1. Citometría de Flujo
No es capaz de analizar tejidos que tienen uniones estrechas. Análisis multiparamétrico en base a
análisis unicelular, capaz de analizar miles de células por segundo.
Qué información?
Relativa al tamaño
la complejidad interna o granuladidad
Relativa a la presencia o no y magnitud de fluorescencia
Funciona con un sistema de fluidos para alinear las células, sistema óptico que las ilumina y recoge
señales, sistema capaz de convertir la señal en valor y un sistema de análisis de datos.
Primero se alinean las células. Flujo laminar, dos columnas de líquido y gas, van una al lado de la
otra a un flujo constante, las dos columnas van a tender a mantenerse separadas, si se varían los
flujos relativos provoca turbulencia. En el citómetro hay una columna de líquido central y una
periférica que hace que la central no se disperse. Por fuerzas hidrodinámicas (pensando que en la
columna caben justas las células) las células van a ponerse al centro de la columna a menos que
haya turbulencia, así se alinean.
Fuente de luz. Se iluminan las células con un haz de láser, láser porque es unidireccional, es una
luz monocromática. Cuando se ilumina una célula que va pasando, parte de los fotones la van a
atravesar y no dan información, pero una fracción se va a desviar un poco en la dirección y esa
desviación (ángulo cerrado) se detecta con un multiplicador (desviación anterógrada). La cantidad
de fotones que se desvían tienen que ver con el tamaño celular.
Desviación lateral: los fotones se encuentran con algo que los desvía 90° y eso depende de la
cantidad de organelos y objetos posea la célula, de la complejidad.
Se grafica la información en una escala lineal, donde se pueden distinguir grupos por la dispersión
en los que se identifican los tipos celulares.
Luz fluorescente
Capacidad de detectar fluorocromo, molécula excitable por el choque de un fotón al ganar energía
y perderla rápidamente generando un segundo fotón con menos energía que el primero. Si el láser
cambia de color hay fluorocromo.
Generar un anticuerpo monoclonal contra una molécula que nos interese. Ventaja, ver
simultáneamente en una célula múltiples marcadores, hasta 12 fluorocromos diferentes
simultáneamente. Deben ser excitados por la misma longitud de onda pero que los segundos
fotones sean diferentes entre sí.

2. Cuantificación de un pulso de voltaje. Es más fácil cuantificar la “luz”, porque genera un área de
pulso que lo facilita.
Sistema óptico, usa espejos dicroicos (deja pasar la luz de una cierta longitud y refleja las otras).
Se puede graficar unidimensionalmente (histograma), o gráfico cartesiano clásico (representación
simultánea de dos parámetros). Escala logarítimca.
Análisis de resultados.
Preparación, anticuerpos monoclonales , se eliminan los Gr y suspensión de células marcadas.
Hemopatías Malignas
Caracterización inmunofenotípica:
Enfermedad minima residual en enfermedades tumorales.
Una patología frecuente es un ganglio, la mayoría cuadros inflamatorios/infecciosos. Tomar
muestra analizarla en el citómetro. “La normalidad” en las células es variable. La
maduración/diferenciación es un proceso dinámico que puede llevar a errores si no es
considerado.
(CD34 marcador de stemcells)
No tiene patología clonal (tumoral) si en el ganglio hay células maduras.
Linfomas, tumores malignos de los linfocitos, no es una sola enfermedad, hay más de 80 tipos de
linfomas con diferentes comportamientos, pero pueden llevar a errores. Las clasificaciones se
basan más que nada en la morfología.
Leucemia linfática crónica, enfermedad no tan fea como suena, en general le da a gente mayor.
Los pacientes se mueren con la enfermedad pero no dé. Tiene el mismo patrón histológico que
linfoma de células del manto y ocurre por una mutación genética, traslocación entre cromosoma
11 y 14, hace que la ciclina d1 se active, que es muchísimo más mortal.
El método permite caracterizar y diferenciar de mejor manera las enfermedades.
Leucemia de células velludas, linfoma de bajo grado, si se trata como otros linfomas no va a
responder bien. La mejor fórmula de diagnosticarla es la citometría.
Citometría de Flujo en leucemias agudas
Definidas históricamente por características morfológicas.
Caracterización celular
Citogenética: convencional y molecular

3. Inmunofenotipo: pronóstico
Las células tumorales ocupan espacios normalmente en blanco en los gráficos de la citometría por
sus formas y características aberrantes.
Ejemplos varios, blahblahblah… es muy importante.
Protocolos terapéuticos
Enfermedad mínima residual: cuando un paciente tiene una enfermedad tumoral clínicamente
evidente, se estima que la cantidad de celulas tumorales que tiene esta entre 10^11- 10^12 en
remisión completa puede tener 10^9 y no se ve. La remisión se define en el microscopio como
<5% de células tumorales.
Técnicas diferentes como seguimiento molecular y citometria. Valor predictivo negativo muy alto,
diferenciar los que tienen riesgo mayor de los que tienen riesgo bajo para diferenciar
tratamientos.