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Entomología Forense.
Los restos de un cuerpo en descomposición proveen un microhábitat temporario que ofrece cambios progresivos, suministrando recursos de alimento a una amplia gama de organismos (Goff, 1998), entre los que abundan los estadios inmaduros, quizás como consecuencia de lo efímero de este particular microambiente.  El tiempo que transcurre desde que se produce el deceso hasta la llegada de los primeros artrópodos depende de las especies (“species-specific”) y del micro-hábitat de cada cadáver (O´Flynn, 1993). Generalidades
La colonización de un cadáver está regida no sólo por factores autogénicos (producción de olores atractivos, temperatura de la descomposición, etc), sino también por factores alogénicos entre los que se destacan la temperatura ambiente, humedad, lluvia y abundancia de insectos (Galloway et al., 1989; Mann et al., 1990; Shean et al., 1993); estas variables están condicionadas por la estacionalidad, principalmente en las regiones templadas (Tantawi et al., 1996).
La rama de la entomología que estudia la fauna de insectos sobre un cadáver para estimar la fecha de la muerte es la  ENTOMOLOGÍA FORENSE  ( EF ). La fauna de invertebrados sobre cuerpos animales muertos está formada en gran proporción por  insectos; la forma más simple de aplicación forense está basada en el estudio de la secuencia con que los insectos que  aparecen sobre los cadáveres.
La  EF  es el estudio de los insectos y otros artrópodos hallados sobre cadáveres, a fin de fechar el deceso (determinación del Intervalo post-mortem) y cuando es posible, determinar circunstancias que lo rodearon o que lo siguieron (Oliva, 1997). Definición
Evolución histórica de la entomología forense. De los orígenes hasta el siglo XX. Desde la antigüedad se sabe que en los cadáveres expuestos  desarrollan gusanos, los  cuales por largo tiempo se han creído producto de la generación espontánea. El naturalista Redi (siglo XVII), demostró que los gusanos de los cadáveres no se generaban espontáneamente, sino que provenían de los huevos depositados por moscas y que se volverían a transformar en moscas adultas (Mégnin, 1894).  El informe médico-legal de Bergeret (1850) al tratar de datar el deceso de un neonato basándose sobre las larvas halladas en los restos, constituye la primera aplicación de la entomología forense (Benecke, 2001).
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Pierre Mégnin, correlacionó cada estado de la descomposición con los insectos que encontró; el sistema consideraba ocho etapas de la descomposición, llamadas légion o cuadrillas (Mégnin, 1894)
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
En los últimos años se ha estado aplicando técnicas de amplificación de ADN, con el fin de identificar (determinar) los insectos de esa manera (Sperling  et al. , 1994; Wells & King, 2001).  Por otra lado  La Entomotoxicología , disciplina que utiliza la capacidad de los insectos de guardar en la cutícula las sustancias que ingresen en su entorno, focalizándose en los tóxicos, los cuales también se encuentran en los puparios que pueden ser encontrados y analizados luego de muchos años (Miller  et al. , 1994).
Recién en la  última década del siglo XX; comenzaron las investigaciones en el Brasil dirigidas por el Dr. A. M. Souza, mientras que en 1993 en la Argentina lo hacía la Dra. Adriana Oliva; recién en 1996, ambos pudieron comunicar sus trabajos  entre si y al resto de la comunidad científica (Oliva, 1996; Souza & Linahares, 1996 a, b).   Desde entonces, se han realizado experimentos de campo en diferentes provincias Argentinas para aportar a un mejor conocimiento de las diferentes sucesiones en los distintos climas. La mayoría de estos experimentos esta bajo la dirección académica del Dr. Néstor Centeno que conjuntamente con sus becarios ha contribuido (y lo siguen haciendo), a un mejor conocimiento de las sucesiones faunísticas de la Argentina (Centeno, 2002; Centeno & Maldonado, 2002; Centeno  et al. , 2000 y 2002).  Entomología forense en Brasil y Argentina .
Sistema de clasificación Ecológico
Leclercq (1978) introduce un sistema de clasificación que refiere más a la función ecológica de cada especie. Necrófagos :  aquellos organismos que se alimentan directamente del cadáver muchos Diptera (Calliphoridae, Sarcophagidae, Muscidae, Fanniidae, Piophilidae, Phoridae y otras familias) y Coleoptera (Silphidae y Dermestidae). Necrófilos : Predadores y parasitoides que se alimentan de los necrófagos. Predadores: varias familias de Coleoptera (Silphidae, Cleridae, Staphylinidae, Histeridae), varias familias de Diptera (Stratiomyidae, especies aisladas de Calliphoridae y Muscidae). Parasitoides: varias familias de Hymenoptera (Braconidae, Pteromaliidae, etc); Coleoptera (Staphylinidae: Aleocharinae).
Omnívoros : Se alimentan indistintamente de los necrófilos y del propio cadáver.  Hymenoptera (Formicidae, Vespidae).  Oportunistas : Son aquellos organismos que usan el cadáver como una extensión de su propio hábitat natural, como es el caso de los Arachnida, Chilopoda y Diplopoda. Los grupos necrófagos más importantes son Calliphoridae  y Dermestidae. Las primeras dominan en las etapas fresca, enfisematosa y descomposición activa; en cambio, las segundas se incrementan durante la descomposición activa y reducción esquelética (Iannacone, 2003). Smith (1986) recopila más de 500 referencias bibliográficas, siempre respetando el sistema de Mégnin.
SINANTROPÍA Estas especies SINANTRÓPICAS son tolerantes de ambientes modificados por el hombre.
HEMISINANTRÓPICAS NO TOLERAN  las modificaciones humanas . Toleran  MEDIANAMENTE  las modificaciones humanas. ASINANTRÓPICAS
Etapas de la descomposición
Early & Goff (1986) proponen dividir el proceso de la descomposición en vertebrados en cinco etapas discretas, las cuales forman un patrón generalizado que se aplica a la mayoría de los estudios. Etapa fresca:  desde el momento de la muerte hasta que se hace evidente la distensión abdominal. Los primeros insectos que llegan al cadáver son moscas de las familias Calliphoridae y Sarcophagidae, que depositan sus huevos o larvas, según la familia, en las aberturas naturales de la cabeza y regiones anogenitales, así como en heridas cuando las hay. Etapa enfisematosa:  abdomen distendido por los gases producidos por las actividades metabólicas de las bacterias anaerobias. Los adultos de Calliphoridae muestran una fuerte atracción por esta etapa.
Etapa de putrefacción:  la piel se rompe, dejando escapar los gases. Predominan las masas de larvas de Diptera, como también los adultos y larvas de Coleoptera de las familias Staphylinidae e Histeridae; en la última etapa se observan grandes números de necrófagos y de predadores. Etapa post putrefacción:  restos reducidos a piel, cartílago y hueso. Los adultos y larvas de Coleoptera pasan a ser el grupo predominante en los hábitats xerófilos y mesófilos (Goff  et al. , 1993). En hábitats húmedos suelen ser desplazados por otros taxa de Diptera (Tullis & Goff, 1987). Etapa esquelética:  huesos y pelo. Presencia de ácaros en el suelo. Las variaciones de la fauna del suelo pueden ser detectables luego de meses o aun años,  dependiendo de las condiciones locales (Goff, 1998, 1991).
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],La datación del  intervalo post-mortem  ( PMI ) se basa en:
TECNICAS  DE  MUESTREO
Es fundamental mantener separadas las muestras tomadas de diferentes partes   del cuerpo.; ya que en diferentes regiones del cuerpo pueden encontrarse insectos de distintas especies y etapas del desarrollo (Payne, 1965). Es por estas razones que se hace imperativo mantener separadas las muestras para poder sacar conclusiones.  Las muestras fueron colocadas en tubos transparentes de buen cierre, rotulados de la siguiente forma: Rótulo interno: Escrito preferentemente en lápiz en papel de plano o de calcar. Rótulo externo: Etiqueta autoadhesiva con los mismos datos, también en lápiz. Protocolo para el muestreo.
El rótulo tanto interno como externo debe contener al menos: 1- Nº de autopsia y/o identificación del cadáver referencia pertinente. 2- Datos de hora fecha y localidad. 3- Poner de que parte del cuerpo fue tomada las muestras. 4- Datos de donde fue hallado el cuerpo (aire libre, habitación, entre otros)
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Se trasladaron las larvas destinadas a crianza al laboratorio. La crianza se realizó en frascos de vidrio 20 x 7 cm (alto x diámetro), que tenían en el fondo 6 cm de aserrín húmedo o turba de jardinería.  Metodología  de laboratorio Las larvas fueron colocadas dentro de estos frascos sobre carne picada, ubicada sobre un cubo de papel de aluminio que la aislaba del aserrín, pero que no impedía que las larvas se desplazaran hacia este último. Los frascos se taparon con trozos de voile para cortina Aserrín o turba de Jardinería  Voile  Cubo de papel de alumino  Rótulo  Esquema del frasco de cría
ELEMENTOS DE MUESTREO MANGA ("red"),para moscas adultas. Recipientes para colectar larvas y Coleopteros adultos. Aspirador para colectar adultos.   Pinzas de punta fina para muestreo de larvas Imágenes extraídas de catalogo2007-entomotaxis
 
PROTOCOLO PARA ESTUDIOS
Se sigue el protocolo sugerido por Goff 1998, con algunas modificaciones. El modelo animal fue  Sus scrofa  L (cerdo doméstico), de más de 25 Kg, sacrificados por método de carnicería. Los animales estaban separados por una distancia de al menos 50 metros, en ambientes diferentes. Para evitar la interferencia de carroñeros vertebrados, se colocaron los cerdos dentro de jaulas de exclusión.  Éstas se construyeron con tejido de alambre simple de 2,5 cm de malla. Cada esquina estaba sujeta.   Protocolo para estudios de descomposición .
Los entomólogos forenses, en el momento de diseñar sus experimentos, se encontraron con la dificultad de que la utilización de los cadáveres humanos no era posible por las legislaciones vigentes. Se buscó pues, un modelo animal tan semejante al cuerpo humano como fuera posible. Además, se buscó uniformar el tamaño de los animales, así como disminuir las dificultades para recobrar u observar los insectos cadavéricos, para lo cual se realizaron diversos experimentos con distintas especies de animales. Los resultados obtenidos se cotejaron con los informes de pericias forenses, y fue así que se estableció como modelo para los experimentos el uso de  Sus scrofa  L. (cerdo doméstico) (Payne, 1965). El modelo experimental.
TERMINOS ENTOMOLÓGICOS ULITLES PARA LA DETERMINACION DE LAS ESPECIES Y LA DETERMINACION DEL IPM
Estructura general del insecto
Esquema general de la cabeza de un insecto
Diferentes tipos de desarrollo en insectos “ A”  Hemimetábolos o de metamorfosis incompleta. Ej: grillo, cucaracha, entre otros “ B”  Holometábolos o de metamorfosis completa. Ej: mariposa, moscas, entre otros
Morfología Dípteros (moscas y mosquitos)
Detalle de la cabeza Espiráculo anterior Gena Cabeza Tórax Patas Abdomen Ala Ojos compuestos Antenas
Ala Tórax Caliptra Detalle del ala
Típico ciclo de vida de un Diptero Pupa
Piezas bucales o esqueleto céfalo-faringeo de la larva de Dípteros
Consomyiops fulvicrura  (Robineau-Desvoidy, 1830)  Fotos obtenidas de: TRIGO, A. V. 2006. Descripción de las larvas II, III y el pupario de  Compsomyiops fulvicrura  (Diptera: Calliphoridae).   Rev. Soc. Entomol.  Argent.  65 (1-2): 87-99   Esqueleto cefalo-faríngeo; espiráculo anterior, posterior y espinas larvales
Pupario Corte transversal del Pupario en donde se observa el Díptero adulto dentro
Morfología Coleópteros (escarabajos) abdomen Tórax Cabeza Élitros
Esquema de un Coleóptero en vuelo Élitros. Son el 1º para de alas que se han esclerotizado 2º par de alas membranosas. Siempre protegidas por los élitros
Algunos ejemplos de diversidad en el Orden Coleoptera
Detalla de la Cabeza y el protórax de un Coleóptero Antena Ojos   compuestos Protórax
Diferentes clases de larvas de Coleópteros
Larvas de  Oxelytrum erythrurum Larva de  Dermestes maculatus

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Entomología Forense: Etapas de descomposición y sucesión de insectos

  • 2. Los restos de un cuerpo en descomposición proveen un microhábitat temporario que ofrece cambios progresivos, suministrando recursos de alimento a una amplia gama de organismos (Goff, 1998), entre los que abundan los estadios inmaduros, quizás como consecuencia de lo efímero de este particular microambiente. El tiempo que transcurre desde que se produce el deceso hasta la llegada de los primeros artrópodos depende de las especies (“species-specific”) y del micro-hábitat de cada cadáver (O´Flynn, 1993). Generalidades
  • 3. La colonización de un cadáver está regida no sólo por factores autogénicos (producción de olores atractivos, temperatura de la descomposición, etc), sino también por factores alogénicos entre los que se destacan la temperatura ambiente, humedad, lluvia y abundancia de insectos (Galloway et al., 1989; Mann et al., 1990; Shean et al., 1993); estas variables están condicionadas por la estacionalidad, principalmente en las regiones templadas (Tantawi et al., 1996).
  • 4. La rama de la entomología que estudia la fauna de insectos sobre un cadáver para estimar la fecha de la muerte es la ENTOMOLOGÍA FORENSE ( EF ). La fauna de invertebrados sobre cuerpos animales muertos está formada en gran proporción por insectos; la forma más simple de aplicación forense está basada en el estudio de la secuencia con que los insectos que aparecen sobre los cadáveres.
  • 5. La EF es el estudio de los insectos y otros artrópodos hallados sobre cadáveres, a fin de fechar el deceso (determinación del Intervalo post-mortem) y cuando es posible, determinar circunstancias que lo rodearon o que lo siguieron (Oliva, 1997). Definición
  • 6. Evolución histórica de la entomología forense. De los orígenes hasta el siglo XX. Desde la antigüedad se sabe que en los cadáveres expuestos desarrollan gusanos, los cuales por largo tiempo se han creído producto de la generación espontánea. El naturalista Redi (siglo XVII), demostró que los gusanos de los cadáveres no se generaban espontáneamente, sino que provenían de los huevos depositados por moscas y que se volverían a transformar en moscas adultas (Mégnin, 1894). El informe médico-legal de Bergeret (1850) al tratar de datar el deceso de un neonato basándose sobre las larvas halladas en los restos, constituye la primera aplicación de la entomología forense (Benecke, 2001).
  • 7.
  • 8.
  • 9. En los últimos años se ha estado aplicando técnicas de amplificación de ADN, con el fin de identificar (determinar) los insectos de esa manera (Sperling et al. , 1994; Wells & King, 2001). Por otra lado La Entomotoxicología , disciplina que utiliza la capacidad de los insectos de guardar en la cutícula las sustancias que ingresen en su entorno, focalizándose en los tóxicos, los cuales también se encuentran en los puparios que pueden ser encontrados y analizados luego de muchos años (Miller et al. , 1994).
  • 10. Recién en la última década del siglo XX; comenzaron las investigaciones en el Brasil dirigidas por el Dr. A. M. Souza, mientras que en 1993 en la Argentina lo hacía la Dra. Adriana Oliva; recién en 1996, ambos pudieron comunicar sus trabajos entre si y al resto de la comunidad científica (Oliva, 1996; Souza & Linahares, 1996 a, b). Desde entonces, se han realizado experimentos de campo en diferentes provincias Argentinas para aportar a un mejor conocimiento de las diferentes sucesiones en los distintos climas. La mayoría de estos experimentos esta bajo la dirección académica del Dr. Néstor Centeno que conjuntamente con sus becarios ha contribuido (y lo siguen haciendo), a un mejor conocimiento de las sucesiones faunísticas de la Argentina (Centeno, 2002; Centeno & Maldonado, 2002; Centeno et al. , 2000 y 2002). Entomología forense en Brasil y Argentina .
  • 12. Leclercq (1978) introduce un sistema de clasificación que refiere más a la función ecológica de cada especie. Necrófagos : aquellos organismos que se alimentan directamente del cadáver muchos Diptera (Calliphoridae, Sarcophagidae, Muscidae, Fanniidae, Piophilidae, Phoridae y otras familias) y Coleoptera (Silphidae y Dermestidae). Necrófilos : Predadores y parasitoides que se alimentan de los necrófagos. Predadores: varias familias de Coleoptera (Silphidae, Cleridae, Staphylinidae, Histeridae), varias familias de Diptera (Stratiomyidae, especies aisladas de Calliphoridae y Muscidae). Parasitoides: varias familias de Hymenoptera (Braconidae, Pteromaliidae, etc); Coleoptera (Staphylinidae: Aleocharinae).
  • 13. Omnívoros : Se alimentan indistintamente de los necrófilos y del propio cadáver. Hymenoptera (Formicidae, Vespidae). Oportunistas : Son aquellos organismos que usan el cadáver como una extensión de su propio hábitat natural, como es el caso de los Arachnida, Chilopoda y Diplopoda. Los grupos necrófagos más importantes son Calliphoridae y Dermestidae. Las primeras dominan en las etapas fresca, enfisematosa y descomposición activa; en cambio, las segundas se incrementan durante la descomposición activa y reducción esquelética (Iannacone, 2003). Smith (1986) recopila más de 500 referencias bibliográficas, siempre respetando el sistema de Mégnin.
  • 14. SINANTROPÍA Estas especies SINANTRÓPICAS son tolerantes de ambientes modificados por el hombre.
  • 15. HEMISINANTRÓPICAS NO TOLERAN las modificaciones humanas . Toleran MEDIANAMENTE las modificaciones humanas. ASINANTRÓPICAS
  • 16. Etapas de la descomposición
  • 17. Early & Goff (1986) proponen dividir el proceso de la descomposición en vertebrados en cinco etapas discretas, las cuales forman un patrón generalizado que se aplica a la mayoría de los estudios. Etapa fresca: desde el momento de la muerte hasta que se hace evidente la distensión abdominal. Los primeros insectos que llegan al cadáver son moscas de las familias Calliphoridae y Sarcophagidae, que depositan sus huevos o larvas, según la familia, en las aberturas naturales de la cabeza y regiones anogenitales, así como en heridas cuando las hay. Etapa enfisematosa: abdomen distendido por los gases producidos por las actividades metabólicas de las bacterias anaerobias. Los adultos de Calliphoridae muestran una fuerte atracción por esta etapa.
  • 18. Etapa de putrefacción: la piel se rompe, dejando escapar los gases. Predominan las masas de larvas de Diptera, como también los adultos y larvas de Coleoptera de las familias Staphylinidae e Histeridae; en la última etapa se observan grandes números de necrófagos y de predadores. Etapa post putrefacción: restos reducidos a piel, cartílago y hueso. Los adultos y larvas de Coleoptera pasan a ser el grupo predominante en los hábitats xerófilos y mesófilos (Goff et al. , 1993). En hábitats húmedos suelen ser desplazados por otros taxa de Diptera (Tullis & Goff, 1987). Etapa esquelética: huesos y pelo. Presencia de ácaros en el suelo. Las variaciones de la fauna del suelo pueden ser detectables luego de meses o aun años, dependiendo de las condiciones locales (Goff, 1998, 1991).
  • 19.
  • 20. TECNICAS DE MUESTREO
  • 21. Es fundamental mantener separadas las muestras tomadas de diferentes partes del cuerpo.; ya que en diferentes regiones del cuerpo pueden encontrarse insectos de distintas especies y etapas del desarrollo (Payne, 1965). Es por estas razones que se hace imperativo mantener separadas las muestras para poder sacar conclusiones. Las muestras fueron colocadas en tubos transparentes de buen cierre, rotulados de la siguiente forma: Rótulo interno: Escrito preferentemente en lápiz en papel de plano o de calcar. Rótulo externo: Etiqueta autoadhesiva con los mismos datos, también en lápiz. Protocolo para el muestreo.
  • 22. El rótulo tanto interno como externo debe contener al menos: 1- Nº de autopsia y/o identificación del cadáver referencia pertinente. 2- Datos de hora fecha y localidad. 3- Poner de que parte del cuerpo fue tomada las muestras. 4- Datos de donde fue hallado el cuerpo (aire libre, habitación, entre otros)
  • 23.
  • 24. Se trasladaron las larvas destinadas a crianza al laboratorio. La crianza se realizó en frascos de vidrio 20 x 7 cm (alto x diámetro), que tenían en el fondo 6 cm de aserrín húmedo o turba de jardinería. Metodología de laboratorio Las larvas fueron colocadas dentro de estos frascos sobre carne picada, ubicada sobre un cubo de papel de aluminio que la aislaba del aserrín, pero que no impedía que las larvas se desplazaran hacia este último. Los frascos se taparon con trozos de voile para cortina Aserrín o turba de Jardinería Voile Cubo de papel de alumino Rótulo Esquema del frasco de cría
  • 25. ELEMENTOS DE MUESTREO MANGA ("red"),para moscas adultas. Recipientes para colectar larvas y Coleopteros adultos. Aspirador para colectar adultos. Pinzas de punta fina para muestreo de larvas Imágenes extraídas de catalogo2007-entomotaxis
  • 26.  
  • 28. Se sigue el protocolo sugerido por Goff 1998, con algunas modificaciones. El modelo animal fue Sus scrofa L (cerdo doméstico), de más de 25 Kg, sacrificados por método de carnicería. Los animales estaban separados por una distancia de al menos 50 metros, en ambientes diferentes. Para evitar la interferencia de carroñeros vertebrados, se colocaron los cerdos dentro de jaulas de exclusión. Éstas se construyeron con tejido de alambre simple de 2,5 cm de malla. Cada esquina estaba sujeta. Protocolo para estudios de descomposición .
  • 29. Los entomólogos forenses, en el momento de diseñar sus experimentos, se encontraron con la dificultad de que la utilización de los cadáveres humanos no era posible por las legislaciones vigentes. Se buscó pues, un modelo animal tan semejante al cuerpo humano como fuera posible. Además, se buscó uniformar el tamaño de los animales, así como disminuir las dificultades para recobrar u observar los insectos cadavéricos, para lo cual se realizaron diversos experimentos con distintas especies de animales. Los resultados obtenidos se cotejaron con los informes de pericias forenses, y fue así que se estableció como modelo para los experimentos el uso de Sus scrofa L. (cerdo doméstico) (Payne, 1965). El modelo experimental.
  • 30. TERMINOS ENTOMOLÓGICOS ULITLES PARA LA DETERMINACION DE LAS ESPECIES Y LA DETERMINACION DEL IPM
  • 32. Esquema general de la cabeza de un insecto
  • 33. Diferentes tipos de desarrollo en insectos “ A” Hemimetábolos o de metamorfosis incompleta. Ej: grillo, cucaracha, entre otros “ B” Holometábolos o de metamorfosis completa. Ej: mariposa, moscas, entre otros
  • 35. Detalle de la cabeza Espiráculo anterior Gena Cabeza Tórax Patas Abdomen Ala Ojos compuestos Antenas
  • 36. Ala Tórax Caliptra Detalle del ala
  • 37. Típico ciclo de vida de un Diptero Pupa
  • 38. Piezas bucales o esqueleto céfalo-faringeo de la larva de Dípteros
  • 39. Consomyiops fulvicrura (Robineau-Desvoidy, 1830) Fotos obtenidas de: TRIGO, A. V. 2006. Descripción de las larvas II, III y el pupario de Compsomyiops fulvicrura (Diptera: Calliphoridae). Rev. Soc. Entomol. Argent. 65 (1-2): 87-99 Esqueleto cefalo-faríngeo; espiráculo anterior, posterior y espinas larvales
  • 40. Pupario Corte transversal del Pupario en donde se observa el Díptero adulto dentro
  • 41. Morfología Coleópteros (escarabajos) abdomen Tórax Cabeza Élitros
  • 42. Esquema de un Coleóptero en vuelo Élitros. Son el 1º para de alas que se han esclerotizado 2º par de alas membranosas. Siempre protegidas por los élitros
  • 43. Algunos ejemplos de diversidad en el Orden Coleoptera
  • 44. Detalla de la Cabeza y el protórax de un Coleóptero Antena Ojos compuestos Protórax
  • 45. Diferentes clases de larvas de Coleópteros
  • 46. Larvas de Oxelytrum erythrurum Larva de Dermestes maculatus