ADN Recombinante

1. Recombinante
ADN

2. Una molécula de ADN que
incluye el ADN de diferentes
fuentes.
ADN recombinante
(Horton et al., 2008)

3. Bacteriófagos
Estas moléculas son
creadas en la naturaleza
con más frecuencia que en
el laboratorio; por ejemplo,
cada vez que un
bacteriófago infecta su
célula huésped e integra su
ADN al genoma huésped,
se crea un recombinante
(Ríos Sandoval. 2019)

4. El ADN recombinante es una tecnología
que utiliza enzimas para cortar y unir
secuencias de ADN de interés. Las
secuencias de ADN recombinado se
pueden colocar en unos vehículos
llamados vectores que transportan el ADN
hacia el lugar adecuado de la célula
huésped donde puede ser copiado o
expresado.
Tecnología de ADN
recombinante
(Horton et al. 2019)

5. De los genes a investigar
Especificas de cada gen
Funcionabilidad y
caracteristicas de los genes
funciones
Estructura
Genes especificos
Propiedades enzimaticas de
microorganismos
Aislar
Manipular
Amplificar
Estudiar
Genes especificos mediante
PCR
Tecnología del ADN recombinante.
Funciones
(Ríos Sandoval. 2019)

6. Preparacion de ADN
recombinante

7. • Aislamiento y purificación del ADN.
Se preparan moléculas de ADN vector y
objetivo mediante diversos métodos
sistemáticos. En algunos casos, el ADN
puede ser sintetizado in vitro.
(Horton et al., 2008)

8. • División del ADN en secuencias particulares.
Se divide el ADN para generar
fragmentos de longitud definida, o con
extremos específicos. El fragmento de
ADN de interés se llama inserto de
ADN. En el laboratorio, el ADN suele
dividirse tratándolo con nucleasas y
endonucleasas de restricción
comerciales.
(Horton et al., 2008)

9. El ADN vector y el ADN objetivo se
dividen con endonucleasas de
restricción para generar extremos que
puedan unirse entre sí. En casos
donde se producen extremos
cohesivos, las dos moléculas se unen
por revenido (apareamiento de bases)
de los extremos complementarios. A
continuación las moléculas se unen en
forma covalente entre sí en una
reacción catalizada por ADN ligasa
Vectores de clonación
(Horton et al., 2008)

10. Ligadura de fragmentos de
ADN.
Otra manera de formar la
molécula de ADN recombinante
es dividiendo el ADN de interés
para producir ADN de inserción
para entonces ligar el ADN de
inserción al ADN vector.
Típicamente, los fragmentos de
ADN se unen usando ADN ligasa.

11. Introducción de ADN recombinante en las
células huésped compatibles.
Para propagarse, la molécula de ADN recombinante (ADN de inserción unida a ADN
vector) debe introducirse en una célula huésped compatible donde se pueda replicar. A la
integración directa de ADN por una célula huésped se le llama transformación genética (o
sólo transformación). El ADN recombinante también se puede empacar en partículas
virales y transferirse a las células huésped por transfección.
(Horton et al., 2008)

12. Replicación y expresión del ADN recombinante
en células huésped.
Los vectores de clonación permiten insertar el ADN por replicar, y en algunos casos
expresarlo en una célula huésped. La capacidad de clonar y expresar ADN con
eficiencia depende de la elección de los vectores y huéspedes adecuados.
(Horton et al., 2008)

13. Identificación de células huésped que contienen
el ADN recombinante de interés
Una vez que se han unido in vitro un vector de clonación y un
ADN de inserto, la molécula de ADN recombinante se puede
introducir a una célula anfitriona, con mayor frecuencia en
una célula bacteriana como E. coli. En general, la
transformación no es una forma muy eficiente de que el ADN
entre a una célula, porque sólo un pequeño porcentaje de las
células toman ADN recombinante
(Horton et al., 2008)

14. Identificación de células huésped que contienen
el ADN recombinante de interés
Los vectores suelen contener marcadores
genéticos o genes de fácil detección, que
permiten seleccionar células de huésped que
han tomado ADN ajeno. La identificación de
determinado fragmento de ADN suele implicar un
paso adicional: clasificar una gran cantidad de
clones de ADN recombinante. Casi siempre este
es el paso más difícil.
(Horton et al., 2008)

15. Para clasificar una biblioteca de
ADN con una sonda. Las colonias
de células que contienen
moléculas recombinantes se
cultivan en cajas de Petri. Se
prepara una réplica de las
colonias sobreponiendo un disco
de filtro en la caja. El ADN y la
proteína se separan de las células
in situ y se inmovilizan al filtro.
(Horton et al., 2008)

16. Entonces se incuba el filtro con la
sonda marcada, bajo condiciones
en que la sonda reconozca en
forma específica al ADN o a la
proteína que se desea. Después
de que se lava y separa la sonda
unida en forma no específica, la
sonda unida en forma específica
se detecta con un método
adecuado para la marca.
(Horton et al., 2008)

17. Expresión de proteínas mediante tecnología de
ADN recombinante
El ADN clonado o amplificado se puede
purificar y secuenciar, y se utiliza para
producir ARN y proteína, o introducirlo en
organismos con objeto de cambiar su
fenotipo. Una de las razones por las que la
tecnología de ADN recombinante ha tenido
un impacto tan grande en bioquímica es que
ha superado muchas de las dificultades
inherentes en la purificación de proteínas
poco abundantes, y en determinar sus
secuencias de aminoácidos
(Negrete et al., 2022)

18. Aplicaciones de la tecnología de ADN
recombinante
● Efecto de un gen adicional de hormona de
crecimiento en ratones. Los dos ratones
son hermanos. El ratón de la izquierda es
transgénico y lleva un gen hormona de
crecimiento de ratón. El ratón de la
derecha es normal.

19. • Conclusiones
La tecnología del ADN recombinante tiene
un gran impacto y abre las puertas a
futuras investigaciones con alcances aun
desconocidos, donde la alteración de los
genes ha producido plantas con mayores
rendimientos, alterando características de
maduración o de resistencia a insectos,
enfermedades o heladas. Otra área de
investigación es la incorporación de
capacidad fijadora de nitrógeno en plantas
que carecen de ella, entre otras mas
aplicaciones.

20. • Bibliografia
H. Robert Horton, Laurence A. Moran, K. Gray Scrimgeour, Marc D. Perry, & J. David
Rawn. (2008). Principios de bioquímica (Cuarta). Pearson.
MARCELA RÍOS SANDOVAL. (2019). CARACTERIZACIÓN GENÓMICA,
MORFOLÓGICA Y REPLICATIVA DEL BACTERIÓFAGO ΦXaF18 DE
Xanthomonas vesicatoria. CENTRO DE INVESTIGACIÓN Y ASISTENCIA EN
TECNOLOGÍA Y DISEÑO DEL ESTADO DE JALISCO, A. C.
Andrea Monserrat Negrete Paz. (2022). Modelado de proteínas, de la secuencia a la
función.
Brenda Lorena Fina, Mercedes Lombarte, & Alfredo Rigalli. (2013). INVESTIGACIÓN
DE UN FENÓMENO NATURAL: ¿ESTUDIOS IN VIVO, IN VITRO O IN SILICO?
9(3), 239–240.
Helena Isabel Gomes Dos Santos. (2013). Hacia una Visión más Dinámica de la
Bioinformática Estructural en el Diseño de Fármacos y Avances en la Terapia
Personalizada: Desarrollo y Aplicaciones. Universidad Autónoma de Madrid.