1. Presentación de resultados
Parte II
Expresión de GFP en E. coli
Favarolo, Belén
Wisner,
Darío
Fuentes,
Cynthia
Uran Landaburu,
Lionel

2. ...Recordando conclusiones finales de la
parte I
 Tiempo de inducción: 1hs
 Temperatura: 37°C
 Medio de cultivo: Riesenberg
 Inductor: IPTG 1mM
 Batch alimentado

3. Flujo de trabajo
Fermentación
Ultrafiltración
Centrifugación
Cromatografía de
pseudoafinidad
Ruptura
Cromatografía
de exclusión
molecular

4. Fermentaci
ón
μMax = 0,8/h
Yx/s = 0,386 g/g

5. Ruptura
celular

6. Cromatografía
pseudoafinida
d (IMAC)

7. Cromatografía
pseudoafinida
d (IMAC)

8. Cromatografí
a exclusión
molecular

9. Cromatografí
a exclusión
molecular

10. Tabla final
Vol (ml)
Prot tot
(mg)
FU/ml
UFT
Ae
Entrada
IMAC
500
1.963,889
404.490
202.245.000
102982
1,000
100
Entrada
CEM
147
285,833
617.000
90.699.000
317314
0,448
44,846
Salida CEM
180
252
370.500
66.690.000
264643
0,735
73,529
0,330
32,975
Rendimiento global
Rendimient Rendimient
o
o (%)

11. Tiempo de procesos
Preparación
•2
horas
Fermentación
Ultracentrifugación
• 10
horas
Ultracentifugación
• 20
minutos
Ultrafiltración
• 20
minuto
s
•3
minutos
IMAC
• 1 hora
40
minutos
Ruptura
CEM
•3
horas
Tiempo total:
17 horas 27
minutos
•4
minutos

12. Otros datos de interés...
Por cada litro de cultivo, se obtiene la
cantidad de proteína equivalente a
8.502.975 UF.
Los 4 litros de cultivo procesados hubiesen
dado
una cantidad de proteína equivalente a
34.011.900 UF (considerando que los
rendimientos obtenidos se mantienen).