMETRÍA TEST TEST TEST DE INTRACUTÁNEOS PROVOCACION
  • 10. DIAGNÓSTICO in vitro DE LA ALERGIA TEST DEA CAP TEST TEST experimentales Activación basófilos Inmunoblotting multiplex ISAC
  • 11. TRATAMIENTO DE LA ALERGIA ORALES TÓPICOS TRATAMIENTO MEDICAMENTOSO CORTICOIDES ANTIHISTAMÍNICOS POLEN INMUNOTERAPIA VENENOS LÁTEX
  • 12. EL POLEN COMO VECTOR CAUSANTE DE ALERGIA PRINCIPALES ESPECIES DE POLEN ALERGOGÉNICO INTERÉS ALERGOGÉNICO Presencia de uno o más componentes alergénicos FAMILIA ESPECIE Polinización anemófila PINÁCEAS Crytomeria sp. URTICÁCEAS Parietaria sp. Elevada producción de Quercus sp. polen Alnus sp. FAGÁCEAS Betula sp. Corylus sp. Polen pequeño tamaño (< 50 µm) OLEÁCEAS Olea europaea Ambrosia sp. Amplia distribución ASTERÁCEAS Artemisia sp. geográfica POÁCEAS Todas
  • 13. ESPECIES DE INTERÉS ALERGOGÉNICO EN ESPAÑA
  • 14. EL ESTUDIO DE LA AEROBIOLOGÍA Captadores polínicos (Ciclón Burkard)
  • 15. GENERALIDADES. VARIEDADES 0 00 S 3. DE 0 25 ES -24 variedades s s n a ED A U RI na DAD U IE PRINCIPALES VA R VA -24 variedades SECUNDARIAS -50 variedades DIFUNDIDAS
  • 16. ALÉRGENOS DEL POLEN DEL OLIVO
  • 17. CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y CELULAR DE LOS ALÉRGENOS DEL POLEN DEL OLIVO Ole e 1 C B A Relative amount 6.5 20.1 36.5 42.7 66.4 14.3 kDa of Ole e 1 20.1 14.3 (%) kDa 0 20 40 60 80 100 Mw1 Picual Loaime Lucio Frantoio Gordal Manzanilla Arbequina Hojiblanca Picudo Lechín Castro, A. J. y col. Int. Arch. Allergy Clin Immunol 131, 164-173 (2003). Commercial extract Mw2 ELECTROFORESIS UNIDIMENSIONAL DE PROTEÍNAS a c b kDa 66.2 14.4 18.4 25.0 45.0
  • 18. SECUENCIAS DE Ole e 1 CLONACIÓN Y ANÁLISIS DE SECUENCIAS REMITIDAS A GENBANK CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y CELULAR DE LOS ALÉRGENOS DEL POLEN DEL OLIVO Ole e 1 Hamman-Khalifa y col. BMC Plant Biol. 8:10 (2008).
  • 19. CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y CELULAR DE LOS ALÉRGENOS DEL POLEN DEL OLIVO Ole e 1 DE PROTEÍNAS ALERGÉNICAS MODELIZACIÓN DE ESTRUCTURA 3-D
  • 20. CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y CELULAR DE LOS ALÉRGENOS DEL POLEN DEL OLIVO Ole e 2 MICROSCOPÍA DE BARRIDO LÁSER CONFOCAL INMUNOLOCALIZACIÓN CON ANTICUERPOS
  • 21. CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y CELULAR DE LOS ALÉRGENOS DEL POLEN DEL OLIVO Ole e 1 ER GC MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE TRANSMISIÓN INMUNOLOCALIZACIÓN CON ANTICUERPOS
  • 22. CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y CELULAR DE LOS ALÉRGENOS DEL POLEN DEL OLIVO Ole e 1 GERMINACIÓN IN VITRO DE POLEN DE OLIVO
  • 23. IMPLICACIONES CLÍNICAS del Personalización de los polimorfismo en cultivares tratamientos ¿Se deben personalizar más las vacunas de olivo? ¿Es la variedad de origen del extracto un criterio válido de personalización? PERSONALIZACIÓN VACUNAS DE VACUNAS de VACUNAS DE VACUNAS EXTRACTOS EXTRACTOS DE ENRIQUECIDAS VACUNAS CON POLVO DE ÁCAROS GÉNERO/ESPECIE CON ALÉRGENOS ALÉRGENOS DE CASA (GENÉRICO) DE ÁCAROS RECOMBINANTES NATIVOS VACUNAS DE VACUNAS VACUNAS DE VACUNAS CON ENRIQUECIDAS O. europaea EXTRACTOS DE ALÉRGENOS CON ALÉRGENOS (GENÉRICO) VARIEDADES RECOMBINANTES NATIVOS ESPECIALIZACIÓN
  • 24. TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA • Alché, J.D., Rodríguez-García, M.I., Castro, A.J. y Alché, V. “kit para el diagnóstico de hipersensibilidad frente a alergenos del polen del olivo y su utilización”. Patente de Invención. Concedida por la Oficina Española de Patentes y Marcas. Solicitud 200100995, 27 Abril 2001. Concesión 11 Febrero 2005. Número de publicación: 2 196 952. Se encuentra activa una licencia de explotación de esta patente al grupo de empresa Allergenome S.L. (Código OTRI-CSIC: OTT20041097) vigencia 24/11/2004 a 27/04/2021. • Alché, J.D., Rodríguez-García, M.I., Castro, A.J. y Alché, V. “Perfeccionamientos introducidos en el objeto de solicitud de patente española Nº P200100995”, Número de solicitud P200600090. Enero 2006. Concesión 16/06/2010 (Boletín Oficial de la Propiedad Industrial de 6 de julio de 2010). Publicación boletín OEPM 2 326 399. Se encuentra activa una licencia de explotación de esta patente al grupo de empresa Allergenome S.L. (Código OTRI-CSIC: OTT20070793) vigencia 03/07/2006 a 27/04/2021. • Alché, J.D., Hamman-Khalifa, A.M., Castro, A.J. y Rodríguez-García, M.I. “ácidos nucleicos y alérgenos del polen de olivo de variedades definidas de olivo y aplicaciones”. Solicitud P2000400047. Fecha de prioridad 12 de Enero de 2005. Concesión 26/06/2010 (Boletín Oficial de la Propiedad Industrial de 6 de julio de 2010). Se encuentra activa una licencia de explotación de esta patente al grupo de empresa Allergenome S.L./Inmunal/Applied molecular Developent S.A. (Código OTRI-CSIC: OTT20050549) vigencia 30/05/2005 a 30/05/2025. • Alché, J.D., Hamman-Khalifa, A.M., Castro, A.J., Jiménez-López, J.C. y Rodríguez-García, M.I. “ácidos nucleicos y alérgenos del polen de olivo de variedades definidas de olivo y aplicaciones” PCT correspondiente a la solicitud P2000400047, con fecha 12 de enero de 2006. El número de solicitud es PCT/ES2006/000008. • Alché, J.D., Fendri, M. y Rodríguez-García, M.I.: “Método y kit para la identificación varietal del origen del polen del olivo”. Solicitud P201130568. Fecha de prioridad: 11 abril 2011.
  • 25. IMPLICACIONES CLÍNICAS del Nuevas tendencias en polimorfismo en cultivares terapia ¿Es necesario crear un recombinante o puedo encontrarlo en la naturaleza?. Por ejemplo: existen variedades con polen hipoalergénico?
  • 26. IMPLICACIONES CLÍNICAS del Nuevas tendencias en polimorfismo en cultivares diagnosis ¿Puede incluirse un protocolo de diagnóstico a variedades en un sistema in vitro de tipo “high throughput”, “component-resolved” o multiplex?
  • 27. ALERGIA Y CONTAMINACIÓN EFECTOS DIRECTOS EFECTOS INDIRECTOS Cambios estructura 3-D alérgenos Respuesta inflamatoria exacerbada por inducción de estrés oxidativo en el epitelio Solubilización de los alérgenos respitatorio. Creación de aerosoles Incremento en el transporte PRINCIPALES IMPLICADOS: Dióxido de azufre (SO2) Dióxido de Nitrógeno (NO2) Ozono (O3) Partículas de Escape Diesel (PED)
  • 28. ALERGIA Y EL CAMBIO CLIMÁTICO Efectos directos del incremento de temperaturas: Mayor producción polínica Mayor carga alergénica del polen Periodo de floración extendida en muchas especies Nuevas especies en un determinado ecosistema
  • 29. LA HIPÓTESIS DE LA HIGIENE
  • 30. ¿PUEDE TENER ALGUNA VENTAJA LA ALERGIA? 2012

Notas del editor

  1. Para desarrollar este objetivo general hemos formulado 4 objetivos específicos, que vamos a ver a continuación: Analizar el polimorfismo molecular y la posible presencia de diversas isoformas de SOD, catalasa, peroxidasa y NADPH oxidasa (NOX) en el grano de polen maduro y el pistilo de diferentes cultivares de olivo. Generar herramientas moleculares (anticuerpos, sondas, proteínas purificadas -bien nativas o de origen recombinante- y construcciones con “reporter genes”) correspondientes a las isoformas más relevantes de estos enzimas, para su posterior utilización en el análisis de la expresión génica y la determinación de la función biológica. Determinar los niveles de expresión y la actividad de dichos enzimas en el grano de polen y el pistilo del olivo durante su desarrollo, y durante la germinación in vitro e in vivo del polen. Obtener pruebas del papel biológico de dichos enzimas en la biología reproductiva de la planta, analizando la localización celular de los enzimas, su actividad, y la localización de sustratos y efectores potenciales durante la respuesta compatible e incompatible.
  2. Para desarrollar este objetivo general hemos formulado 4 objetivos específicos, que vamos a ver a continuación: Analizar el polimorfismo molecular y la posible presencia de diversas isoformas de SOD, catalasa, peroxidasa y NADPH oxidasa (NOX) en el grano de polen maduro y el pistilo de diferentes cultivares de olivo. Generar herramientas moleculares (anticuerpos, sondas, proteínas purificadas -bien nativas o de origen recombinante- y construcciones con “reporter genes”) correspondientes a las isoformas más relevantes de estos enzimas, para su posterior utilización en el análisis de la expresión génica y la determinación de la función biológica. Determinar los niveles de expresión y la actividad de dichos enzimas en el grano de polen y el pistilo del olivo durante su desarrollo, y durante la germinación in vitro e in vivo del polen. Obtener pruebas del papel biológico de dichos enzimas en la biología reproductiva de la planta, analizando la localización celular de los enzimas, su actividad, y la localización de sustratos y efectores potenciales durante la respuesta compatible e incompatible.
  3. Para desarrollar este objetivo general hemos formulado 4 objetivos específicos, que vamos a ver a continuación: Analizar el polimorfismo molecular y la posible presencia de diversas isoformas de SOD, catalasa, peroxidasa y NADPH oxidasa (NOX) en el grano de polen maduro y el pistilo de diferentes cultivares de olivo. Generar herramientas moleculares (anticuerpos, sondas, proteínas purificadas -bien nativas o de origen recombinante- y construcciones con “reporter genes”) correspondientes a las isoformas más relevantes de estos enzimas, para su posterior utilización en el análisis de la expresión génica y la determinación de la función biológica. Determinar los niveles de expresión y la actividad de dichos enzimas en el grano de polen y el pistilo del olivo durante su desarrollo, y durante la germinación in vitro e in vivo del polen. Obtener pruebas del papel biológico de dichos enzimas en la biología reproductiva de la planta, analizando la localización celular de los enzimas, su actividad, y la localización de sustratos y efectores potenciales durante la respuesta compatible e incompatible.
  4. Para desarrollar este objetivo general hemos formulado 4 objetivos específicos, que vamos a ver a continuación: Analizar el polimorfismo molecular y la posible presencia de diversas isoformas de SOD, catalasa, peroxidasa y NADPH oxidasa (NOX) en el grano de polen maduro y el pistilo de diferentes cultivares de olivo. Generar herramientas moleculares (anticuerpos, sondas, proteínas purificadas -bien nativas o de origen recombinante- y construcciones con “reporter genes”) correspondientes a las isoformas más relevantes de estos enzimas, para su posterior utilización en el análisis de la expresión génica y la determinación de la función biológica. Determinar los niveles de expresión y la actividad de dichos enzimas en el grano de polen y el pistilo del olivo durante su desarrollo, y durante la germinación in vitro e in vivo del polen. Obtener pruebas del papel biológico de dichos enzimas en la biología reproductiva de la planta, analizando la localización celular de los enzimas, su actividad, y la localización de sustratos y efectores potenciales durante la respuesta compatible e incompatible.
  5. Para desarrollar este objetivo general hemos formulado 4 objetivos específicos, que vamos a ver a continuación: Analizar el polimorfismo molecular y la posible presencia de diversas isoformas de SOD, catalasa, peroxidasa y NADPH oxidasa (NOX) en el grano de polen maduro y el pistilo de diferentes cultivares de olivo. Generar herramientas moleculares (anticuerpos, sondas, proteínas purificadas -bien nativas o de origen recombinante- y construcciones con “reporter genes”) correspondientes a las isoformas más relevantes de estos enzimas, para su posterior utilización en el análisis de la expresión génica y la determinación de la función biológica. Determinar los niveles de expresión y la actividad de dichos enzimas en el grano de polen y el pistilo del olivo durante su desarrollo, y durante la germinación in vitro e in vivo del polen. Obtener pruebas del papel biológico de dichos enzimas en la biología reproductiva de la planta, analizando la localización celular de los enzimas, su actividad, y la localización de sustratos y efectores potenciales durante la respuesta compatible e incompatible.
  6. Para desarrollar este objetivo general hemos formulado 4 objetivos específicos, que vamos a ver a continuación: Analizar el polimorfismo molecular y la posible presencia de diversas isoformas de SOD, catalasa, peroxidasa y NADPH oxidasa (NOX) en el grano de polen maduro y el pistilo de diferentes cultivares de olivo. Generar herramientas moleculares (anticuerpos, sondas, proteínas purificadas -bien nativas o de origen recombinante- y construcciones con “reporter genes”) correspondientes a las isoformas más relevantes de estos enzimas, para su posterior utilización en el análisis de la expresión génica y la determinación de la función biológica. Determinar los niveles de expresión y la actividad de dichos enzimas en el grano de polen y el pistilo del olivo durante su desarrollo, y durante la germinación in vitro e in vivo del polen. Obtener pruebas del papel biológico de dichos enzimas en la biología reproductiva de la planta, analizando la localización celular de los enzimas, su actividad, y la localización de sustratos y efectores potenciales durante la respuesta compatible e incompatible.
  7. Para desarrollar este objetivo general hemos formulado 4 objetivos específicos, que vamos a ver a continuación: Analizar el polimorfismo molecular y la posible presencia de diversas isoformas de SOD, catalasa, peroxidasa y NADPH oxidasa (NOX) en el grano de polen maduro y el pistilo de diferentes cultivares de olivo. Generar herramientas moleculares (anticuerpos, sondas, proteínas purificadas -bien nativas o de origen recombinante- y construcciones con “reporter genes”) correspondientes a las isoformas más relevantes de estos enzimas, para su posterior utilización en el análisis de la expresión génica y la determinación de la función biológica. Determinar los niveles de expresión y la actividad de dichos enzimas en el grano de polen y el pistilo del olivo durante su desarrollo, y durante la germinación in vitro e in vivo del polen. Obtener pruebas del papel biológico de dichos enzimas en la biología reproductiva de la planta, analizando la localización celular de los enzimas, su actividad, y la localización de sustratos y efectores potenciales durante la respuesta compatible e incompatible.
  8. Para desarrollar este objetivo general hemos formulado 4 objetivos específicos, que vamos a ver a continuación: Analizar el polimorfismo molecular y la posible presencia de diversas isoformas de SOD, catalasa, peroxidasa y NADPH oxidasa (NOX) en el grano de polen maduro y el pistilo de diferentes cultivares de olivo. Generar herramientas moleculares (anticuerpos, sondas, proteínas purificadas -bien nativas o de origen recombinante- y construcciones con “reporter genes”) correspondientes a las isoformas más relevantes de estos enzimas, para su posterior utilización en el análisis de la expresión génica y la determinación de la función biológica. Determinar los niveles de expresión y la actividad de dichos enzimas en el grano de polen y el pistilo del olivo durante su desarrollo, y durante la germinación in vitro e in vivo del polen. Obtener pruebas del papel biológico de dichos enzimas en la biología reproductiva de la planta, analizando la localización celular de los enzimas, su actividad, y la localización de sustratos y efectores potenciales durante la respuesta compatible e incompatible.
  9. Para desarrollar este objetivo general hemos formulado 4 objetivos específicos, que vamos a ver a continuación: Analizar el polimorfismo molecular y la posible presencia de diversas isoformas de SOD, catalasa, peroxidasa y NADPH oxidasa (NOX) en el grano de polen maduro y el pistilo de diferentes cultivares de olivo. Generar herramientas moleculares (anticuerpos, sondas, proteínas purificadas -bien nativas o de origen recombinante- y construcciones con “reporter genes”) correspondientes a las isoformas más relevantes de estos enzimas, para su posterior utilización en el análisis de la expresión génica y la determinación de la función biológica. Determinar los niveles de expresión y la actividad de dichos enzimas en el grano de polen y el pistilo del olivo durante su desarrollo, y durante la germinación in vitro e in vivo del polen. Obtener pruebas del papel biológico de dichos enzimas en la biología reproductiva de la planta, analizando la localización celular de los enzimas, su actividad, y la localización de sustratos y efectores potenciales durante la respuesta compatible e incompatible.
  10. Para desarrollar este objetivo general hemos formulado 4 objetivos específicos, que vamos a ver a continuación: Analizar el polimorfismo molecular y la posible presencia de diversas isoformas de SOD, catalasa, peroxidasa y NADPH oxidasa (NOX) en el grano de polen maduro y el pistilo de diferentes cultivares de olivo. Generar herramientas moleculares (anticuerpos, sondas, proteínas purificadas -bien nativas o de origen recombinante- y construcciones con “reporter genes”) correspondientes a las isoformas más relevantes de estos enzimas, para su posterior utilización en el análisis de la expresión génica y la determinación de la función biológica. Determinar los niveles de expresión y la actividad de dichos enzimas en el grano de polen y el pistilo del olivo durante su desarrollo, y durante la germinación in vitro e in vivo del polen. Obtener pruebas del papel biológico de dichos enzimas en la biología reproductiva de la planta, analizando la localización celular de los enzimas, su actividad, y la localización de sustratos y efectores potenciales durante la respuesta compatible e incompatible.
  11. Influencia de la contaminación ambiental El creciente desarrollo industrial y el aumento de la población en núcleos urbanos, ocasionan un deterioro del medio ambiente con graves repercusiones sobre la salud, especialmente afectados se encuentran los asmáticos, que incluso con valores de contaminación inferiores a los recomendados por la Agencia de Medio Ambiente, sufren exacerbaciones cada vez más intensas y frecuentes de su patología, hay estudios que demuestran la asociación entre hospitalizaciones y concentraciones de SO2, NO2, Ozono y Partículas de Escape Diesel (PED), situación que se agrava en el caso de los pacientes polínicos en época de polinización. Los contaminantes pueden actuar como transportadores de partículas polínicas procedentes del polen u otras partes de la planta; pueden aumentar la alergenicidad de los pólenes, haciéndolos más reactivos y actuando como coadyuvantes de la Respuesta Inmune; pueden inducir estrés oxidativo en el epitelio respiratorio, provocando una respuesta inflamatoria que puede desencadenar síntomas en enfermos alérgicos. Dióxido de Nitrógeno (NO2) El Dióxido de Nitrógeno, se forma como consecuencia de la reacción entre la luz solar y los hidrocarburos procedentes de las combustiones industriales y de cualquier tipo de motor, generándose mayor cantidad de Óxido de Nitrógeno cuanta mayor sea la temperatura de combustión. El NO2, muestra un efecto adicional para generar alteraciones de la función respiratoria en pacientes con asma, al producir un efecto oxidativo sobre las células epiteliales, alterándolas y aumentando los niveles de citocinas proinflamatorias. Ozono Se trata de un potente oxidante, y uno de los contaminantes más importantes de las ciudades soleadas y con altos niveles de contaminación, formándose por una reacción fotoquímica entre las radiaciones Ultravioletas y el NO2. El Ozono tiene efectos inflamatorios importantes sobre las vías respiratorias. Se ha demostrado que la exposición a Ozono, provoca una disminución de la capacidad pulmonar con un aumento de la reactividad bronquial frente a agentes broncoconstrictores específicos e inespecíficos. Partículas de Escape Diesel (PED) La mayor parte de la contaminación urbana, procede de la combustión de carburantes del tráfico rodado de vehículos, fundamentalmente de los motores diesel, generándose productos nocivos para la salud como son el monóxido de carbono, óxidos de nitrógeno, benceno y partículas de escape diesel. Las PED, constituyen el 90% de las partículas ambientales y están formadas por un núcleo de carbón sobre el que se depositan hasta 18000 componentes orgánicos de Alto Peso Molecular, con un tamaño que oscila entre 0,1 y 2,5µ. Producen un aumento de la respuesta inflamatoria en las vías respiratorias y en individuos atópicos aumentan la síntesis de IgE, por otro lado se ha observado una gran afinidad para unirse a alergenos polínicos, sobretodo de gramíneas, favoreciendo a nivel atmosférico la formación de aerosoles de partículas contaminantes-partículas polínicas.
  12. Influencia de la contaminación ambiental El creciente desarrollo industrial y el aumento de la población en núcleos urbanos, ocasionan un deterioro del medio ambiente con graves repercusiones sobre la salud, especialmente afectados se encuentran los asmáticos, que incluso con valores de contaminación inferiores a los recomendados por la Agencia de Medio Ambiente, sufren exacerbaciones cada vez más intensas y frecuentes de su patología, hay estudios que demuestran la asociación entre hospitalizaciones y concentraciones de SO2, NO2, Ozono y Partículas de Escape Diesel (PED), situación que se agrava en el caso de los pacientes polínicos en época de polinización. Los contaminantes pueden actuar como transportadores de partículas polínicas procedentes del polen u otras partes de la planta; pueden aumentar la alergenicidad de los pólenes, haciéndolos más reactivos y actuando como coadyuvantes de la Respuesta Inmune; pueden inducir estrés oxidativo en el epitelio respiratorio, provocando una respuesta inflamatoria que puede desencadenar síntomas en enfermos alérgicos. Dióxido de Nitrógeno (NO2) El Dióxido de Nitrógeno, se forma como consecuencia de la reacción entre la luz solar y los hidrocarburos procedentes de las combustiones industriales y de cualquier tipo de motor, generándose mayor cantidad de Óxido de Nitrógeno cuanta mayor sea la temperatura de combustión. El NO2, muestra un efecto adicional para generar alteraciones de la función respiratoria en pacientes con asma, al producir un efecto oxidativo sobre las células epiteliales, alterándolas y aumentando los niveles de citocinas proinflamatorias. Ozono Se trata de un potente oxidante, y uno de los contaminantes más importantes de las ciudades soleadas y con altos niveles de contaminación, formándose por una reacción fotoquímica entre las radiaciones Ultravioletas y el NO2. El Ozono tiene efectos inflamatorios importantes sobre las vías respiratorias. Se ha demostrado que la exposición a Ozono, provoca una disminución de la capacidad pulmonar con un aumento de la reactividad bronquial frente a agentes broncoconstrictores específicos e inespecíficos. Partículas de Escape Diesel (PED) La mayor parte de la contaminación urbana, procede de la combustión de carburantes del tráfico rodado de vehículos, fundamentalmente de los motores diesel, generándose productos nocivos para la salud como son el monóxido de carbono, óxidos de nitrógeno, benceno y partículas de escape diesel. Las PED, constituyen el 90% de las partículas ambientales y están formadas por un núcleo de carbón sobre el que se depositan hasta 18000 componentes orgánicos de Alto Peso Molecular, con un tamaño que oscila entre 0,1 y 2,5µ. Producen un aumento de la respuesta inflamatoria en las vías respiratorias y en individuos atópicos aumentan la síntesis de IgE, por otro lado se ha observado una gran afinidad para unirse a alergenos polínicos, sobretodo de gramíneas, favoreciendo a nivel atmosférico la formación de aerosoles de partículas contaminantes-partículas polínicas.
  13. InfluenInfluencia de las Tormentas Desde los años 80, se ha descrito la relación entre aparición de Asma y fenómenos tormentosos. La primera descripción fue en Birmingham, describiéndose posteriores epidemias en Londres, EEUU, Australia, Nápoles y Madrid. Todas la tormentas se produjeron en la época de polinización de las gramíneas y la mayoría de los pacientes afectos estaban sensibilizados al polen de gramíneas, sin embargo no todas las tormentas van seguidas de epidemias de Asma ni toda epidemia de Asma va precedida de una tormenta. Las tormentas se forman por la presencia de nubes del tipo cumulonimbos, que se desarrollan cuando en la atmósfera se producen fuertes corrientes de aire ascendente, al existir una masa de aire frío en las capas altas de la atmósfera y un sobrecalentamiento de la superficie terrestre o marítima. El aire que se ha calentado en la superficie asciende y arrastra grandes cantidades de granos de polen hacia las capas altas de la atmósfera, a medida que asciende el aire, se enfría y se condensa, formando gotas de agua o granizo. Esta humedad, produce una rotura osmótica del grano de polen que había ascendido y se liberan las partículas Submicrónicas, que descienden con las corrientes de aire frío que viajan hacia la superficie terrestre. cia de la contaminación ambiental El creciente desarrollo industrial y el aumento de la población en núcleos urbanos, ocasionan un deterioro del medio ambiente con graves repercusiones sobre la salud, especialmente afectados se encuentran los asmáticos, que incluso con valores de contaminación inferiores a los recomendados por la Agencia de Medio Ambiente, sufren exacerbaciones cada vez más intensas y frecuentes de su patología, hay estudios que demuestran la asociación entre hospitalizaciones y concentraciones de SO2, NO2, Ozono y Partículas de Escape Diesel (PED), situación que se agrava en el caso de los pacientes polínicos en época de polinización. Los contaminantes pueden actuar como transportadores de partículas polínicas procedentes del polen u otras partes de la planta; pueden aumentar la alergenicidad de los pólenes, haciéndolos más reactivos y actuando como coadyuvantes de la Respuesta Inmune; pueden inducir estrés oxidativo en el epitelio respiratorio, provocando una respuesta inflamatoria que puede desencadenar síntomas en enfermos alérgicos. Dióxido de Nitrógeno (NO2) El Dióxido de Nitrógeno, se forma como consecuencia de la reacción entre la luz solar y los hidrocarburos procedentes de las combustiones industriales y de cualquier tipo de motor, generándose mayor cantidad de Óxido de Nitrógeno cuanta mayor sea la temperatura de combustión. El NO2, muestra un efecto adicional para generar alteraciones de la función respiratoria en pacientes con asma, al producir un efecto oxidativo sobre las células epiteliales, alterándolas y aumentando los niveles de citocinas proinflamatorias. Ozono Se trata de un potente oxidante, y uno de los contaminantes más importantes de las ciudades soleadas y con altos niveles de contaminación, formándose por una reacción fotoquímica entre las radiaciones Ultravioletas y el NO2. El Ozono tiene efectos inflamatorios importantes sobre las vías respiratorias. Se ha demostrado que la exposición a Ozono, provoca una disminución de la capacidad pulmonar con un aumento de la reactividad bronquial frente a agentes broncoconstrictores específicos e inespecíficos. Partículas de Escape Diesel (PED) La mayor parte de la contaminación urbana, procede de la combustión de carburantes del tráfico rodado de vehículos, fundamentalmente de los motores diesel, generándose productos nocivos para la salud como son el monóxido de carbono, óxidos de nitrógeno, benceno y partículas de escape diesel. Las PED, constituyen el 90% de las partículas ambientales y están formadas por un núcleo de carbón sobre el que se depositan hasta 18000 componentes orgánicos de Alto Peso Molecular, con un tamaño que oscila entre 0,1 y 2,5µ. Producen un aumento de la respuesta inflamatoria en las vías respiratorias y en individuos atópicos aumentan la síntesis de IgE, por otro lado se ha observado una gran afinidad para unirse a alergenos polínicos, sobretodo de gramíneas, favoreciendo a nivel atmosférico la formación de aerosoles de partículas contaminantes-partículas polínicas.
  14. InfluenInfluencia de las Tormentas Desde los años 80, se ha descrito la relación entre aparición de Asma y fenómenos tormentosos. La primera descripción fue en Birmingham, describiéndose posteriores epidemias en Londres, EEUU, Australia, Nápoles y Madrid. Todas la tormentas se produjeron en la época de polinización de las gramíneas y la mayoría de los pacientes afectos estaban sensibilizados al polen de gramíneas, sin embargo no todas las tormentas van seguidas de epidemias de Asma ni toda epidemia de Asma va precedida de una tormenta. Las tormentas se forman por la presencia de nubes del tipo cumulonimbos, que se desarrollan cuando en la atmósfera se producen fuertes corrientes de aire ascendente, al existir una masa de aire frío en las capas altas de la atmósfera y un sobrecalentamiento de la superficie terrestre o marítima. El aire que se ha calentado en la superficie asciende y arrastra grandes cantidades de granos de polen hacia las capas altas de la atmósfera, a medida que asciende el aire, se enfría y se condensa, formando gotas de agua o granizo. Esta humedad, produce una rotura osmótica del grano de polen que había ascendido y se liberan las partículas Submicrónicas, que descienden con las corrientes de aire frío que viajan hacia la superficie terrestre. cia de la contaminación ambiental El creciente desarrollo industrial y el aumento de la población en núcleos urbanos, ocasionan un deterioro del medio ambiente con graves repercusiones sobre la salud, especialmente afectados se encuentran los asmáticos, que incluso con valores de contaminación inferiores a los recomendados por la Agencia de Medio Ambiente, sufren exacerbaciones cada vez más intensas y frecuentes de su patología, hay estudios que demuestran la asociación entre hospitalizaciones y concentraciones de SO2, NO2, Ozono y Partículas de Escape Diesel (PED), situación que se agrava en el caso de los pacientes polínicos en época de polinización. Los contaminantes pueden actuar como transportadores de partículas polínicas procedentes del polen u otras partes de la planta; pueden aumentar la alergenicidad de los pólenes, haciéndolos más reactivos y actuando como coadyuvantes de la Respuesta Inmune; pueden inducir estrés oxidativo en el epitelio respiratorio, provocando una respuesta inflamatoria que puede desencadenar síntomas en enfermos alérgicos. Dióxido de Nitrógeno (NO2) El Dióxido de Nitrógeno, se forma como consecuencia de la reacción entre la luz solar y los hidrocarburos procedentes de las combustiones industriales y de cualquier tipo de motor, generándose mayor cantidad de Óxido de Nitrógeno cuanta mayor sea la temperatura de combustión. El NO2, muestra un efecto adicional para generar alteraciones de la función respiratoria en pacientes con asma, al producir un efecto oxidativo sobre las células epiteliales, alterándolas y aumentando los niveles de citocinas proinflamatorias. Ozono Se trata de un potente oxidante, y uno de los contaminantes más importantes de las ciudades soleadas y con altos niveles de contaminación, formándose por una reacción fotoquímica entre las radiaciones Ultravioletas y el NO2. El Ozono tiene efectos inflamatorios importantes sobre las vías respiratorias. Se ha demostrado que la exposición a Ozono, provoca una disminución de la capacidad pulmonar con un aumento de la reactividad bronquial frente a agentes broncoconstrictores específicos e inespecíficos. Partículas de Escape Diesel (PED) La mayor parte de la contaminación urbana, procede de la combustión de carburantes del tráfico rodado de vehículos, fundamentalmente de los motores diesel, generándose productos nocivos para la salud como son el monóxido de carbono, óxidos de nitrógeno, benceno y partículas de escape diesel. Las PED, constituyen el 90% de las partículas ambientales y están formadas por un núcleo de carbón sobre el que se depositan hasta 18000 componentes orgánicos de Alto Peso Molecular, con un tamaño que oscila entre 0,1 y 2,5µ. Producen un aumento de la respuesta inflamatoria en las vías respiratorias y en individuos atópicos aumentan la síntesis de IgE, por otro lado se ha observado una gran afinidad para unirse a alergenos polínicos, sobretodo de gramíneas, favoreciendo a nivel atmosférico la formación de aerosoles de partículas contaminantes-partículas polínicas.