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AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE
MICROORGANISMOS
CELULOLÍTICOS
Mg. Elena Luzgarda Quillama Polo
Escuela Profesional de Microbiología y Parasitología, FCB-
UNMSM
INTRODUCCION
Las celulasas son un grupo de enzimas producidas por las plantas (obviamente por MO también)
y por diversos microorganismos “celulolíticos”. Estas enzimas catalizan la hidrólisis de la
celulosa, el polisacárido más abundante de la naturaleza, en moléculas de glucosa libre.
La celulosa es un componente de la pared celular vegetal, resistente a la hidrólisis y por tanto a
la digestión. Este polisacárido, está formado por un polímero de unidades de glucosa unidos
mediante enlaces glucosídicos tipo β - 1,4. Formando como producto glucosas libres
La celulasa actúa rompiendo estos enlaces. Para la hidrólisis de la celulosa se necesita la acción
sinérgica de un grupo de celulasas. Este sistema, se compone de tres tipos de enzimas: la endo β-
1,4 glucanasa, la exo β – 1,4 glucanasa y la β – 1,4 glucosidasa.
Lo producen bacterias y hongos aeróbicos o anaeróbicos, mesófilos o termófilos. Los principales
microrganismos productores son: Trichoderma viridae (pueden ser capaces de eliminar a otros
hongos), Trichoderma reesei, Penicillium pinophilum, Fusarium solani, Sporotrichum
thermophile, ciertas especies de Cellulomonas, Cythophaga, Cellvibrio, Bacillus, etc.
Las celulasas de origen microbiano tienen aplicaciones en una gran variedad de industrias:
Industria agrícola, textil, de los detergentes, producción de biocombustibles, alimentaria, se usa
en la clarificación de jugos de frutas y vegetales, así como la producción de néctares y puré,
industria de los colorantes, extracción de aceite oliva entre otros.
A - Planta con crecimiento primario
B - Planta con crecimiento secundario
Estructura y composición de la pared vegetal
Con esta diapo checamos en donde
podemos encontrar el sustrato
(celulosa)
Las moléculas de glucosa están unidas
por enlace beta ,
Las exoglucanasas hidrolizan la parte no reductora, mientras que las endoglucanasas, son las que degradan en la parte interna. Una vez la celulosa es
degradada, tendremos celobiosa y celooligosacáridos (mayor a 2 celobiosas) , pero aun no es asimilible así, tons vienen las b glucosidasas
AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE MICROORGANISMOS
CELULOLITICOS
Esquema 1
Muestra: tierra de
cultivo, compost.
9ml de solución
salina
Medio MM1
(20 ml)
1 gr.
10-1
0.5 ml
Incubar a T° ambiente
en agitación por 7 a 12
días. Triturar el papel
en 1 ml de MM2
Medio MM2
1 ml
Incubar por 7 días a T° ambiente
Agar Mínimo
Incubar a 28°C por 5 a 7 días
Realizar coloración
Gram de los cultivos
en todas las etapas de
crecimiento.
Esquema 2
Muestra: desechos
agroindustriales.
1 gr. 9ml de solución
salina
10-1
0.5 ml
Medio Omeliansky
(20 ml)
Incubar a T° ambiente
de 7 a 12 días. Triturar el papel
en 1 ml de Medio
Omeliansky
por
Sembrar
estriado
Sembrar con pipeta
en cada uno de los
discos colocados en el
medio.
A. pochon con discos
de papel filtro
A. Pochon + CMC 0.5%
o Agar
Carboxi-
metil
celulosa
Incubar a 28°C por 5 a 7 días
Realizar coloración
Gram de los cultivos
en todas las etapas de
crecimiento.
Colonias de Cellulomonas fimi.
Actividad celulolitíca de Cellumonas spp.
Observación microscópica de Actinomyces
spp.
Cellulomonass fimi: Bacilo Gram positivo
Actividad celulolítica de Actinobacterias
Cepas de bacterias celulolíticas
Cytophaga spp : Bacilo Gram
negativo
• Actividad celulolitica de Cytophaga spp
Conservación de cepas a partir de colonia de
Pseudomonas fluorescens
Bacilos pequeños delgados de
Pseudomonas fluorescens
Diferentes especies de Trichoderma
spp.
Actividad celulolitica de Trichoderma spp
Selección de hongos aislados de bagazo de caña de azúcar con actividad celulasa sobre celulosa
cristalina
Mantenimiento de cepas microbianas
Chequeo de cepas microbianas.
Conservación de hongos a nivel de
laboratorio
• Mantenimiento de cepas fúngicas industriales
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  • 1. AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE MICROORGANISMOS CELULOLÍTICOS Mg. Elena Luzgarda Quillama Polo Escuela Profesional de Microbiología y Parasitología, FCB- UNMSM
  • 2. INTRODUCCION Las celulasas son un grupo de enzimas producidas por las plantas (obviamente por MO también) y por diversos microorganismos “celulolíticos”. Estas enzimas catalizan la hidrólisis de la celulosa, el polisacárido más abundante de la naturaleza, en moléculas de glucosa libre. La celulosa es un componente de la pared celular vegetal, resistente a la hidrólisis y por tanto a la digestión. Este polisacárido, está formado por un polímero de unidades de glucosa unidos mediante enlaces glucosídicos tipo β - 1,4. Formando como producto glucosas libres La celulasa actúa rompiendo estos enlaces. Para la hidrólisis de la celulosa se necesita la acción sinérgica de un grupo de celulasas. Este sistema, se compone de tres tipos de enzimas: la endo β- 1,4 glucanasa, la exo β – 1,4 glucanasa y la β – 1,4 glucosidasa. Lo producen bacterias y hongos aeróbicos o anaeróbicos, mesófilos o termófilos. Los principales microrganismos productores son: Trichoderma viridae (pueden ser capaces de eliminar a otros hongos), Trichoderma reesei, Penicillium pinophilum, Fusarium solani, Sporotrichum thermophile, ciertas especies de Cellulomonas, Cythophaga, Cellvibrio, Bacillus, etc. Las celulasas de origen microbiano tienen aplicaciones en una gran variedad de industrias: Industria agrícola, textil, de los detergentes, producción de biocombustibles, alimentaria, se usa en la clarificación de jugos de frutas y vegetales, así como la producción de néctares y puré, industria de los colorantes, extracción de aceite oliva entre otros.
  • 3. A - Planta con crecimiento primario B - Planta con crecimiento secundario Estructura y composición de la pared vegetal Con esta diapo checamos en donde podemos encontrar el sustrato (celulosa)
  • 4.
  • 5. Las moléculas de glucosa están unidas por enlace beta ,
  • 6.
  • 7. Las exoglucanasas hidrolizan la parte no reductora, mientras que las endoglucanasas, son las que degradan en la parte interna. Una vez la celulosa es degradada, tendremos celobiosa y celooligosacáridos (mayor a 2 celobiosas) , pero aun no es asimilible así, tons vienen las b glucosidasas
  • 8.
  • 9. AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE MICROORGANISMOS CELULOLITICOS Esquema 1 Muestra: tierra de cultivo, compost. 9ml de solución salina Medio MM1 (20 ml) 1 gr. 10-1 0.5 ml Incubar a T° ambiente en agitación por 7 a 12 días. Triturar el papel en 1 ml de MM2 Medio MM2 1 ml Incubar por 7 días a T° ambiente Agar Mínimo Incubar a 28°C por 5 a 7 días Realizar coloración Gram de los cultivos en todas las etapas de crecimiento.
  • 10. Esquema 2 Muestra: desechos agroindustriales. 1 gr. 9ml de solución salina 10-1 0.5 ml Medio Omeliansky (20 ml) Incubar a T° ambiente de 7 a 12 días. Triturar el papel en 1 ml de Medio Omeliansky por Sembrar estriado Sembrar con pipeta en cada uno de los discos colocados en el medio. A. pochon con discos de papel filtro A. Pochon + CMC 0.5% o Agar Carboxi- metil celulosa Incubar a 28°C por 5 a 7 días Realizar coloración Gram de los cultivos en todas las etapas de crecimiento.
  • 11.
  • 12. Colonias de Cellulomonas fimi. Actividad celulolitíca de Cellumonas spp.
  • 13. Observación microscópica de Actinomyces spp. Cellulomonass fimi: Bacilo Gram positivo
  • 14. Actividad celulolítica de Actinobacterias Cepas de bacterias celulolíticas
  • 15. Cytophaga spp : Bacilo Gram negativo • Actividad celulolitica de Cytophaga spp
  • 16. Conservación de cepas a partir de colonia de Pseudomonas fluorescens Bacilos pequeños delgados de Pseudomonas fluorescens
  • 17.
  • 18. Diferentes especies de Trichoderma spp. Actividad celulolitica de Trichoderma spp
  • 19. Selección de hongos aislados de bagazo de caña de azúcar con actividad celulasa sobre celulosa cristalina
  • 20. Mantenimiento de cepas microbianas Chequeo de cepas microbianas.
  • 21. Conservación de hongos a nivel de laboratorio • Mantenimiento de cepas fúngicas industriales