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BLOQUE III. MICROORGANISMOS PROCARIOTICOS
 III.A. PROCARIOTAS: DESCRIPCIÓN DE LA CÉLULA PROCARIOTA.

Tema 5.
• Morfología y componentes celulares
• La envuelta celular
    -Polímeros extracelulares
    -La pared celular
    -Membrana citoplasmática
Tema 6.
• Citoplasma y contenido citoplasmático
• Apéndices filamentosos

 Tema 7.
 • Células diferenciadas: Endospora bacteriana
Tema 6.

Citoplasma y contenido citoplasmático
    Citoplasma: componentes. Observación
      1. Ribosomas: Estructura y composición
      2. Inclusiones de reserva
      3. Orgánulos citoplasmáticos:
          • Vacuolas y vesículas de gas
          • Clorosomas
          • Carboxisomas
          • Magnetosomas

      4. Material genético
Citoplasma
Sistema coloidal cuya fase dispersante es el agua, con
diversas sustancias en solución y una serie de
moléculas en suspensión.


              Nucleoide     Ribosomas

                                  Cuerpos de inclusión


                     Orgánulos intracitoplasmáticos




  El citoplasma + contenido englobado en membrana citoplasmática   protoplasto
Cuerpos nucleares




  Ribosomas
1. Ribosomas
 Lugar de síntesis de proteínas


Coeficiente de sedimentación de 70S

Subunidad pequeña (30S)

-ARNr (16S)
-21 proteínas


Subunidad grande (50S)

-ARNr (23S y 5S)
-34 proteínas
Al microscopio electrónico, son visibles como rosarios de gránulos oscuros:




Transcripción y traducción están estrechamente acopladas
2. Inclusiones de reserva
Se originan y acumulan durante el crecimiento en un medio ambiente
óptimo, con el fin de poder utilizar estas reservas para la supervivencia
durante etapas de condiciones adversas.



Reservas:
a) Inclusiones orgánicas: fuente C y N

b) Inclusiones inorgánicas: fuente P y S
Clasificación:
a) Inclusiones orgánicas

- Fuente de carbono
     - Polisacáridos: almidón, glucógeno
     - Polihidroxialcanoatos (PHA) (Poli-β-hidroxibutirato, PHB)


- Fuente de nitrógeno
      - Cianoficina (polímeros de arginina y ácido aspártico)



     Las bacterias acumulan un solo tipo de material de
        reserva carbonado (polisacáridos o lípidos).
Inclusiones de reserva orgánicos:

                Glucógeno
                                                   PHB




    α-1,4 D-glucosa y ramificaciones α-1,6


                                     Cianoficina



  Cianobacteria con
gránulos de cianoficina
                                             Cianoficina en Oscillatoria
                                             teñidos con azul de metileno
b) Inclusiones inorgánicas
-Reserva de fosfato:
Gránulos metacromáticos o de volutina



                                                  Sprillium volutans
                           ortofosfato



 -Reserva de azufre:
 Gránulos de azufre


 Microscopía óptica de la bacteria gigante
 Thiomargarita donde se observan los
 gránulos de azufre como estructuras
 pequeñas esféricas en el interior de la célula
3. Orgánulos intracitoplasmáticos
a) Carboxisomas o cuerpos poliédricos:

Bacterias fotoautotrofas y quimioautotrofas

Acúmulos enzima ribulosa-1,5-bifosfato-carboxilasa




                         Carboxisomas
                           (RubisCo)
Vacuolas de gas:
Bacterias acuáticas (Ej. Cianobacterias)

La función es mantener un grado de flotabilidad óptimo
c) Clorosomas:

Vesículas que contienen los pigmentos antena de las
bacterias fotosintéticas verdes.
d) Magnetosomas
- Orgánulos sensores del campo magnético terrestre
(bacterias acuáticas flageladas microaerófilas o anaerobias)

- Cristales homogéneos de magnetita (Fe3O4)
                                        Magnetosomas




                         Magnetospirillum magnetotacticum
Tipo          Distribución        Composición                        Función

                   Muchas
Glucógeno                           Poliglucosa             Reserva de C y E
                   bacterias
                   Muchas           Polímero de hidroxi
PHB                                                         Reserva de C y E
                   bacterias        butirato
                                    Copolímero de
Cianoficina        Cianobacterias                           Reserva de Nitrógeno y E
                                    aspártico y arginina
                   Muchas
Volutina                            Polimero de fosfatos    Reserva de fosfato rico en energía
                   bacterias
                   Fototrofas y
Gránulos de                                                 Reserva de electrones en fototrofos y
                   litotrofas del   Azufre elemental
azufre                                                      de energía en litotrofos
                   azufre
                   Bacterias
                                    Vesiculas rellenas de
Vesículas de gas   acuáticas:                               Flotabilidad
                                    gases
                   cianobacterias
                   Bacterias
Clorosoma                           Bacterioclorofilas      Albergar los pigmentos antena
                   verdes
                   Bacterias        Enzimas de fijación
Carboxisomas                                                ¿Lugar de fijación del CO2?
                   autótrofas       del CO2 RubisCO
                   Ciertas
                                                            Orientación y migración a lo largo de
Magnetosomas       bacterias        Magnetita (Fe3O4)
                                                            un campo geomagnético
                   acuáticas
4. Material genético


 Nucleoide




  Procariota (Bacteria)   Eucariota (Levadura)
4. Material genético (nucleoide)

Región del citoplasma donde se ubica el cromosoma
bacteriano, no delimitado por membrana alguna.
 También se denomina región nuclear.




       Nucleoide = cromosoma + (plásmidos)
Observación del nucleoide
                                                                      Tinción de Giemsa
• Microscopio óptico: Tinción. Colorantes básicos/ARNasa              Tinción de Feulgen

• Microscopía de contraste de fases combinada con epifluorescencia:
Tinción con DAPI (4,6-diamino-2-fenil-indol)

• Microscopía electrónica: material fibroso




                                              •Otras técnicas
                                              (autoradiografia)
   Microfotografía electrónica de Neisseria
          gonorrhoeae en división.


  •Bromuro de etidio (intercala en la doble hélice)
                                                                  Timina marcada 3H
Composición química, estructura y organización del nucleoide



                          Modelo clásico de Watson y Crick

                                ADNccc
                                              -60% ADN
                                              -30% ARN
                                              -10% proteínas
Composición química, estructura y organización del nucleoide

 Material cromosómico                                Material extracromosómico

  - 1 solo cromosoma                                 - Plásmidos (ADNccc)
  (ADN c.c.c.)                                       - Elementos transponibles:
                                                           transposones
  Excepciones:
  Borrelia y Streptomyces: cromosoma lineal
  Agrobacterium tumefaciens: 1 circular y 1 lineal
Configuración del nucleoide

 Escherichia coli : DNA 4.700 Kb = 1mm de modo lineal




                                                          Microfotografía electrónica
                                                           del nucleoide bacteriano


  Cromosoma de E. coli extendido por choque osmótico
                1200 µm de longitud.
                                                       SUPERENROLLAMIENTO
Superenrollamiento del ADN:
      La doble hélice está superenrollada negativamente sobre sí misma por

       Topoisomerasas II (ADN girasa)               ADN topoisomerasa I


ADN girasa          (topoisomerasa II): enrolla el ADN




Topoisomerasa I
relaja el ADN, liberándolo del
superenrollamento
En el cromosoma existen múltiples
dominios superenrollados, que se
estabilizan por unión con proteínas
específicas.
Material genético extracromosómico: Plásmidos

    Elementos genéticos extracromosómicos con
    capacidad de replicación autónoma


                                   • ADNccc y superenrollado



    Plásmidos del E. coli.

Tamaño y control de replicación de los plásmidos
                                                               Región de replicación

    2 Kb       500 Kb        1600Kb (megaplásmidos)


                    1 ó 2 copias
                    (control estricto)
    >10 copias
 (control relajado)
Clasificación según la capacidad de transferencia plasmídica:

 • Plásmidos conjugativos (autotransmisibles por conjugación)

    -Entre cepas de la misma especie
    -Entre especies y géneros muy diversos: plásmidos promiscuos o
     de amplio espectro de hospedadores




• Plásmidos no conjugativos

     Plásmidos movilizables (pueden ser transferidos por la acción de un
     plásmido conjugativo coexistente en la misma bacteria)
Funciones de los plásmidos
1. Resistencia a antibióticos (plásmidos R).

2. Resistencia a metales pesados (Ej, mercurio).

3. Plásmidos de virulencia: producción de toxinas, factores de penetración en tejidos,

   adherencia a tejidos del hospedador, etc.,

4. Producción de bacteriocinas

5. Producción de sideróforos (quelatos para secuestrar iones Fe3+).

6. Utilización de determinados azúcares.

7. Utilización de hidrocarburos, incluyendo algunos cíclicos recalcitrantes

   (degradación de tolueno, xileno, alcanfor, etc.) en Pseudomonas.

8. Inducción de tumores en plantas (plásmido Ti de Agrobacterium tumefaciens).

9. Interacciones simbióticas y fijación de N2 en Rhizobium
Replicación del cromosoma bacteriano

                        Semiconservativo y bidireccional
Replicación del cromosoma bacteriano

Semiconservativo y bidireccional


Modelo de replicación en theta (θ)



 Origen de la
 replicación
                  Bidireccional




Horquillas de replicación
Helicasa

           Proteínas de unión a
           cadena sencilla
Cadena retrasada
                              (síntesis discontinua en la
                              hebra 3’-5’ de la horquilla)




             Primasa

           Proteínas de unión a
           cadena sencilla

Helicasa       ADN polimerasa


                        Cadena lider
                        (síntesis continua
                        en la hebra 5’-3’
                        de la horquilla)
Resumen enzimas que intervienen:


Helicasas: enzimas dependientes de ATP que se mueven a lo largo de la
hélice delante de la horquilla de replicación, formando una pequeña región
de cadena sencilla.


Proteínas de unión a cadena sencilla: estabilizan el ADN de cadena sencilla,
impidiendo que se formen los puentes de hidrógeno intracatenarios.


ADN polimerasas: sintetizan ADN, siempre en dirección 5’-3’


Primasa: sintetiza los fragmentos de ARN que actúan de iniciadores


Ligasa: une los fragmentos de Okazaki de la cadena retrasada
Replicación de plásmidos

Gram negativas: Modelo en theta

Gram positivas: Modelo en sigma (σ ) o del
                círculo rodante:


 Replicación por el modelo de círculo
 rodante:
 La replicación comienza en el punto de
 origen por rotura de una cadena de ADN.
 Después de que se ha sintetizado una
 nueva cadena, una vuelta del círculo,
 una proteína rompe la cadena y liga los
 extremos

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  • 1. BLOQUE III. MICROORGANISMOS PROCARIOTICOS III.A. PROCARIOTAS: DESCRIPCIÓN DE LA CÉLULA PROCARIOTA. Tema 5. • Morfología y componentes celulares • La envuelta celular -Polímeros extracelulares -La pared celular -Membrana citoplasmática Tema 6. • Citoplasma y contenido citoplasmático • Apéndices filamentosos Tema 7. • Células diferenciadas: Endospora bacteriana
  • 2. Tema 6. Citoplasma y contenido citoplasmático Citoplasma: componentes. Observación 1. Ribosomas: Estructura y composición 2. Inclusiones de reserva 3. Orgánulos citoplasmáticos: • Vacuolas y vesículas de gas • Clorosomas • Carboxisomas • Magnetosomas 4. Material genético
  • 3. Citoplasma Sistema coloidal cuya fase dispersante es el agua, con diversas sustancias en solución y una serie de moléculas en suspensión. Nucleoide Ribosomas Cuerpos de inclusión Orgánulos intracitoplasmáticos El citoplasma + contenido englobado en membrana citoplasmática protoplasto
  • 4. Cuerpos nucleares Ribosomas
  • 5. 1. Ribosomas Lugar de síntesis de proteínas Coeficiente de sedimentación de 70S Subunidad pequeña (30S) -ARNr (16S) -21 proteínas Subunidad grande (50S) -ARNr (23S y 5S) -34 proteínas
  • 6. Al microscopio electrónico, son visibles como rosarios de gránulos oscuros: Transcripción y traducción están estrechamente acopladas
  • 7. 2. Inclusiones de reserva Se originan y acumulan durante el crecimiento en un medio ambiente óptimo, con el fin de poder utilizar estas reservas para la supervivencia durante etapas de condiciones adversas. Reservas: a) Inclusiones orgánicas: fuente C y N b) Inclusiones inorgánicas: fuente P y S
  • 8. Clasificación: a) Inclusiones orgánicas - Fuente de carbono - Polisacáridos: almidón, glucógeno - Polihidroxialcanoatos (PHA) (Poli-β-hidroxibutirato, PHB) - Fuente de nitrógeno - Cianoficina (polímeros de arginina y ácido aspártico) Las bacterias acumulan un solo tipo de material de reserva carbonado (polisacáridos o lípidos).
  • 9. Inclusiones de reserva orgánicos: Glucógeno PHB α-1,4 D-glucosa y ramificaciones α-1,6 Cianoficina Cianobacteria con gránulos de cianoficina Cianoficina en Oscillatoria teñidos con azul de metileno
  • 10. b) Inclusiones inorgánicas -Reserva de fosfato: Gránulos metacromáticos o de volutina Sprillium volutans ortofosfato -Reserva de azufre: Gránulos de azufre Microscopía óptica de la bacteria gigante Thiomargarita donde se observan los gránulos de azufre como estructuras pequeñas esféricas en el interior de la célula
  • 11. 3. Orgánulos intracitoplasmáticos a) Carboxisomas o cuerpos poliédricos: Bacterias fotoautotrofas y quimioautotrofas Acúmulos enzima ribulosa-1,5-bifosfato-carboxilasa Carboxisomas (RubisCo)
  • 12. Vacuolas de gas: Bacterias acuáticas (Ej. Cianobacterias) La función es mantener un grado de flotabilidad óptimo
  • 13. c) Clorosomas: Vesículas que contienen los pigmentos antena de las bacterias fotosintéticas verdes.
  • 14. d) Magnetosomas - Orgánulos sensores del campo magnético terrestre (bacterias acuáticas flageladas microaerófilas o anaerobias) - Cristales homogéneos de magnetita (Fe3O4) Magnetosomas Magnetospirillum magnetotacticum
  • 15. Tipo Distribución Composición Función Muchas Glucógeno Poliglucosa Reserva de C y E bacterias Muchas Polímero de hidroxi PHB Reserva de C y E bacterias butirato Copolímero de Cianoficina Cianobacterias Reserva de Nitrógeno y E aspártico y arginina Muchas Volutina Polimero de fosfatos Reserva de fosfato rico en energía bacterias Fototrofas y Gránulos de Reserva de electrones en fototrofos y litotrofas del Azufre elemental azufre de energía en litotrofos azufre Bacterias Vesiculas rellenas de Vesículas de gas acuáticas: Flotabilidad gases cianobacterias Bacterias Clorosoma Bacterioclorofilas Albergar los pigmentos antena verdes Bacterias Enzimas de fijación Carboxisomas ¿Lugar de fijación del CO2? autótrofas del CO2 RubisCO Ciertas Orientación y migración a lo largo de Magnetosomas bacterias Magnetita (Fe3O4) un campo geomagnético acuáticas
  • 16. 4. Material genético Nucleoide Procariota (Bacteria) Eucariota (Levadura)
  • 17. 4. Material genético (nucleoide) Región del citoplasma donde se ubica el cromosoma bacteriano, no delimitado por membrana alguna. También se denomina región nuclear. Nucleoide = cromosoma + (plásmidos)
  • 18. Observación del nucleoide Tinción de Giemsa • Microscopio óptico: Tinción. Colorantes básicos/ARNasa Tinción de Feulgen • Microscopía de contraste de fases combinada con epifluorescencia: Tinción con DAPI (4,6-diamino-2-fenil-indol) • Microscopía electrónica: material fibroso •Otras técnicas (autoradiografia) Microfotografía electrónica de Neisseria gonorrhoeae en división. •Bromuro de etidio (intercala en la doble hélice) Timina marcada 3H
  • 19. Composición química, estructura y organización del nucleoide Modelo clásico de Watson y Crick ADNccc -60% ADN -30% ARN -10% proteínas
  • 20. Composición química, estructura y organización del nucleoide Material cromosómico Material extracromosómico - 1 solo cromosoma - Plásmidos (ADNccc) (ADN c.c.c.) - Elementos transponibles: transposones Excepciones: Borrelia y Streptomyces: cromosoma lineal Agrobacterium tumefaciens: 1 circular y 1 lineal
  • 21. Configuración del nucleoide Escherichia coli : DNA 4.700 Kb = 1mm de modo lineal Microfotografía electrónica del nucleoide bacteriano Cromosoma de E. coli extendido por choque osmótico 1200 µm de longitud. SUPERENROLLAMIENTO
  • 22. Superenrollamiento del ADN: La doble hélice está superenrollada negativamente sobre sí misma por Topoisomerasas II (ADN girasa) ADN topoisomerasa I ADN girasa (topoisomerasa II): enrolla el ADN Topoisomerasa I relaja el ADN, liberándolo del superenrollamento
  • 23. En el cromosoma existen múltiples dominios superenrollados, que se estabilizan por unión con proteínas específicas.
  • 24. Material genético extracromosómico: Plásmidos Elementos genéticos extracromosómicos con capacidad de replicación autónoma • ADNccc y superenrollado Plásmidos del E. coli. Tamaño y control de replicación de los plásmidos Región de replicación 2 Kb 500 Kb 1600Kb (megaplásmidos) 1 ó 2 copias (control estricto) >10 copias (control relajado)
  • 25. Clasificación según la capacidad de transferencia plasmídica: • Plásmidos conjugativos (autotransmisibles por conjugación) -Entre cepas de la misma especie -Entre especies y géneros muy diversos: plásmidos promiscuos o de amplio espectro de hospedadores • Plásmidos no conjugativos Plásmidos movilizables (pueden ser transferidos por la acción de un plásmido conjugativo coexistente en la misma bacteria)
  • 26. Funciones de los plásmidos 1. Resistencia a antibióticos (plásmidos R). 2. Resistencia a metales pesados (Ej, mercurio). 3. Plásmidos de virulencia: producción de toxinas, factores de penetración en tejidos, adherencia a tejidos del hospedador, etc., 4. Producción de bacteriocinas 5. Producción de sideróforos (quelatos para secuestrar iones Fe3+). 6. Utilización de determinados azúcares. 7. Utilización de hidrocarburos, incluyendo algunos cíclicos recalcitrantes (degradación de tolueno, xileno, alcanfor, etc.) en Pseudomonas. 8. Inducción de tumores en plantas (plásmido Ti de Agrobacterium tumefaciens). 9. Interacciones simbióticas y fijación de N2 en Rhizobium
  • 27. Replicación del cromosoma bacteriano Semiconservativo y bidireccional
  • 28. Replicación del cromosoma bacteriano Semiconservativo y bidireccional Modelo de replicación en theta (θ) Origen de la replicación Bidireccional Horquillas de replicación
  • 29. Helicasa Proteínas de unión a cadena sencilla
  • 30. Cadena retrasada (síntesis discontinua en la hebra 3’-5’ de la horquilla) Primasa Proteínas de unión a cadena sencilla Helicasa ADN polimerasa Cadena lider (síntesis continua en la hebra 5’-3’ de la horquilla)
  • 31. Resumen enzimas que intervienen: Helicasas: enzimas dependientes de ATP que se mueven a lo largo de la hélice delante de la horquilla de replicación, formando una pequeña región de cadena sencilla. Proteínas de unión a cadena sencilla: estabilizan el ADN de cadena sencilla, impidiendo que se formen los puentes de hidrógeno intracatenarios. ADN polimerasas: sintetizan ADN, siempre en dirección 5’-3’ Primasa: sintetiza los fragmentos de ARN que actúan de iniciadores Ligasa: une los fragmentos de Okazaki de la cadena retrasada
  • 32. Replicación de plásmidos Gram negativas: Modelo en theta Gram positivas: Modelo en sigma (σ ) o del círculo rodante: Replicación por el modelo de círculo rodante: La replicación comienza en el punto de origen por rotura de una cadena de ADN. Después de que se ha sintetizado una nueva cadena, una vuelta del círculo, una proteína rompe la cadena y liga los extremos