El informe aborda la técnica de electroforesis de gel de agarosa para el análisis y separación de ADN genómica de bacterias. Se detallan los objetivos, materiales y métodos utilizados, así como los resultados obtenidos que demuestran la eficacia de la técnica. Además, se enfatiza la importancia del uso del fotodocumentador de geles para la visualización y análisis de las bandas de ADN.

1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental
BIOTECNOLOGÍA
INFORME DE LABORATORIO
“ ELECTROFORESIS DE GELES DE AGAROSA - ANÁLISIS DE ADN
GENÓMICO DE BACTERIAS”
DOCENTE
Dr. HEBERT SOTO GONZALES
PRESENTADO POR:
ENRIQUEZ CHAMBI, BRIANA LIZETH
MANZANO LAURA, JUAN JOSÉ
MANZANO LAURA, LUIS GUSTAVO
FIÑO LAQUIHUANACO, YADIRA MAYDELLI
CICLO:
VII
Ilo - Moquegua, Perú
2024

2. ÍNDICE
I. INTRODUCCIÓN................................................................................................................ 3
II. OBJETIVOS........................................................................................................................4
2.1. Objetivo General........................................................................................................... 4
2.2. Objetivo Específico.......................................................................................................4
III. MARCO TEÓRICO..........................................................................................................4
2.1. Electroforesis................................................................................................................4
IV. MATERIALES Y MÉTODOS.......................................................................................... 5
A. Materiales...................................................................................................................... 5
B. Metodología...................................................................................................................10
V. RESULTADOS...................................................................................................................12
VI. CONCLUSIONES........................................................................................................... 14
VII. FUENTES BIBLIOGRÁFICAS........................................................................................ 15
VIII. ANEXO........................................................................................................................... 16

3. I. INTRODUCCIÓN
La electroforesis es una técnica esencial en el análisis de biomoléculas, especialmente ADN,
ARN y proteínas, que permite su separación en función de su tamaño y carga eléctrica. Para
realizar esta técnica, se utiliza un set de electroforesis que consiste en un tanque donde se
coloca el gel de agarosa o poliacrilamida y se aplica una corriente eléctrica. Las moléculas
cargadas migran a través del gel hacia el electrodo opuesto, moviéndose a distintas
velocidades dependiendo de su tamaño y carga. En el caso del ADN y ARN, el gel suele
teñirse con agentes intercalantes fluorescentes, como bromuro de etidio o GelRed, que
facilitan su posterior visualización. (Electroforesis De ADN, n.d.)
Una vez completada la corrida electroforética, el siguiente paso es observar y documentar los
resultados, para lo cual se utiliza un fotodocumentador de geles. Este equipo está diseñado
para capturar imágenes del gel bajo una luz ultravioleta o visible, resaltando las moléculas
marcadas. Los fotodocumentadores modernos permiten obtener imágenes de alta resolución,
que pueden ser analizadas para medir la intensidad y el tamaño de las bandas, facilitando así
la cuantificación y comparación de las muestras. Esto es especialmente útil en estudios de
genética, microbiología y bioquímica, donde la precisión en la detección y diferenciación de
moléculas es crucial.
La combinación del set de electroforesis y el fotodocumentador de geles hace posible realizar
estudios detallados sobre la composición genética de organismos, identificar
microorganismos o analizar la expresión de proteínas. Además, esta técnica es rápida,
relativamente económica y adaptable a una gran variedad de muestras, lo que la convierte en
una herramienta indispensable en laboratorios de investigación y diagnóstico. (Principios Y
Práctica De La Electroforesis En Gel De Agarosa, n.d.)

4. II. OBJETIVOS
2.1. Objetivo General
● Aplicar el procedimiento de electroforesis para la separación y análisis de
ADN, utilizando el set de electroforesis y el fotodocumentador de geles para
interpretar los resultados obtenidos.
2.2. Objetivo Específico
● Identificar los componentes y el funcionamiento del set de electroforesis y el
fotodocumentador de geles.
● Diferenciar las muestras de ADN (o proteínas) en el gel según sus
características de movilidad.
III. MARCO TEÓRICO
2.1. Electroforesis
La electroforesis es una técnica de laboratorio utilizada para separar
biomoléculas, como ácidos nucleicos (ADN y ARN) o proteínas, según su movilidad
en un campo eléctrico. Esta separación ocurre en una matriz porosa, cuya
composición varía según el tipo de biomolécula que se desea analizar. Para ácidos
nucleicos, se emplea generalmente un gel de agarosa, mientras que para proteínas se
usa poliacrilamida. La electroforesis es ampliamente utilizada en biología molecular y
otras ciencias biológicas para análisis cuantitativos y cualitativos. (Electroforesis De
ADN, n.d.)

5. El método de electroforesis en gel de agarosa es específico para el análisis de
ácidos nucleicos y se caracteriza por el uso de una matriz de agarosa, un polisacárido
derivado de algas rojas, que forma un gel poroso al solidificarse. Este gel actúa como
filtro, permitiendo que las moléculas de ADN migran a través de él bajo la influencia
de un campo eléctrico. La velocidad de migración depende del tamaño y la carga de
cada molécula, facilitando la separación de fragmentos de distintos tamaños. La
concentración de agarosa en el gel determina el tamaño de los poros, ajustándose
según el tamaño de los fragmentos de ADN que se desean analizar, con
concentraciones típicas de 0.5% a 2% para lograr resoluciones adecuadas
IV. MATERIALES Y MÉTODOS
A. Materiales
MATERIALES
IMÁGENES
AGAROSA al 2%
.

6. TAE
agarosa (sólido)
Bandeja de mini gel
transparente

7. Equipo de Electroforesis
Matraz
Balanza analítica

8. Colorantes para visualizar DNA
Micropipeta de 1 - 20 μL
Parafilm
Spin
(Arturito)

9. Probeta
Tips
Puertas de colada
(mini-sub GT)

10. B. Metodología
● Pesaje y preparación de las soluciones
Microondas

11. Primeramente se realiza el pesaje de la agarosa. y lo diluimos con la solución
TAE 1x.. Se proyecta preparar 100mL al 2% de gel de agarosa. Para ello pesamos 2g
de agarosa en un matraz. De la solución TAE 1x se mide 100 mL en una probeta del
mismo volumen. y vertemos al matraz para preparar la solución. Se rotula el matraz
(en este caso del número de grupo) y luego se calienta para que la solución se diluya
totalmente (usamos un microondas y programamos 2 minutos de calentamiento y se
deja enfriando).
● Armado de set de electroforesis:
Se coloca el molde para el gel de agarosa dentro de la celda y se conectan los
electrodos en la celda, luego se inserta el peine para que forme espacios para colocar
las muestras de ADN. Finalmente se vierte el gel de agarosa hasta la mitad del peine y
esperamos hasta que cambie de color y se solidifique.
Una vez solidificado, se retira el peine y se desmantelan los electrodos. Luego
se inunda el gel de agarosa con el Tampón 1x hasta que esté totalmente sumergido.
● Preparación de la muestra de ADN:
Se pega con cinta el papel film sobre la mesa de trabajo y se analiza los
patrones de ADN (el colorante de AND y la escalera) que ayudarán a identificar la
muestra objetivo y se coloca los patrones en la centrifuga “MiniSpin” hasta los 150
rpm.
Seleccionamos la muestra de ADN proporcionada por el laboratorio de
Biotecnología del grupo de investigación “BIOMIB”. En este caso se analizó la Vibrio
sp.

12. ● Vertido de los patrones ADN y de la muestra:
Se extrae 3 uL en la micropipeta del patrón escalera 1kb en los espacios
producidos anteriormente con el peine dentro del gel.
Nuevamente se extrae 4ul de colorante y se coloca sobre el papel film en 6
gotas distintas, seguido a eso extraemos 3ul de muestra de ADN y colcamos en cada
gota hasta homogeneizar.
Se configura la micropipeta a 7ul y se extrae 7ul del papel film y se coloca en
cada orificio del gel de agarosa previamente preparado.
Finalmente tapamos la celda y colocamos los cables en sus polos respectivos
(negro negativo, rojo positivo). Se enciende y se programa a 100v y se espera 1 hora
con 15 minutos aproximadamente. Luego de la hora programada se lleva la placa con
el gel de agarosa al fotodocumentador de geles para obtener los resultados.
V. RESULTADOS
Tras completar el tiempo estimado para la separación de moléculas mediante electroforesis,
se obtuvieron los resultados visualizados en la imagen, lo que nos permite afirmar que el
procedimiento fue llevado a cabo de manera correcta, logrando una separación exitosa. Es
importante destacar que, una vez obtenidos los resultados, es aconsejable realizar una
comparación para obtener un análisis más preciso.
Ilustración. Resultados en el fotodocumentador de geles

13. Ilustración. Movilización de geles

14. VI. CONCLUSIONES
El uso del set de electroforesis permitió la separación eficiente de las muestras de
ADN, demostrando un proceso adecuado y la correcta visualización de los resultados
en el gel. Posteriormente, el fotodocumentador de geles facilitó la captura y análisis
de las bandas generadas, mostrando con claridad las diferencias de movilidad en las
moléculas de ADN.
El fotodocumentador de geles, como se observa en la imagen, es una herramienta
esencial para interpretar los resultados de la electroforesis. Este equipo permite
visualizar las bandas de ADN después de su separación, confirmando su correcta
operación tras el proceso electroforético. Su uso es vital para obtener un registro

15. visual confiable de los resultados y hacer comparaciones precisas entre las diferentes
muestras.
Gracias a la tecnología utilizada en el proceso, fue posible observar la separación de
las muestras de ADN en función de sus características de movilidad en el gel de
agarosa. El análisis de las bandas permite distinguir claramente las diferentes
moléculas de ADN según su tamaño y carga, lo cual es fundamental para una correcta
interpretación de los resultados.
VII. FUENTES BIBLIOGRÁFICAS
Electroforesis de ADN. (n.d.). Electroforesis de ADN. Retrieved October 22, 2024, from
https://walebuble.com/wp-content/uploads/Electroforesis.pdf
Principios y práctica de la electroforesis en gel de agarosa. (n.d.). Edvotek.com. Retrieved
October 25, 2024, from https://www.edvotek.com/site/pdf/101sp.pdf

16. VIII. ANEXO
Ilustración 1: Reactivos
Ilustración 2: Pesado de la Agarosa

17. Ilustración 3: Medición de tampón para mezclar la disolución
Ilustración 4: Colocación a la microondas para el calentamiento
Ilustración 5: Baño maría a la disolución

18. Ilustración 6: Colocación del peine de electroforesis
Ilustración 7: Colocación de la agarosa
Ilustración 8: Electroforesis de la agarosa

19. Ilustración 9: Colocación de tampón TAE