1. Microscopia
Introducción
La microscopia es el conjunto de técnicas y métodos destinados a hacer
visible los objetos de estudio que por su pequeñez están fuera del rango de
resolución del ojo normal.
Si bien el microscopio es el elemento central de la microscopía, el uso del
mismo requiere para producir las imágenes adecuadas, de todo un conjunto de
métodos y técnicas afines pero extrínsecas al aparato. Algunas de ellas son,
técnicas de preparación y manejo de los objetos de estudio, técnicas de salida,
procesamiento, interpretación y registro de imágenes, etc.
Exceptuando técnicas especiales como las utilizadas en microscopio de fuerza
atómica, microscopio de iones en campo y microscopio de efecto túnel, la
microscopía generalmente implica la difracción, reflexión o refracción de algún
tipo de radiación incidente en el sujeto de estudio.
Antecedentes
Ya los antiguos sabían que los espejos curvos y las esferas de cristal llenas de
agua aumentaban el tamaño de las imágenes. En las primeras décadas del
siglo XVII se iniciaron experiencias con lentes (así llamadas por tener forma de
lentejas) a fin de lograr el mayor aumento posible. Para ello se basaron en otro
instrumento con lentes que obtuvo gran éxito, el telescopio, usado por primera
vez con fines astronómicos por Galileo, en 1609. Antes de esta fecha, los
seres vivientes más pequeños conocidos eran insectos diminutos.
Naturalmente, se daba por sentado que no existía organismo alguno más
pequeño. Los instrumentos para aumentar la visión de los objetos, o
microscopios (la palabra griega significa “para ver lo pequeño”) comenzaron a
usarse progresivamente. Por primera vez la biología se ampliaba y extendía
gracias a un mecanismo que llevaba el sentido de la vista humana más allá de
sus límites naturales. Así, los naturalistas podían describir en detalle los
pequeños organismos, cosa de otro modo imposible, y los anatomistas podían
descubrir estructuras hasta entonces invisibles. Existían dos tipos de
microscopios: el sencillo y el compuesto; el sencillo no era más que una lente
montada, el compuesto estaba formado por una combinación de lentes y fue
inventado por Zacarías Jansen en Holanda. Los detalles sobre el primer
microscopio no son claros. Anton van Leeuwenhoek (Holanda, 1632-1723), un
vendedor de telas, aficionado a pulir lentes, logró fabricar lentes lo
suficientemente poderosas como para observar bacterias, hongos y protozoos,
a los que llamó "animálculos"
El primer microscopio compuesto fue desarrollado por Robert Hooke. A partir
de éste, los avances tecnológicos permitieron llegar a los modernos

2. microscopios de nuestro tiempo, los que existen de varios tipos y son usados
con diferentes fines.
Microscopio óptico (MO)
El tipo de microscopio más utilizado es el microscopio óptico, que se sirve de la
luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio óptico
más simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas
lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan
microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se
consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios ópticos pueden aumentar
un objeto por encima de las 2.000 veces.
El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el
ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo está
compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto
examinado. Las lentes de los microscopios están dispuestas de forma que el
objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a través del
ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total
del microscopio depende de las longitudes focales de los dos sistemas de
lentes.
El equipamiento adicional de un microscopio consta de un armazón con un
soporte que sostiene el material examinado y de un mecanismo que permite
acercar y alejar el tubo para enfocar la muestra. Los especímenes o muestras
que se examinan con un microscopio son transparentes y se observan con una
luz que los atraviesa, y se suelen colocar sobre un rectángulo fino de vidrio. El
soporte tiene un orificio por el que pasa la luz. Bajo el soporte se encuentra un
espejo que refleja la luz para que atraviese el espécimen. El microscopio puede
contar con una fuente de luz eléctrica que dirige la luz a través de la muestra.
Existen distintas variantes de observación en MO: (de campo brillante
coloreado): El material a observar se colorea con colorantes específicos que
aumentan el contraste y revelan detalles que no aprecian de otra manera
Microscopía de campo brillante: el material se observa sin coloración. La luz
pasa directamente y se aprecian detalles que estén naturalmente coloreados.
El microscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de un
cono hueco concentrado sobre el espécimen. El campo de visión del objetivo
se encuentra en la zona hueca del cono de luz y sólo recoge la luz que se
refleja en el objeto. Por ello las porciones claras del espécimen aparecen como
un fondo oscuro y los objetos minúsculos que se están analizando aparecen
como una luz brillante sobre el fondo. Esta forma de iluminación se utiliza para
analizar elementos
Microscopía en contraste de fase: se usa principalmente para aumentar el
contraste entre las partes claras y oscuras de las células sin colorear. Es ideal
para especímenes delgados, o células aisladas.

3. El microscopio de fase ilumina el espécimen con un cono hueco de luz, como
en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el microscopio de fase el
cono de luz es más estrecho y entra en el campo de visión del objetivo, que
contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz y
provoca un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de
iluminación provoca variaciones minúsculas en el índice de refracción de un
espécimen transparente, haciéndolo visible. Este tipo de microscopio es muy
útil a la hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en
biología y medicina
Nomarski, microscopía diferencial de contraste de interferencia
(DIC). Utiliza dos rayos de luz polarizada y las imágenes combinadas aparecen
como si la célula estuviera proyectando sombras hacia un lado. Fue diseñado
para observar relieves de especímenes muy difíciles de manejar, es muy
utilizado en los tratamientos de fertilización in-vitro actuales. DIC se usa cuando
el espécimen es muy grueso para usar contraste de fases
Microscopía de fluorescencia: una sustancia natural en las células o un
colorante fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz de luz,
emitiendo parte de la energía absorbida como rayas luminosos: esto se conoce
como fluorescencia. La luz fluorescente de mayor longitud de onda se observa
como si viniera directamente del colorante.