Citometria de flujo

1. FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
Tema: Citometria de flujo
Docente: Dr. Yuri Leónidas Ponce De Leon
Alumno :
UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO
Semestre
2021-l

2. CITOMETRÍA DE FLUJO

3. CITOMETRÍA DE FLUJO
La citometría de flujo es una
tecnología biofísica basada en
la utilización de luz láser,
empleada en el recuento y
clasificación de células según
sus características
morfológicas, presencia de
biomarcadores, y en la
ingeniería de proteínas La citometría de flujo es una técnica utilizada
en forma rutinaria en muchos centros de salud
para el diagnóstico y seguimiento de muchas
enfermedades tales como las leucemias,
granulomatosis crónica, y SIDA

5. HISTORIA
El primer dispositivo de citometría de flujo basado en fluorescencia (ICP
11) fue desarrollado en 1968 por Wolfgang Göhde de la Universidad de
Münster, y declarado en la patente de Alemania Nº 1815352 el 18 de
diciembre de 1968
Origen del nombre de la técnica
En la 5.ª Conferencia sobre Citometría Automatizada
de la American Engineering Foundation realizada en
Pensacola, Florida en 1976 -ocho años después de
la presentación del primer citómetro de flujo
fluorescente (1968)- se acordó utilizar el nombre de
citometría de flujo, un término que rápidamente
ganó popularidad.

6. PRINCIPIO
Una fuente emisora de luz
monocromática, usualmente un
haz de luz láser (A) envía un rayo
que es colimado (L1) y enfocado
(L2) por medio de lentes sobre la
cámara de flujo laminar (C), luego
de atravesar la cámara el rayo de
luz directa es detenido por una
pantalla (s), mientras que la luz
dispersada es enfocada por otra
lente (L3) sobre un fotodiodo (D1),
esto constituye el detector de
dispersión frontal (FSC)

7. CITÓMETROS DE FLUJO
1.- La celda de flujo laminar
2.- Un sistema de medición, los más
comúnmente utilizados son la medición de
la impedancia o conductividad (principio
Coulter) y los sistemas ópticos.
3.- Un sistema de iluminación formado ya
sea por lámparas de alta luminosidad
4.- Un detector y un conversor de señales
ADC
5.- Un sistema de amplificación, lineal o
logarítmico.
Un ordenador para el análisis de las
Un citómetro de flujo tiene cinco componentes principales:

8. ANÁLISIS DE
DATOS
Análisis computacional
Los sistemas
automatizados de
identificación podrían,
potencialmente, ayudar a
encontrar poblaciones
extremadamente
pequeñas, raras, y
ocultas. Los métodos
automatizados más
representativos incluyen
al FLOCK
Los datos generados
por los citómetros de
flujo pueden ser
dibujados en relación a
una variable, en forma
de histograma, o en
gráficos de puntos
(dot-plot) de dos
dimensiones y dos o
más variables, o incluso
en gráficos

9. CLASIFICACIÓN DE CÉLULAS
ACTIVADAS POR FLUORESCENCIA
FACS
Esta técnica provee un método
para la clasificación y selección
de células provenientes de una
mezcla de varias poblaciones
en dos o más contenedores de
a una célula por vez, según las
características particulares de
dispersión y fluorescencia de
cada célula.

10. MARCADORES
Marcadores fluorescentes de unión covalente: Isoticianato de fluoresceína,
picoeritrina, rodamina, rojo texas, cianinas.19​
Marcadores fluorescentes de unión no covalente: Hoechst, DAPI, Naranja de
acridina, yoduro de propidio, rh12. Los marcadores fluorescentes son
sensibles al medio ambiente.
Marcadores fluorescentes
Puntos cuánticos
A veces se utilizan puntos cuánticos en lugar de los
tradicionales fluoróforos debido a que poseen un
pico de emisión mucho más estrecho.

11. PARÁMETROS USUALMENTE
MEDIDOS
Se utiliza para confirmar el diagnóstico de leucemia linfática crónica
Se utiliza para confirmar el diagnóstico de la enfermedad rara Hemoglobinuria Paroxística Nocturna (HPN)
Volumen y complejidad morfológica de células
Pigmentos biológicos tales como la clorofila o ficoreritrina
Contenido total de ADN (análisis del ciclo celular, cinética celular, proliferación celular, ploidía, aneuploidía,
endoreduplicación, etc.)
Contenido total de ARN
Variación en el número de copias de ADN (por medio de la tecnología Flow-FISH o BACs-on-Beads)
Análisis cromosómico y separación (construcción de librerías, tinción de cromosomas, etc)
Expresión y localización de proteínas
Modificaciones proteicas, fosfoproteínas
Presencia de productos transgénicos in vivo, particularmente demostración de la presencia de la Proteína verde
La tecnología de la citometría de flujo tiene
aplicaciones en numerosos campos, incluyendo la
biología molecular, inmunología, biología vegetal y
marina. Tiene una amplia aplicación en medicina
APLICACION
ES