El documento detalla la historia y evolución del microscopio desde su invención en 1610, destacando los avances en óptica y mecánica que han permitido aumentar la resolución y eficacia en la observación de especímenes biológicos. Se describe también la importancia de diferentes tipos de microscopios, como el electrónico y el de fluorescencia, así como su estructura y funcionamiento técnico. Finalmente, se ofrecen recomendaciones para el cuidado y mantenimiento del microscopio, resaltando su valor como herramienta científica crucial.

1. Blgo. Herbert Larry Flores Reátegui

2. Desde los inicios de la microscopia, los investigadores vienen
desarrollando métodos cada vez más sensibles, eficaces y con
mejor resolución.
Al principio debieron enfrentarse a los problemas de aberraciones
ópticas, imágenes borrosas y pobre desarrollo de lentes, los
cuales se mantuvieron hasta mediados del siglo XIX que
aparecieron los lentes objetivos que reducían con una apertura
numérica entre 0.65 y 1.25.

3. Estos avances se iniciaron con los reportes sobre los métodos de
iluminación que propuso el profesor August Kölher, en 1893, y que
sentaron las bases de la microfotografía moderna.
En las últimas décadas se ha incrementado la aplicación de la
microscopía óptica en los laboratorios de investigación de una
amplia variedad de disciplinas Biológicas.

4. El rápido desarrollo de diferentes
métodos como los de fluorescencia,
contraste de fases y de campo oscuro
entre otros, que sumados a los avances
en la digitalización y análisis de
imágenes, han permitido a los
microscopistas obtener resultados
rápidos, cuantificables y confiables de
una gran variedad de especimenes
biológicos.

5. El microscopio se invento, hacia 1610, por Galileo, según los
italianos, o por Jansen, en opinión de los holandeses.
La palabra microscopio fue utilizada por primera vez por los
componentes de la "Accademia dei Lincei" una sociedad científica
a la que pertenecía Galileo y que publicaron un trabajo sobre la
observación microscópica del aspecto de una abeja

6. Sin embargo las primeras publicaciones importantes en el campo
de la microscopia aparecen en 1660 y 1665 cuando Malpighi
prueba la teoría de Harvey sobre la circulación sanguínea al
observar al microscopio los capilares sanguíneos y Hooke publica
su obra Micrographia.
A mediados del siglo XVII un comerciante holandés,
Leenwenhoek, utilizando microscopios simples de fabricación
propia describió por primera vez protozoos, bacterias,
espermatozoides y glóbulos rojos.

7. Durante el siglo XVIII el microscopio sufrió diversos adelantos
mecánicos que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso
aunque no se desarrollaron mejoras ópticas.
Las mejoras mas importantes de la óptica surgieron en 1877
cuando Abbe publica su teoría del microscopio y por encargo de
Carl Zeiss mejora la microscopía de inmersión sustituyendo el
agua por aceite de cedro lo que permite obtener aumentos de
2000.

8. A principios de los años 30 se había alcanzado el límite teórico
para los microscopios ópticos no consiguiendo estos, aumentos
superiores a 500X o 1000X sin embargo existía un deseo científico
de observar los detalles de estructuras celulares (núcleo,
mitocondria etc.). El microscopio electrónico de transmisión fue el
primer tipo de microscopio electrónico desarrollado este utiliza un
haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra
consiguiendo aumentos de 100.000 X.

10. Un microscopio es un instrumento que amplifica una imagen y
permite la observación de mayores detalles de los posibles a
simple vista. El microscopio más simple es una lente de aumento o
un par de anteojos.
Teóricamente la máxima resolución que se puede alcanzar es de
0,2 µm, dada por una luz con longitud de onda de 540 nm, la cual
pasa por un filtro verde (muy sensible por el ojo humano) y con
objetos condensadores adecuados. El ocular aumenta la imagen
producida por el objetivo, pero no puede aumentar la resolución.

11. Se puede definir a la palabra microscopio como un elemento o
instrumento que nos facilita la tarea de observar objetos que
tienen como característica principal ser demasiado pequeños para
ser vistos por nuestros ojos. Existen distintos tipos de
microscopios, por ende cada uno de ellos posee una función y
característica diferente

12. - Microscopio simple o lupa: lente convergente situada entre el
ojo y el objeto.
- Microscopio compuesto: formado por 2 sistemas de lentes:
oculares y objetivos.
- Microscopio moderno: produce una imagen aumentada e
invertida.

13. Microscopio simple: el microscopio más simple es una lente
convergente, la lupa (o microscopio estereoscópico).
El objeto se coloca entre la lente y el foco, de modo que la imagen
es virtual y está a una distancia que es la distancia mínima de
visón nítida, alrededor de 25 cm. Consta de una base, en la que
se sitúa la platina, y de la que emerge una columna que soporta
las lentes y el mando de enfoque.

14. Sólo sirve para exámenes
superficiales (disección de
animales, observación de colonias,
detección de quistes de
parásitos,…). Se consigue un
número de aumentos entre 4 y 60.

15. Microscopio de campo luminoso u
óptico compuesto: imágenes oscuras
frente al campo luminoso. Permite el
estudio de las estructuras internas de
la muestra, para lo cual ésta debe ser
dispuesta en una fina capa que puede
ser atravesada por la luz.

16. Microscopio de fluorescencia: la fluorescencia es la propiedad
que tienen ciertas sustancias de emitir, cuando son iluminadas por
una radiación de L corta, otra radiación de L más larga.
Consta de una fuente de luz muy potente y un filtro de excitación
que sólo deja pasar la radiación ultra violeta deseada.
Ésta, tras interaccionar con la muestra, es de nuevo filtrada,
dejando pasar solamente la luz fluorescente hacia los oculares.

21. Pie o Base: es el apoyo de las demás piezas del microscopio.
El pie debe ser sólido y pesado para asegurar su estabilidad.
Columna o Brazo: Este elemento relaciona el tubo del
microscopio con el pie; sostiene la platina y el condensador y de
ella se agarrará el microscopio cuando se traslada durante los
trabajos. En algunos microscopios la columna es móvil

23. En algunos microscopios el tubo del ocular
es inclinado y se mantiene fijo, en este caso
se mueve la platina.
Tubo del Ocular: Colocado en la parte superior del microscopio,
donde están acoplados los oculares, que pueden tener
movimiento vertical, con ayuda de una cremallera sobre la
columna.

25. Revólver o Disco Giratorio: Está debajo del tubo ocular donde
están acoplados los objetivos, presenta movimiento giratorio para
facilitar el cambio de un objetivo a otro.
Platina: Es una placa que puede ser cuadrada, circular o
rectangular, con un orificio central que permite el paso de la luz a
través de ella. Su función es sostener las placas con los
preparados biológicos que se van observar

28. Carro: es un dispositivo ubicado sobre la platina, cuya función es
sujetar y mover la placa que se va a estudiar. Posee dos tornillos
que permiten movimientos horizontales (hacia adelante, hacia
atrás, hacia la derecha y hacia la izquierda) del portaobjeto.
Cuando la platina carece del anterior dispositivo, lleva dos
soportes para fijar las placas llamadas ganchos o uñas.

30. Mecanismos de Movimiento: Integrado por:
• Tornillo Macrométrico: Acerca o aleja rápidamente el objetivo del preparado a
observar; su función es lograr un enfoque más o menos claro del objeto.
• Tornillo Micrométrico: Acerca o aleja el objetivo del preparado, pero lentamente,
permite desplazamientos muy finos de la platina o del tubo del ocular.
Durante la observación y enfoque este tornillo debe estarse
moviendo permanentemente; su función es darle nitidez al
enfoque.

32. Parte óptica
Esta integrada por los objetivos, oculares y el aparato de
iluminación (espejo, diafragma, condensador y filtros).
Estos elementos son los que permiten la iluminación, ampliación y
la visión aumentada del objetivo.

34. Objetivo: Es la pieza más importante del microscopio. Ellos se
acoplan mediante roscas estándar al revólver y pueden ser
cambiados de posición con sólo rotarlos.
Reciben el nombre de objetivos porque son los lentes que están
más cerca del objeto. La mayoría de los microscopios tienen tres o
cuatro objetivos.

35. Las lentes de los objetivos son de aumentos diversos, los más
usados son: objetivos de pequeños aumentos 3.5x; 4x, 5x, 6x, 8x y
10x; objetivos de grandes aumentos 40x, 45x, 50x y objetivos de
inmersión 90x, 95x y 100x.
Las lentes de inmersión se emplean con aceite de inmersión para
conectar la lente frontal (lente inferior del objetivo) al porta-objeto.
Entre el objetivo y el objeto se produce una pérdida de luz por
reflexión que se corrige adicionando al preparado unas gotas de
aceite de cedro.

37. Ocular: Están colocados en la parte superior del tubo ocular. Está
formado por dos sistemas de lentes dispuestos de un cilindro. Su
finalidad es aumentar la imagen dada por el objetivo y
eventualmente corregir algunos defectos de la misma.
Reciben dicho nombre porque son las lentes que se encuentran
más cerca del ojo. Hay oculares de 3.5x; 5x; 6,3x; 10x; 12.5x; 15x;
20x y 25x.

39. El aumento de la imagen de un objeto observado a través de un
microscopio, se calcula multiplicando el número de aumento del
objetivo con el cual se está trabajando por el número de aumento
del ocular que se está utilizando.
Aparato de iluminación: Está conformado por la fuente de luz, el
diafragma, el condensador y los filtros.

40. Fuente de luz: Puede ser natural o artificial, cuando es natural
(solar) o procede de un foco luminoso situado fuera del
microscopio, un espejo recoge la luz del medio y la refleja a través
del objeto y del sistema de lentes.
La luz artificial la constituye generalmente un bombillo ubicado en
el microscopio y conectado a un circuito eléctrico de bajo voltaje.

41. Diafragma: Está ubicado entre la fuente de luz y el condensador,
inmediatamente debajo de la platina, su función es regular la
intensidad de luz que atraviesa el objeto.
El diafragma tiene una palanquita que al
moverla hacia delante o hacia atrás
agranda o achica el orificio central,
dejando pasar mayor o menor cantidad de
luz respectivamente.

42. Condensador: Es un elemento cónico que posee un sistema de
dos lentes convergentes que recogen o concretan los rayos
luminosos para enviarlos al objetivo por el agujero de la platina.
Existe un tornillo manual que permite guardar la altura del
condensador. Esta graduación es importante cuando se trabaja
con objetivos de gran aumento (40x, 100x), ya que en la medida
que se trabaja con éstos objetivos el condensador debe subirse.
Lo contrario sucede cuando se trabaja con objetivos de menor
aumento (4x, 10x).

44. Filtros: Entre la fuente de luz y el condensador de algunos
microscopios existe un portafiltros en el cual se puede colocar
filtros a voluntad del observador.
Los filtros son elementos de cuarzo o de vidrio, pueden ser de
color azul, amarillo o verde. Ellos interceptan el haz de rayos
luminosos antes de entrar al condensador, esto se hace con el
objeto de seleccionar un tipo de luz determinada para una
experiencia dada.

46. La luz: La luz es una forma de energía transportada
continuamente por el espacio a velocidades muy elevadas
(330.000 Km/s en el vacío).
La luz está formada por pequeños corpúsculos que salen de un
foco luminoso en forma de ondas.

47. El brillo de la luz es proporcional a la altura o amplitud de la onda y
su color depende de la longitud de ésta. La luz blanca está
constituida por una gama de colores del espectro visible, estos
colores son: rojo, anaranjado, amarillo, verde, azul y violeta.

49. Lentes: Las lentes son el componente más importante del
microscopio; se fabrican de vidrio u otros materiales
transparentes.
Pueden ser convexas o cóncavas en ambas superficies, planas en
una cara o tener cualquier combinación de éstas dos formas en su
superficie.

50. Las lentes son de dos tipos: positivas y negativas.
Lentes Positivas: Hacen converger los rayos de luz, es decir, los
concentra para formar una imagen real.
Lentes Negativas: Hacen divergir los rayos de luz, sin formar
ninguna imagen real.

53. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y
bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogió
correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas
condiciones.
Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas.
Comenzar la observación con el objetivo de 4x o colocar el de 10
aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.

54. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación,
empleando el tornillo macrométrico. Esto debe hacerse
mirando directamente y no a través del ocular.
a. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando
lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico
y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el
micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

55. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi
enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico
para lograr el enfoque fino.
Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es
preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la
operación.

56. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y
por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en
la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y
mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación
que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.

57. Empleo del objetivo de inmersión:
a. Bajar totalmente la platina.
b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el
círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y
donde habrá que echar el aceite.
Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio
camino entre éste y el de x40.

58. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo
de luz.
Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del
objetivo de inmersión.
Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta
que la lente toca la gota de aceite.
En ese momento se nota como si la gota se adosara al lente.

59. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de
trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima,
aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es
muy grande.
Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación,
ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues
se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo,
hay que bajar la platina y repetir la operación.

60. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la
platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el
revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la
platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en
posición de observación.
Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel
especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está
perfectamente limpio.

61. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor
aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte
mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y
dejarlo cubierto con su funda.
Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo
cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las
lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar
en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.

62. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian,
limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o un papel de
óptica.
No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está
utilizando el microscopio.
Después de utilizar el objetivo de inmersión, limpiar el aceite que
queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica. Pasar el
papel por la lente en un solo sentido y con suavidad.

63. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que
limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3). No hay que
abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos
disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.
No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio
(macrométrico, micrométrico, platina, revólver y condensador).

64. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo
siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la
lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo
por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a
través del ocular.
Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama
sobre ella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de
aceite, limpiarla con un paño humedecido en alcohol al 98 %.

65. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al
finalizar la sesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un
técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

66. El microscopio es un instrumento costoso y de precisión, con
muchas partes delicadas, por lo tanto, debemos darle el mejor
cuido posible. Si su Microscopio presenta algún defecto, consulte
con su profesor.
Las lentes del microscopio cuestan casi tanto como todas las
demás partes juntas. Mantenga las lentes limpias. No toque las
lentes con los dedos, ya que el sudor las daña. Nunca limpie las
lentes con otra cosa que no sea papel especial para lentes.

67. No permita que líquidos, especialmente ácidos o alcoholes, se
pongan en contacto con su microscopio.
Use siempre cubre-objetos cuando observe en agua u otros
líquidos
Localice siempre el objeto con el objetivo de menor aumento
Los sedimentos de grasa, el aceite de inmersión y los residuos de
éstos productos deben eliminarse inmediatamente con un poco de
disolvente como éter.

68. Nunca se debe emplear alcohol, ya que disuelve el cemento
utilizado en la fabricación de los lentes.
La limpieza final es más efectiva usando un poco de agua
destilada.
Cuando no se esté usando el microscopio, debe mantenerse
siempre cubierto con una funda.

69. Nunca se debe emplear alcohol, ya que disuelve el cemento
utilizado en la fabricación de los lentes.
La limpieza final es más efectiva usando un poco de agua
destilada.
Cuando no se esté usando el microscopio, debe mantenerse
siempre cubierto con una funda.

70. Al finalizar sus actividades de laboratorio, tenga en cuenta lo
siguiente:
• Antes de apagar la fuente de luz, llevar el dispositivo que regula
la intensidad luminosa hasta O (cero).
• Dejar el microscopio con el objetivo de menor aumento en la
posición de enfoque y la platina en su máxima posición
superior.
• Desenchufar el microscopio y colocarle la funda protectora.

71. Herbert Larry Flores Reátegui
Biólogo – Microbiólogo
DIRECCION
Jr. Lima Nº 208 II piso – oficina 09
Celular 977563430
E-mail: helarry@hotmail.com
www.laboratorioorionpuno.blogspot.com