2. Qué es la iluminación de Köhler
El sistema de iluminación está constituido por las partes del microscopio que producen o captan,
reflejan y regulan la intensidad de la luz que se utiliza para la observación microscópica. Uno de los
aspectos críticos a considerar en la microscopía óptica es la fuente de luz que se emplea para
iluminar el espécimen. Si la muestra es iluminada de manera inadecuada, la calidad de la imagen
que se obtiene se verá afectada, aun cuando se disponga de un excelente sistema óptico. La
iluminación óptima debe ser brillante, sin resplandores y en lo posible debe dispersarse de manera
uniforme en el campo de observación. El método de iluminación que optimiza la observación
microscópica fue diseñado por el profesor August Köhler el año 1893. Este un método de
iluminación permite aprovechar al máximo las capacidades de las lentes (objetivos) iluminando la
muestra en estudio con un campo de luz uniforme cuyo diámetro sea igual al del área de captura
del objetivo. Los microscopios actuales están diseñados para utilizar la iluminación Köhler.
El condensador se desplaza verticalmente hasta obtener una imagen nítida del diafragma de
campo. La iluminación ideal se consigue cuando el condensador se encuentra lo más cerca de la
preparación. El diafragma de campo regula el diámetro de la apertura de la iluminación y al cerrarlo
se incrementan los contrastes.
3. Mencione 5 tipos diferentes de microscopio
Un microscopio compuesto es un aparato óptico hecho para agrandar objetos, consiste en un
número de lentes formando la imagen por lentes o una combinación de lentes posicionados cerca
del objeto, proyectándolo hacia los lentes oculares u el ocular. El microscopio compuesto es el tipo
de microscopio más utilizado.
Un microscopio óptico, también llamado "microscopio liviano", es un tipo de microscopio
compuesto que utiliza una combinación de lentes agrandando las imágenes de pequeños objetos.
Los microscopios ópticos son antiguos y simples de utilizar y fabricar.
4. Un microscopio digital tiene una cámara CCD adjunta y está conectada a un LCD, o a una
pantalla de computadora. Un microscopio digital usualmente no tiene ocular para ver los
objetos directamente. El tipo triocular de los microscopios digitales tienen la posibilidad de
montar una cámara, que será un microscopio USB.
A microscopio fluorescente o "microscopio epi-fluorescente" es un tipo especial de
microscopio liviano, que en vez de tener un reflejo liviano y una absorción utiliza
fluorescencia y fosforescencia para ver las pruebas y sus propiedades.
Un microscopio electrónico es uno de los más avanzados e importantes tipos de microscopios con
la capacidad más alta de magnificación. En los microscopios de electrones los electrones son
utilizados para iluminar las partículas más pequeñas. El microscopio de electrón es una
herramienta mucho más poderosa en comparación a los comúnmente utilizados microscopios
livianos.
5. En qué caso se utiliza el aceite de inmersión
La mayor resolución ganada a través del uso de aceite de inmersión habilita a los usuarios a
enfocar objetos muy pequeños que no se resolvería usando objetivos secos. Los objetivos de
aceite inmersión son usados para la observación objetivos muy pequeños, como las bacterias
individuales y aplicaciones de alta resolución, como el TIRF y las aplicaciones de fluorescencia con
focal.
Cómo se calcula el aumento del objetivo del microscopio
Ampliación del microscopio. En términos generales se define como la relación entre el diámetro
aparente de la imagen y el diámetro o longitud del objeto. Esto quiere decir que si el microscopio
aumenta 100 diámetros un objeto, la imagen que estamos viendo es 100 veces mayor linealmente
que el tamaño real del objeto (la superficie de la imagen será 1002, es decir 10.000 veces mayor).
Para calcular el aumento que está proporcionando un microscopio, basta multiplicar los aumentos
respectivos debidos al objetivo y el ocular empleados. Por ejemplo, si estamos utilizando un
objetivo de 45X y un ocular de 10X, la ampliación con que estamos viendo la muestra será: 45X x
10X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto está ampliada 450 veces, también
expresado como 450 diámetros.
Qué es la resolución
La resolución se refiere a la agudeza y claridad de una imagen. El término se utiliza normalmente
para describir monitores, impresoras e imágenes. En el caso de impresoras de matriz de puntos y
de impresoras láser, la resolución indica el número de puntos por pulgada. Por ejemplo, una
impresora 300 dpi (dots per inch o puntos por pulgada) es aquella que es capaz de imprimir 300
puntos distintos en una línea de 1 pulgada de largo. Esto significa que puede imprimir 90.000
puntos por pulgada cuadrada.
Mencione 5 pasos al menos, en el manejo del microscopio de acuerdo a la presentación que se
anexa.
1. Abrir el diafragma de apertura de la condensadora, hacia la derecha.
2. Enfocar con nitidez una zona de la muestra que parezca interesante. Aún no es necesario tener
en cuenta la calidad de la imagen.
3. Cerrar el diafragma de campo, hacia la izquierda. De esta forma se oscurecen la mayor parte de
las zonas del campo de la imagen. Se ve un foco luminoso impreciso y desenfocado. Si este foco
luminoso desaparece del campo de visión al cerrar el diafragma de campo, debe centrase éste
último. En este caso, se abre el diafragma hasta que pueda ver el foco luminoso del borde
del campo visual. En el caso de que no pueda ver el foco luminoso, es probable que la
condensadora esté colocada a una altura incorrecta. En ese caso, se ajusta la altura de la
condensadora hasta que se pueda ver el diafragma de campo.
4. Enfocar la imagen de la condensadora, es decir, el borde del foco luminoso, utilizando la rueda
de foco de la condensadora hasta que la imagen de la apertura sea nítida.
5. Centrar en el campo visual el foco luminoso usando los tornillos de centrado. El centrado es más
sencillo si se abre un poco el diafragma de campo para aumentar el tamaño del foco luminoso.
6. Abrir el diafragma de campo (hacia la derecha) justo hasta que desaparezca del campo de
visión.
7. Cerrar el diafragma de apertura de la condensadora (hacia la izquierda) hasta que se alcance el
contraste deseado. Si es necesario, bajar la intensidad de la luz con la rueda del lateral izquierdo
del microscopio. Una apertura de condensadora muy cerrada aumenta el contraste pero disminuye
la resolución, no se debe usar para graduar la cantidad de luz que recibe la muestra.
6. La posición más adecuada suele ser 2/3 de apertura.
ENFOQUE
El foco se ajusta utilizando las ruedas a ambos lados del microscopio.
También se puede ajustar con los botones de la parte derecha:
Si se ha establecido un límite superior para el objetivo (estará indicado por
Una flecha en el display del LCD del panel de control) no se podrá mover el
Objetivo usando estos botones más allá de ese límite. Se usarán las ruedas de
Foco de los laterales.
En los objetivos del microscopio, los anillos coloreados que poseen, ¿qué indican
Cómo se lleva a cabo dicha ajuste de iluminación en el
microscopio Es una medida de seguridad para evitar que accidentalmente se dañen los objetivos al
Subir usando estos botones.
El foco es electrónico y tiene cuatro pasos:
S0 paso de foco fino
S1 paso de foco medio
S2 paso de foco medio-grueso
S3 paso de foco grueso
OBSERVACIÓN EN CAMPO CLARO
Observación en modo de luz transmitida sin utilizar ninguna técnica de aumento de
contraste (ni contraste de fases ni interferencial ni luz polarizada)
Se gira la torreta de la condensadora a la posición BF
Se gira la torreta de los prismas DIC (bajo los
objetivos) a la posición BF.
Se selecciona en el panel de control la posición
del filtro de fluorescencia SCAN (sin filtro).
Para qué sirve la iluminación de Köhler?
Consiste en regular la marcha de los rayos de luz, centrando la mayor intensidad de luz y cubriendo exactamente el
diámetro frontal de cada lente objetiva en su apertura numérica específica, de esta manera, poder aprovechar al 100%
laluz emitida por lafuente emisora.
Se compone de dos diafragmas: 1. Uno de campo situado a nivel de la lámpara.2. Uno de apertura o iris, situado
debajo del condensador. La Imagen del diafragma de campo es proyectada en el plano de la preparación por el
condensador, el cual se desplazará verticalmente hasta conseguir una imagen lo más nítida posible del diafragma La
iluminación más nítida seconsigue cuándo el condensador seencuentra lomás cercade lapreparación. El
Diafragma de campo sirve para regular la apertura de la iluminación, es decir, el contraste, la profundidad de campo y
el poder deresolución.