1. O. Aguilar, D. Polo-Jiménez, E. Ropain.
EXTRACCION DE ADN NUCLEAR A PARTIR DE TEJIDO DE PIE Y MANTO DE
Cittarium pica POR PRECIPITACION CON CLORURO DE SODIO Y DETERMINACION
DE CALIDAD MEDIANTE ANALISIS ELECTROFORETICO DE TIPO HORIZONTAL
NUCLEAR DNA EXTRACTION FROM FOOT AND MANTLE TISSUE OF Cittarium pica
BY PRECIPITATION WITH SODIUM CHLORIDE AND QUALITY DETERMINATION BY
ELECTROPHORETIC ANALYSIS HORIZONTAL
Aguilar-Ospino Oscar1, Polo-Jiménez Deimer2, Ropain-Hernández Eber3.
1,2,3
Universidad del Magdalena, Facultad de Ciencias Básicas, Programa de Biología.
aguilarospinooscar@hotmail.com, dimrpolo@gmail.com, eberiwel80@hotmail.com
RESUMEN
El objetivo de este análisis de laboratorio fue realizar una extracción de ADN de tejidos del
manto y del pie de la especie Cittarium pica y verificar la calidad del mismo mediante
electroforesis horizontal en gel de agarosa 0.8%, mediante el método de sal común
(cloruro de sodio). El procedimiento consistió en tomar 2 muestras 1,5 mg de tejido del pie
y del manto respectivamente y se rotularon (P1, P2, M1, M2) aplicar el protocolo de sal
común para extracción, suministrado por el docente. La calidad del ADN se verificó
mediante gel de agarosa al 0.8%, en cámara de electroforesis horizontal a 80V durante 30
minutos sumergida en tampón TAE 1X, con tinción de bromuro de etidio. El resultado
muestra que solo la muestra de manto M1 fue la única con suficiente material genético
como para correr en el gel. Se concluye que debió haber mayor tiempo de incubación
posterior a la añadidura de NaCl [5M].
PALABRAS CLAVE: Método de sal común, Electroforesis horizontal, Gel de agarosa
0.8%, Extracción de ADN, Cittarium pica.
ABSTRACT
The objective of this lab was to conduct a DNA extraction from the mantle tissue of the foot
and the species Cittarium pica and verify its quality by horizontal electrophoresis on 0.8%
agarose gel, by the method of common salt (chloride sodium). The procedure was to take
two 1.5 mg samples of tissue of the foot and mantle respectively and labeled (P1, P2, M1,
M2) to implement the protocol for extracting salt, provided by the teacher. DNA quality was
verified by agarose gel 0.8%, in horizontal electrophoresis chamber 80V immersed for 30
minutes in 1X TAE buffer with ethidium bromide staining. The result shows that only the

2. O. Aguilar, D. Polo-Jiménez, E. Ropain.
mantle sample M1 was the only one with enough genetic material to run on the gel. We
conclude that it must have greater incubation time after the addition of NaCl [5M].
KEY WORDS: Salt method, Electrophoresis horizontal 0.8% agarose gel, DNA extraction,
Cittarium pica.
INTRODUCCIÓN mediante el uso de alcoholes.
(Cummings, 1994)
El análisis de la molécula de ADN
Despues de la extracción de ADN lo
constituye una herramienta muy valiosa
común es verificar su calidad y cantidad.
que ha permitido delinear estrategias
El proceso mas sencillo de realizar se
aplicadas a la investigación básica y al
denomina electroforesis. (Rotureau et al,
diagnostico de innumerables entidades
2006). La electroforesis de ácidos
de origen genético, basando esto en el
nucleicos es el método habitual para
principio de que la molécula es única en
separar, identificar y purificar moléculas o
cada individuo (excepto en gemelos
fragmentos de DNA y RNA. En los
monocigoticos) y contiene toda la
tampones habitualmente utilizados, los
información necesaria para el desarrollo
ácidos nucleicos están cargados
y función de los organismos. (Falcon et
negativamente y migran hacia el ánodo.
al, 2007).
Cada molécula aporta una carga
negativa (procedente del grupo fosfato),
El ADN puede ser extraído de muchos por lo que la relación carga/tamaño es
tipos de materiales biológicos y el éxito prácticamente constante e idéntica para
del análisis molecular depende de su todas las moléculas, independientemente
adecuado aislamiento en términos de de su tamaño (un nucleótido tendrá la
cantidad, calidad y pureza; es necesario misma movilidad que un fragmento de
separarlo del resto de componentes doble cadena de 800pb o uno de 5kb).
celulares así como del material no (Aljanabi, 1997). Se lleva a cabo en geles
biológico que pueda estar presente. de agarosa o poliacrilamida. Ambos
(Cummings, 1994). Los protocolos de soportes son restrictivos para los ácidos
extracción buscan eliminar o diluir nucleicos, de modo que los diferentes
potentes inhibidores de reacciones de fragmentos (al tener la misma relación
amplificación que eviten o dificulten carga/tamaño), migran en función de su
análisis posteriores. (Liu et al, 2004) tamaño y/o conformación química.
El proceso general de aislamiento Los geles de agarosa (en cubetas
involucra tres pasos: primero, la lisis de horizontales) se utilizan generalmente
las membranas celulares, mediante el para separar fragmentos grandes de
uso de buffer específicos y altas DNA (500pb-10Mb); Utilizando agarosas
temperaturas; segundo, la degradación de distintas concentraciones (distinto
de las proteínas por incubación con grado de reticulación) pueden separarse
proteinasa K y/o sales saturadas; tercero, fragmentos de hasta 50kb aplicando un
la extracción del ADN y su precipitación

3. O. Aguilar, D. Polo-Jiménez, E. Ropain.
campo eléctrico constante. La pureza entrada de polvo. En caso dado de que
de la agarosa y de la solución se evapore algo de la solución se puede
tampón (TAE o TBE) puede variar completar el volumen con solución
según la finalidad del ensayo. tampón limpia.(Duina-Posso, 2008)
(Westermeier, 1997). Es posible
reutilizar una solución de agarosa El objetivo de este ejercicio de
para fines de una simple visualización laboratorio fue realizar una extracción de
de algún producto de PCR. No se debe ADN de tejidos del manto y del pie de la
reutilizar cuando se va a cuantificar ADN especie Cittarium pica mediante el
ni a extraer bandas a partir del gel. Para método de sal común (cloruro de sodio) y
reutilizar la solución de agarosa se verificar la calidad del mismo mediante
recomienda guardar el gel en un envase electroforesis horizontal en gel de
con tapa, esto evita la evaporación y la agarosa 0.8%.
MATERIALES Y MÉTODOS un nuevo tubo previamente esterilizado y
se le adicionaron 600µl de alcohol etílico
Extracción absoluto frio para precipitación. Por
El procedimiento consistió en tomar y inversión se agito alrededor de 30-40
rotular 2 muestras 1,5 mg de tejido del veces y se incubo durante alrededor de
pie y del manto respectivamente de un 15 minutos a una temperatura de -20°C
individuo de la especie antes para luego centrifugarlo a 14.000 rpm
mencionada y fragmentarlos con ayuda durante 10 minutos con el fin de
precipitar el ADN.
de un bisturí en un tubo eppendorf de
1.5µl previamente esterilizado. Con el fin
de desnaturalizar componente biológico
diferente al ADN se adicionaron 300µl de Verificación por electroforesis
solución lisis y 1µl de proteínasa K y se horizontal
sometió a incubación a 65°C durante 1
hora. Con la ayuda de un vortex se agito, La calidad del ADN se verificó mediante
se agregaron 300µl de NaCl [5M] y geles de agarosa al 0.8%, en cámara de
nuevamente se agito con el vortex electroforesis horizontal a 80V durante
durante 10 segundos. 30 minutos sumergida en tampón TAE
1X, con tinción de bromuro de etidio. El
Posterior a este proceso se sometió a las marcador de corrida usado fue azul de
muestras a centrifugación durante 15 bromofenol. Para la lectura se utilizo un
minutos con el propósito de separar el transiluminador UVP BioDoc en donde
ADN de las proteínas y otros residuos. una banda nítida indicaría que la
Esto ocasiona que se formen dos capas extracción fue positiva.
dentro del tubo, una de las cuales, el
sobrenadante, contiene el material
genético. Se transfirió el sobrenadante a

4. O. Aguilar, D. Polo-Jiménez, E. Ropain.
Tabla 1. Materiales de laboratorio y reactivos utilizados durante los procedimientos de
extracción y verificación.
Extracción de ADN Electroforesis horizontal
Micropipetas Calculadora
Material fungible (Puntas, gradillas de plástico, Cámara de electroforesis horizontal y
tubos de 1.5 ml.) accesorios
Pinzas y bisturí Micropipetas de 1-10 uL
Mechero Puntas descartables de 1-10 uL
Vortex Lamina de papel parafina
Microcentrifuga Solución de Agarosa 0,8%
Baño de María Buffer TAE 1X para la corrida
Refrigerador Fuente de Poder
Solución lisis Material Biológico
Proteinasa K Tejido extraído de espécimen cultivado en
Homogenizadores el Laboratorio de Moluscos y Microalgas
RNAsa de la Universidad del Magdalena.
Cloruro de sodio (NaCl) [5M]
Alcohol etílico absoluto y al 75%
Buffer TE
Agua bidestilada y autoclavada
Papel absorbente
RESULTADOS electroforesis horizontal solo “corrió” la
N° 1 del manto (M1).
Como se observa en la Figura 1, de las
cuatro muestras sometidas a
Figura 1. Registro fotográfico de una corrida electroforética de muestras de pie y manto de
Cittarium pica para verificación de calidad de ADN. Carriles M1 y M2: Muestras de manto; P1 y P2:
muestras del pie.

5. O. Aguilar, D. Polo-Jiménez, E. Ropain.
con mayor fuerza por unidad de área.
Sambrook et al (1989) econtraron que un
DISCUSIÓN mayor esfuerzo de fragmentación
mecánica de tejidos duros ofrece una
mejor liberación de células al medio y por
Este ejercicio de laboratorio demostró la lo tanto mejores rendimientos.
efectividad de la extracción de ADN
mediante el protocolo de sal común, De acuerdo con los resultados de este
desarrollado. Este es un método simple, ejercicio de laboratorio., se concluyo la
reproducible, económico y no necesidad de someter a un mayor tiempo
contaminante, fácil de utilizar para la de incubación a las muestras, posterior a
obtención de material genético a partir de la adición de NaCl 5M y alcohol etílico,
tejidos de Cittarium pica. respectivamente. En este sentido,
autores como Miesfeld (1999) y CIMMYT
Es de anotar, que los resultados (2006) proponen tiempos de incubación
obtenidos con el método de extracción de 1 hora para obtener mayor ADN en la
por sal común se compararon con los precipitación.
resultados para los mismos tejidos de la
misma especie pero mediante la Teniendo en cuenta los anteriores
metodología de kits comerciales y se resultados se recomienda aplicar e
identificar nuevas estrategias para lograr
observo que a partir del manto se
obtienen mejor calidad de ADN y mejores una extracción eficiente y de mejor
corridas en el proceso de verificación por calidad a partir de este tipo de muestras;
electroforesis horizontal. (Ver Figura 1). Tales como mayor esfuerzo de
fragmentación mecánica a tejidos duros y
Sin embargo, se observa también que la mayor tiempo de incubación a las
muestra P2 del método de kits muestras posterior a la adición de NaCl
comerciales alcanzo a correr en el carril 5M y alcohol etílico. De igual forma, se
del gel de agarosa especificado para elucida que posiblemente sea mas
esta. Esto indica que haya hecho falta eficiente ir directamente al manto para
someter a un proceso de destrucción realizar procesos de extracción en ves
mecánica del tejido por mayor tiempo y del pie.
AGRADECIMIENTOS apoyo logístico, el suministro de insumos
y por la cesión de un espacio para la
Agradecimientos al personal de apoyo realización del presente ejercicio de
del Laboratorio de Genética Molecular de laboratorio.
la Universidad del Magdalena por el

6. O. Aguilar, D. Polo-Jiménez, E. Ropain.
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