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Trabajo de
               ELITE
             Excelencia en investigación científica
                Fundadores:
                Juan Saúl Baez Torreblanca
                Juan Carlos Denicia Tlahuiz
                María Andrea Hernández Tehuitzil
                Jhosse Paul Márquez Ruíz
                Alma Pérez López

  Orgulloso integrante de
los Ornitorrincos Poseídos
       PRESENTA
Comparación del Desarrollo Embrionario de Piaractus
brachypomus (Serrasalmidae) y Pseudoplatystoma sp.
                  (Pimelodidae)
                            Autores
                       John Díaz Olarte
                    Lili J. Marciales Caro
                Freddy Cristancho Vásquez
                   Pablo E. Cruz Casallas

                      Disertante
               Jhosse Paul Márquez Ruíz
                                             22/09/11
Producción piscícola




Piaractus brachypomus    Pseudoplatystoma sp.


         ¡¡¡Canibalismo!!!
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¿Para qué estudiar el desarrollo
        embrionario?
• Heterogeneidad de tiempo de eclosión
• Alimentación inadecuada
• Densidades de alojamiento inapropiadas




   Doble membrana, que consiste en una capa gelatinosa
externa y un gran espacio perivitelínico, característica común
   a las especies neotropicales reofílicas o que presentan
                   migración reproductiva
Examinar y comparar los estados iníciales del desarrollo
embrionario entre Piaractus brachypomus y Pseudoplatystoma
      sp, bajo condiciones controladas de laboratorio.

             Para implementar las técnicas mas adecuadas
             durante las fases de incubación, larvicultura y
                                alvelinaje
• Conocer la importancia y aplicación
    General
                 del desarrollo embrionario

               • Analizar las etapas del desarrollo
                 embrionario
               • Aplicar e integrar el conocimiento
Particulares     teórico en una situación real
               • Inferir tendencias según los
                 conocimientos previos del
                 desarrollo embrionario
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                                   0:20
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¿Cómo estudio el desarrollo embrionario?
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                                    0:10
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   ¿Cómo consigo huevos fértiles?

¿Qué necesito para que sean fértiles?
Incubadoras
                                            Woynarovich
                            Fertilización      200 L.
                              en seco

                Extrusión



 Reproducción
   inducida
hormonalmente
    EHC
EHC en hembras
          Intramuscular
    Pseudoplatystoma sp   P. brachypomus


 0.25    0.5      5        0.5      5
mg.kg-1 mg.kg-1 mg.kg-1   mg.kg-1 mg.kg-1
EHC en machos
        Intramuscular
             4 mg.kg-1
Pseudoplatystoma sp   P. brachypomus
100 huevos               100 huevos
                                                    Primeras
al azar cada                cada
                                                   etapas del
 15 min/3                hora/hasta
                                                   desarrollo
    horas                 eclosión



               Formalina buferada al 10%

                    • Temperatura (ºC)
                    • Oxígeno disuelto (mg.L-1)
 Parámetros         • pH
                    • Sólidos disueltos totales TDS (mg.L-1)
                    • Conductividad (μs.cm-1)
Microscopio óptico   Estereomicroscopio
0:00
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                                       0:20
                                       0:30



¿Qué fases esperarían encontrar/distinguir
 durante la incubación hasta la eclosión?
0:00
                                           0:10
                                           0:20
                                           0:30

     Sabemos que los embriones de pez son
lecitotróficos, es decir, no reciben alimentación
directa de la madre ¿Cómo esperarían que fuera
  el huevo de estas especies con respecto a la
       cantidad de vitelo y su dispersión?

    Por lo tanto, ¿Qué tipo de segmentación
              esperarías observar?
Oocitos

                                                          Tamaño
                                        Tamaño
      Especie            Color                        postfertilización
                                      deshidratado
                                                        (hidratado)


Pseudoplatystoma sp   Amarillento     850-900 μm       1930 ± 40 μm


  P. brachypomus      Verdiazulado   1000 - 1200 μm    1680± 34 μm
Cigoto                       pa     Polo Animal
                             pv     Polo Vegetal
Hasta la primera división    ep     Espacio Perivitelinico
                             b      Blastómero
Diferenciación de polos
                             pd     Plano De División
Obscurecimiento              db     Discoblástula
HPF 0:15                     v      Vitelo
      Pseudoplatystoma sp.   P. brachypomus
pa   Polo Animal
Clivage – Primera división                    pv   Polo Vegetal
Meroblásticos                                 ep   Espacio Perivitelinico
                                              b    Blastómero
HPF 0:30
                                              pd   Plano De División
Plano meridional (Sagital)                    db   Discoblástula
Células de igual tamaño                       v    Vitelo
 Pseudoplatystoma sp.        P. brachypomus        P. brachypomus
pa     Polo Animal
Clivage – Segunda división   pv     Polo Vegetal
HPF 0:45 – 1:00              ep     Espacio Perivitelinico
                             b      Blastómero
Perpendicular al primero
                             pd     Plano De División
                             db     Discoblástula
                             v      Vitelo
     Pseudoplatystoma sp.    P. Brachypomus
pa     Polo Animal
Clivage – Tercera división                    pv     Polo Vegetal
Genera 8 células                              ep     Espacio Perivitelinico
                                              b      Blastómero
Doble división paralela al primer eje
                                              pd     Plano De División
                                              db     Discoblástula
                                              v      Vitelo
 Pseudoplatystoma sp. (0:45 - 1:00)     P. Brachypomus (0:45-1:15)
pa          Polo Animal
Clivage – Cuarta división                        pv          Polo Vegetal
Genera 4 filas x 4 blastomeros                   ep          Espacio Perivitelinico
                                                 b           Blastómero
División paralela al segundo eje
                                                 pd          Plano De División
                                                 db          Discoblástula
 Pseudoplatystoma sp. (1:00 - 1:15)
                                                 v           Vitelo

  P. Brachypomus (1:00 -1:30)



                                      Quinto
                                                32 células
                                      clivaje                  1:00 - 2:00 HPF en
                                                              Pseudoplatystoma sp

                                      Sexto                     1:00 -1:45 HPF en
                                                64 células
                                      clivaje                    P. brachypomus.
Pseudoplatystoma sp.
     (128 células)     P. Brachypomus (64 células)
pa      Polo Animal
Blástula                                    pv      Polo Vegetal
Células envuelven al vitelo                 ep      Espacio Perivitelinico
                                            b       Blastómero
Blastodisco
                                            pd      Plano De División
3 etapas: Inicial, elevación de la blástula db      Discoblástula
y descenso                                  v       Vitelo
                     P. Brachypomus (2:00 - 4:00)
Pseudoplatystoma sp. (2:00 - 5:00)
  Blastodisco inicial   Elevación del blastodisco
Descenso del blastodisco
Gástrula                                 bp     borde periblasto
                                         v      vitelo
4 etapas                                 tv     tapón vitelino
• Epibolia inicial                       sm     somitas
                                         vk     vesícula de Kupffer
• Epibolia 50%
                                         pa     parte caudal
• Epibolia 80-95%,                       pc     parte cefálica
• Cierre del blastóporo
           Pseudoplatystoma sp. (5:00 - 10:00)
    Epibolia 80%          Epibolia 95%        Cierre del blastoporo
P. Brachypomus (5:00 - 8:00)
      Epibolia 50%                 Epibolia 80%




bp   borde periblasto      vk     vesícula de Kupffer
v    vitelo                pa     parte caudal
tv   tapón vitelino        pc     parte cefálica
sm   somitas
Organogénesis

Diferenciación céfalo-caudal
Cambio de forma curvada a extendida
Simetría bilateral
4 etapas:
• Fase inicial diferenciación de órganos cefálicos como la vesícula
   óptica y ótica
• Organogénesis ii: diferenciación de la parte caudal (cola)
• Organogénesis iii: diferenciación de las cavidades encefálicas
   formación del cristalino y los otolitos
• Organogénesis tardía: somitas pareadas, vasos del sistema
   circulatorio y formación de aletas primigenia
bp      borde periblasto      vk    vesícula de Kupffer
v       vitelo                pa    parte caudal
tv      tapón vitelino        pc    parte cefálica
sm      somitas


           Pseudoplatystoma sp. (8:00 - 16:00)
     Diferenciación antero-posterior en posición arqueada
bp      borde periblasto       vk    vesícula de Kupffer
v       vitelo                 pa    parte caudal
tv      tapón vitelino         pc    parte cefálica
sm      somitas

               P. Brachypomus (8:00 - 13:00)

     Diferenciación antero-posterior en posición arqueada
Eclosión
 Pseudoplatystoma sp se observó desde las 14:00 HPF hasta las 18:00 HPF,
 mientras que en P. bachypomus se inició a las 12:00 HPF y llego al 80% de
 larvas eclosionadas a las 14:00 HPF
•   En Pseudoplatystoma sp existe un mayor espacio que en P.
    brachypomus
•   El diámetro de los oocitos hidratados después de la fertilización
    de Pseudoplatystoma sp es mayor que los de P. brachypomus,
    lo cual le proporcionaría al embrión una mayor protección de
    los daños mecánicos del ambiente
•   Pseudoplatystoma sp presenta un ritmo más heterogéneo en la
    división, mientras que P. brachypomus es más rápido y más
    homogéneo
•   La heterogeneidad de eclosión provoca el canibalismo

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Comparación del Desarrollo Embrionario de Piaractus brachypomus (Serrasalmidae) y Pseudoplatystoma sp. (Pimelodidae)

  • 1. Trabajo de ELITE Excelencia en investigación científica Fundadores: Juan Saúl Baez Torreblanca Juan Carlos Denicia Tlahuiz María Andrea Hernández Tehuitzil Jhosse Paul Márquez Ruíz Alma Pérez López Orgulloso integrante de los Ornitorrincos Poseídos PRESENTA
  • 2. Comparación del Desarrollo Embrionario de Piaractus brachypomus (Serrasalmidae) y Pseudoplatystoma sp. (Pimelodidae) Autores John Díaz Olarte Lili J. Marciales Caro Freddy Cristancho Vásquez Pablo E. Cruz Casallas Disertante Jhosse Paul Márquez Ruíz 22/09/11
  • 3. Producción piscícola Piaractus brachypomus Pseudoplatystoma sp. ¡¡¡Canibalismo!!!
  • 4. 0:00 0:10 0:20 0:30 ¿Para qué estudiar el desarrollo embrionario?
  • 5. • Heterogeneidad de tiempo de eclosión • Alimentación inadecuada • Densidades de alojamiento inapropiadas Doble membrana, que consiste en una capa gelatinosa externa y un gran espacio perivitelínico, característica común a las especies neotropicales reofílicas o que presentan migración reproductiva
  • 6. Examinar y comparar los estados iníciales del desarrollo embrionario entre Piaractus brachypomus y Pseudoplatystoma sp, bajo condiciones controladas de laboratorio. Para implementar las técnicas mas adecuadas durante las fases de incubación, larvicultura y alvelinaje
  • 7. • Conocer la importancia y aplicación General del desarrollo embrionario • Analizar las etapas del desarrollo embrionario • Aplicar e integrar el conocimiento Particulares teórico en una situación real • Inferir tendencias según los conocimientos previos del desarrollo embrionario
  • 8. 0:00 0:10 0:20 0:30 ¿Cómo estudio el desarrollo embrionario?
  • 9. 0:00 0:10 0:20 0:30 ¿Cómo consigo huevos fértiles? ¿Qué necesito para que sean fértiles?
  • 10. Incubadoras Woynarovich Fertilización 200 L. en seco Extrusión Reproducción inducida hormonalmente EHC
  • 11. EHC en hembras Intramuscular Pseudoplatystoma sp P. brachypomus 0.25 0.5 5 0.5 5 mg.kg-1 mg.kg-1 mg.kg-1 mg.kg-1 mg.kg-1
  • 12. EHC en machos Intramuscular 4 mg.kg-1 Pseudoplatystoma sp P. brachypomus
  • 13. 100 huevos 100 huevos Primeras al azar cada cada etapas del 15 min/3 hora/hasta desarrollo horas eclosión Formalina buferada al 10% • Temperatura (ºC) • Oxígeno disuelto (mg.L-1) Parámetros • pH • Sólidos disueltos totales TDS (mg.L-1) • Conductividad (μs.cm-1)
  • 14. Microscopio óptico Estereomicroscopio
  • 15. 0:00 0:10 0:20 0:30 ¿Qué fases esperarían encontrar/distinguir durante la incubación hasta la eclosión?
  • 16. 0:00 0:10 0:20 0:30 Sabemos que los embriones de pez son lecitotróficos, es decir, no reciben alimentación directa de la madre ¿Cómo esperarían que fuera el huevo de estas especies con respecto a la cantidad de vitelo y su dispersión? Por lo tanto, ¿Qué tipo de segmentación esperarías observar?
  • 17. Oocitos Tamaño Tamaño Especie Color postfertilización deshidratado (hidratado) Pseudoplatystoma sp Amarillento 850-900 μm 1930 ± 40 μm P. brachypomus Verdiazulado 1000 - 1200 μm 1680± 34 μm
  • 18. Cigoto pa Polo Animal pv Polo Vegetal Hasta la primera división ep Espacio Perivitelinico b Blastómero Diferenciación de polos pd Plano De División Obscurecimiento db Discoblástula HPF 0:15 v Vitelo Pseudoplatystoma sp. P. brachypomus
  • 19. pa Polo Animal Clivage – Primera división pv Polo Vegetal Meroblásticos ep Espacio Perivitelinico b Blastómero HPF 0:30 pd Plano De División Plano meridional (Sagital) db Discoblástula Células de igual tamaño v Vitelo Pseudoplatystoma sp. P. brachypomus P. brachypomus
  • 20. pa Polo Animal Clivage – Segunda división pv Polo Vegetal HPF 0:45 – 1:00 ep Espacio Perivitelinico b Blastómero Perpendicular al primero pd Plano De División db Discoblástula v Vitelo Pseudoplatystoma sp. P. Brachypomus
  • 21. pa Polo Animal Clivage – Tercera división pv Polo Vegetal Genera 8 células ep Espacio Perivitelinico b Blastómero Doble división paralela al primer eje pd Plano De División db Discoblástula v Vitelo Pseudoplatystoma sp. (0:45 - 1:00) P. Brachypomus (0:45-1:15)
  • 22. pa Polo Animal Clivage – Cuarta división pv Polo Vegetal Genera 4 filas x 4 blastomeros ep Espacio Perivitelinico b Blastómero División paralela al segundo eje pd Plano De División db Discoblástula Pseudoplatystoma sp. (1:00 - 1:15) v Vitelo P. Brachypomus (1:00 -1:30) Quinto 32 células clivaje 1:00 - 2:00 HPF en Pseudoplatystoma sp Sexto 1:00 -1:45 HPF en 64 células clivaje P. brachypomus.
  • 23. Pseudoplatystoma sp. (128 células) P. Brachypomus (64 células)
  • 24. pa Polo Animal Blástula pv Polo Vegetal Células envuelven al vitelo ep Espacio Perivitelinico b Blastómero Blastodisco pd Plano De División 3 etapas: Inicial, elevación de la blástula db Discoblástula y descenso v Vitelo P. Brachypomus (2:00 - 4:00)
  • 25. Pseudoplatystoma sp. (2:00 - 5:00) Blastodisco inicial Elevación del blastodisco
  • 27. Gástrula bp borde periblasto v vitelo 4 etapas tv tapón vitelino • Epibolia inicial sm somitas vk vesícula de Kupffer • Epibolia 50% pa parte caudal • Epibolia 80-95%, pc parte cefálica • Cierre del blastóporo Pseudoplatystoma sp. (5:00 - 10:00) Epibolia 80% Epibolia 95% Cierre del blastoporo
  • 28. P. Brachypomus (5:00 - 8:00) Epibolia 50% Epibolia 80% bp borde periblasto vk vesícula de Kupffer v vitelo pa parte caudal tv tapón vitelino pc parte cefálica sm somitas
  • 29. Organogénesis Diferenciación céfalo-caudal Cambio de forma curvada a extendida Simetría bilateral 4 etapas: • Fase inicial diferenciación de órganos cefálicos como la vesícula óptica y ótica • Organogénesis ii: diferenciación de la parte caudal (cola) • Organogénesis iii: diferenciación de las cavidades encefálicas formación del cristalino y los otolitos • Organogénesis tardía: somitas pareadas, vasos del sistema circulatorio y formación de aletas primigenia
  • 30. bp borde periblasto vk vesícula de Kupffer v vitelo pa parte caudal tv tapón vitelino pc parte cefálica sm somitas Pseudoplatystoma sp. (8:00 - 16:00) Diferenciación antero-posterior en posición arqueada
  • 31. bp borde periblasto vk vesícula de Kupffer v vitelo pa parte caudal tv tapón vitelino pc parte cefálica sm somitas P. Brachypomus (8:00 - 13:00) Diferenciación antero-posterior en posición arqueada
  • 32. Eclosión Pseudoplatystoma sp se observó desde las 14:00 HPF hasta las 18:00 HPF, mientras que en P. bachypomus se inició a las 12:00 HPF y llego al 80% de larvas eclosionadas a las 14:00 HPF
  • 33. En Pseudoplatystoma sp existe un mayor espacio que en P. brachypomus • El diámetro de los oocitos hidratados después de la fertilización de Pseudoplatystoma sp es mayor que los de P. brachypomus, lo cual le proporcionaría al embrión una mayor protección de los daños mecánicos del ambiente • Pseudoplatystoma sp presenta un ritmo más heterogéneo en la división, mientras que P. brachypomus es más rápido y más homogéneo • La heterogeneidad de eclosión provoca el canibalismo