Microscopio

SERVICIONACIONALDEAPRENDIZAJE–SENA
CentroAgropecuariodeBuga-CAB
Jose Libardo Tapiero Cuellar
Ingeniero Agroindustrial – Maestrante en Química
EL MICROSCOPIO
Jose Libardo Tapiero

HISTORIA: EL INVENTO
• Se inventó, hacia
1610, por Galileo,
según los
italianos, o por
Jansen, en opinión
de los holandeses

EL NOMBRE
• La palabra
microscopio fue
utilizada por primera
vez por los
componentes de la
"Accademia dei
Lincei“
• Micro=pequeño
• Scopein=ver

GALILEO GALILEI
• La “Accademia dei
Linceii” era una
sociedad científica a
la que pertenecía
Galileo y publicaron
un trabajo sobre la
observación
microscópica del
aspecto de una
abeja

MALPIGHI
• Las primeras
publicaciones
importantes aparecen
en 1660 y 1665
cuando Malpighi
observa los capilares
sanguíneos y Hooke
publica su obra
Micrographia

ANTONY VAN LEENWENHOEK
En el siglo XVII un
comerciante
holandés, utilizando
microscopios simples
de fabricación propia
describió por primera
vez protozoos,
bacterias,
espermatozoides y
glóbulos rojos

MICROSCOPIO DE
LEEUWENHOEK

CARACTERÍSTICAS DEL MICROSCOPIO DE
LEEUWENHOEK
• El primitivo
microscopio de
Leeuwenhoek tenía
dos lupas
combinadas con las
que llegó a alcanzar
260 aumentos, lo cual
le permitió visualizar
algunos protozoos e
infusorios

MICROSCOPIOS DEL SIGLO XVIII

ERNST ABBE
• Las mejoras mas
importantes de la
óptica surgieron
en 1877 cuando
Abbe publica su
teoría del
microscopio

CALR ZEISS
• Mejora la
microscopía de
inmersión
sustituyendo el agua
por aceite de cedro
lo que permite
obtener 2000
aumentos

FUNDAMENTO DE LA MICROSCOPÍA
• Cuando el observador
se acerca el objeto se
agranda
• Pero a menos de 25 cm
no se ve con claridad
• Si se aumenta el ángulo
visual se ve con claridad

ESQUEMA DEL MICROSCOPIO
• Un tubo cilíndrico aloja el
sistema óptico
ocular/objetivo. Una
platina de original diseño
permite observar las
preparaciones, que son
iluminadas por un espejo
cóncavo que concentra la
luz sobre el objeto a
estudiar.

PARÁMETROS
ÓPTICOS
• Aumento
• Poder de
resolución
• Nº de campo
• Profundidad de
foco
• Contraste

AUMENTO
• Se calcula
multiplicando
el aumento del
objetivo por el
aumento del
ocular

PODER DE
RESOLUCIÓN
• Distancia si dos puntos
se distinguen
• Mayor, cuando menor
es la longitud de onda
• Mayor, cuanto mas
grande es la apertura
numérica
• Mayor, con aceite de
cedro

NÚMERO DE
CAMPO
• Es el diámetro
de la imagen
observada a
través del
ocular,
expresado en
milímetros

PROFUNDIDAD DE CAMPO

CONTRASTE
• Diferencia de
absorción de luz
entre el objeto y
el medio
• Puede
aumentarse con
las tinciones

BUENOS PARÁMETROS

MICROSCOPIO ÓPTICO
COMPUESTO

SISTEMA DE AJUSTE
Anillo de
ajuste de los
oculares
Tornillo que
permite
mover el
cabezal
Tornillos
reguladores
de la platina
Tornillos del
condensador
Palanca de
cierre del
diafragma

SISTEMA DE ENFOQUE
Tornillo
micrométrico
Tornillo
macrométrico
Freno

PLATINA
Escala
Pinza

PARTE ÓPTICA
• Sistema de
iluminación:
fuente de luz,
condensador y
diafragma
• Lentes: objetivos y
oculares

SISTEMA DE ILUMINACIÓN:
FUENTE DE LUZ
• Suele ser una lámpara
halógena de intensidad
graduable
• Se enciende y apaga
con un interruptor
• En el exterior puede
tener un filtro
Interruptor y
graduación de la luz
Lámpara
Filtro

CONDENSADOR Y DIAFRAGMA
• Condensador:
concentra la luz de la
lámpara en un punto de
la preparación
• Diafragma o iris (está
dentro del
condensador):si se
cierra mejora el
contraste, pero
empeora la resolución

LENTES: OBJETIVOS
• Están colocados en el
revolver
• Tienen un sistema de
amortiguación
• Un anillo coloreado
indica los aumentos
• Son de 4, 10, 40 y 100
(inmersión) aumentos
Azul
40x
Amarillo
10x
Amortiguación

LENTES:
OCULARES

OCULARES:
10x; 15x; 20x

TETRAOCULARES

MATERIAL NECESARIO: PORTAS Y CUBRES

ACEITE DE INMERSIÓN
• Hoy no son de
madera de cedro, sino
sintéticos
• Los hay de baja,
media y alta
viscosidad
• Su empleo es
imprescindible con el
objetivo de inmersión
(100x)

MANEJO DEL MICROSCOPIO
• No poner la
preparación al revés
• Regular la luz a
intensidad media
• Ajustar condensador
y diafragma al medio
• Empezar por poco
aumento
• Mirando por fuera
subir la platina
• Enfocar y ajustar
• Pasar al siguiente
aumento y enfocar
• Al acabar retirar la
preparación
• Apagar la luz

CONSERVACIÓN DEL MICROSCOPIO
• Ponerle su funda al
guardarlo
• Limpieza de lentes con
papel de gafas
• El exceso de xilol al
limpiar las lentes
desgasta el cemento
• Usar pincel y pera de
aire

TIPOS DE MICROSCOPIOS
Tiposdemicroscopios
Microscopio
óptico
Microscopio
electrónico
Microscopio
Óptico Simple
Microscopio
Óptico
Compuesto
M.O. Normal
Campo oscuro
Contraste de fases
Fluorescencia
Transmisión
Barrido
Digital
Efecto túnel o cuántico
Lupa

PODER DE OBSERVACIÓN DEL
MICROSCOPIO

MICROSCOPÍA DE
CAMPO OSCURO

MICROSCOPÍA DE
CONTRASTE DE FASES
Células epiteliales 20 x

MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA
Células epiteliales 200 x

ERNST RUSKA
• El microscopio
electrónico de
transmisión (T.E.M.)
consiguió aumentos
de 100.000 X. Fue
desarrollado por Max
Knoll y Ernst Ruska
en Alemania en 1931

PRIMER MICROSCOPIO
ELECTRONICO
• Utilizó un haz de
electrones en lugar
de luz para
enfocar la muestra.
• Posteriormente, en
1942 se desarrolla
el microscopio
electrónico de
barrido (SEM).

POSIBILIDADES QUE OFRECE LA
TÉCNICA
Muestras Sólidas
Observar y
fotografiar zonas
de la muestra
Medida de
longitudes
superiores 14 nm
Distinción zonas
diferente número
atómico
Analisis cualitativo
y cuantitativo
Mapa distribución
elementos
quimicos
Perfiles concentración
de un elemento en
puntos diferentes de la
muestra
11
22
33
44
55
66

FUNDAMENTOS DE LA TÉCNICA
• Interacción del haz de
electrones con la materia
• e1 electrones retro
dispersados
• e2 electrones secundarios
• RX

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE
BARRIDO

M.E. DE TRASMISIÓN
Bacilos en división

Microscopia Electrónica
de Barrido en Muestras
Secas
Vacio Alto 102
Pa
Secado a punto crítico
Secado por congelación

Gracias

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