2. TINCIONESSIMPLES
La tinción simple es aquella que se
caracteriza por el uso de un solo
colorante. De este modo, toda la
muestra se tiñe de un solo color,
conociéndose así la morfología celular
del microorganismo en cuestión
4. Naturaleza:
● Es un colorante básico
● Pertenece a la familia de las tiazinas.
● Fórmula química de C16H18ClN3S
● Polvo cristalino de color azul oscuro
● Soluble en agua y alcohol
● Insoluble en éter y cloroformo
5. ● El uso más común de esta tintura en la
microscopía se encuentra en la tinción de
Wright para teñir frotis de sangre.
● Dado que el azul de metileno es capaz de
teñir de azul núcleos también se usa para
este propósito..
6. CRISTALVIOLETA:
Cristal violeta (tinción): de naturaleza
básica con afinidad a sustancias cargadas
negativamente como las paredes celulares
bacterianas, así se tiñen de morado las
bacterias Gram positivas y Gram negativas
i
7. Las bacterias Gram negativas pierden un colorante (el
cristal violeta) con mayor facilidad que las Gram positivas.
La razón es la menor cantidad de mucopéptido de las
paredes de las bacterias Gram negativas
8. El cristal violeta es básico (se une a componentes celulares de carga
negativa). Atraviesa la envuelta celular y se acumula en el citoplasma.
Para facilitar la diferenciación se mezcla lugol con cristal violeta: el
complejo cristal-violeta-lugol precipita. Así el lugol dificulta la salida del
cristal violeta de ambos tipos de células.
10. Naturaleza:
● Es un colorante ácido
● Pertenece a la familia de
los colorantes de
xanteno.
● Son solubles en agua y se
caracterizan por tener
una estructura molecular
que incluye un anillo de
xanteno.
11. ● pH: cerca de 5,0 para una
tinción óptima.
● Coloración: tiende a
colorear estructuras ácidas,
como citoplasma y algunas
estructuras celulares, en
tonos rojos o rosados.
Características:
12. ● Complementaria a la tinción de
hematoxilina: A menudo se usa en
combinación con la tinción de
hematoxilina, que colorea estructuras
básicas como los núcleos celulares en
tonos azulados o púrpuras. Juntas, estas
tinciones proporcionan un contraste que
permite una mejor visualización de las
células y sus componentes.
13.
14. Tincióndeeosinayhematoxilina
HEMATOXILINA:
Es un colorante, se utiliza para
ilustrar los detalles nucleares
en las células. No es un
colorante en sentido estricto
sino que es la hemateína, su
producto oxidado, la que teñirá
sustancias como la cromatina
del núcleo
15. Naturaleza:
● Es un colorante básico que
pertenece a la familia de los
colorantes de triarilmetanos.
Estos colorantes tienen una
estructura química que
incluye un grupo
triarilmetano, y en el caso de
la hematoxilina, también un
grupo hidroxilo.
16. ● La adición del mordiente
(sustancia que incrementa
la afinidad entre la célula y
el tinte) mejora la
capacidad de la hemateína
para unirse a los
componentes aniónicos de
los tejidos.
Características:
17. ● Muestras fijadas e incluidas
en parafina.
● Se han cortado en secciones
de unas 8 µm de grosor y
adheridas a portaobjetos
recubiertos con gelatina-
alumbre.
Procedimiento detinciónH&E:
18. ● Desparafinado: 2x10 min en
xileno
● Hidratación: 2x10 min en etanol
100º, 10 min en etanol 96º, 10
min en etanol 80º, 10 min en
etanol 50º, 5 min en H2O
destilada
● Hematoxilina: 5-10 min en
Hematoxilina de Mayer
PASOS:
19. ● Diferenciación: 15 min en agua
corriente
● Azulado: 2x1 min en H2O
destilada
● Eosina: 0.5 a 2 min en Eosina al
0.2 % en H2O,tiempo variable
(unos cuantos segundos) en 70º
para diferenciación.
PASOS:
20. ● Deshidratación: 20s en etanol
96º, 2x3 min en etanol 100º
● Aclaramiento: 2x10 min en
xileno
● Montaje: Montado con medio
de montaje
PASOS:
21.
22. Colágeno: rosa pálido.
Músculo: rosa fuerte.
Citoplasma: rosado.
Núcleos: azul oscuro o púrpura (se
tiñe sólo la cromatina).
Eritrocitos: color cereza.
RESULTADOS:
24. Tincióndetinta
china
Esta tinción se realiza utilizando
nigrosina, que es una tinción
ácida. La nigrosina es un
colorante aniónico, lo que
significa que tiene una carga
negativa.
Espiroquetas
25. Tinción detinta china
Líquido
cefalorraquídeo, la
prueba no es tan
sensible como la
detección de antígenos
del criptococo
Se tiñe el fondo del
campo, en lugar del
microorganismo
las cápsulas que
rodean a los
patógenos se vean
como un halo
La especificidad
también es limitada;
los leucocitos pueden
parecer encapsulados.
01
03
02
04
26.
27. Tinciónconlugol
Se utiliza para reconocer la
presencia de almidón, porque
esta sustancia adsorbe el yodo
produciendo una coloración azul
intensa, coloración que
desaparece al calentar, porque
se rompe la estructura que se ha
producido, pero vuelve a
aparecer al enfriar
28.
29. ¿Ellugolesunatinción?
Es una solución de yodo
elemental (I2) y yoduro de
potasio (KI) disueltos en agua
destilada. (solución acuosa).
Por ejemplo en las tinciones de
Gram, para fijar el cristal violeta.
(usualmente bacterias gram
positivas)
30.
31. TinciondeSafranina
Es un colorante biológico
conocido también como
dimetil Safranina y rojo basico
2. Es utilizado comúnmente en
microbiología e histología
para tejidos biológicos y
microorganismos.
32. Naturaleza:
● Se encuentra en forma de
cristales oxidados oscuros o
polvo verde oscuro, es soluble
en agua.
● No es cancerigeno, no
inflamable.
● Puede llegar a irritar la piel o los
ojos.
● Se considera fácil de manejar
en el laboratorio.
33. Estructura
Se conoce como
colorante meriquenoide
debido a su sistema de
anillos por la posición de
dos de sus anillos e tipo
bencenoide y dos de
tipo quinoide.
Carga(+)
Al ser una molécula con
carga positiva (cation) es
capaz de combinarse
con elementos celulares
de carga negativas.
pH
El óptimo uso de
safranina es entre 0.5 y
2.5, aunque puede variar
segun su aplicacion.
CARACTERISTICAS
34. Aplicación desafraninaen la tinción de
Gram
La tinción de gram es un
ejemplo común donde se
utiliza la safranina después
de la tinción de cristal violeta
y lugol donde las bacterias
gram negativas retienen el
colorante safranina después
del lavado del etanol.
35. ¿QuépasaconlasGrampositivas?
Las gram positivas no se tiñen ya que debido a ue tienen una gran
retención por el colorante cristal violeta y al efecto del lugol,
tambien son resistentes al lavado de etanol, ya que no tienen una
capa gruesa de peptidoglicanos en su pared celular que queda
teñida de violeta-azul.
36.
37. Otrastincionesdondeseaplica
safranina
● Tinción de castañeda para tinción de
rickettsias.
● Tinción de koster modificado para
brucellas.
● Tinción de cápsulas bacterianas.
● Tincion de esporas Schaeffer Fulton.
38. Tincióncon Nigrosina
La negrosina es un colorante
anionico negro utilizado como una
tincion acida negativa que permite
visualizar las capsulas y esporas de
muchos organismos como
protoxoos, hongos y espiroquetas,
es incapaz de penetrar en las
bacterias ya que es repelido por la
pared bacteriana.
39. Caracteristicas
Proporciona un fondo
oscuro contra formas claras
de la célula que aparece
manifiestamente viables y
con buen contraste.
Técnica rápida y sencilla
que ayuda a determinar la
morfología celular del
organismo.
40. Mecanismode
acción:
La nigrosina se une principalmente a las
estructuras celulares mediante
interacciones físicas y electrostáticas.
Debido a su naturaleza aniónica, tiene
afinidad por componentes celulares
cargados positivamente, como las
proteínas y algunas estructuras lipídicas.
Esto resulta en una coloración negativa de
las células y tejidos.
41. Adicionar
colorante
Preparacióndemuestracon
nigrosina
1. Se coloca una muestra
de agar nutritivo de los
cultivos en un
portaobjetos.
2. Se le agrega una gota de
agua.
3. Se flamea 3-4 veces.
4. se deja secar.
Observar al
microscopio
Proceso de
fijación
1. Se agrega una gota de
colorante nigrosina a la
muestra de portaobjetos.
2. con otro portaobjetos se
procede a distribuir el
colorante en un ángulo de
45° sobre la placa.
3. Se deja reposar el
colorante.
4. se lava y procede a dejar la
muestra a que se seque.
42. Tinción de
Giemsa
La tinción de Giemsa se utiliza
ampliamente en citogenética y para la
identificación de parásitos como
Plasmodium (causante de la malaria) y
otros patógenos en muestras de sangre.
También es útil en la identificación de
ciertos hongos, bacterias, y para el
análisis de la morfología celular,
especialmente en la visualización de
estructuras intracelulares como los
corpúsculos de Barr.
43. La tinción de Giemsa es una mezcla de tintes
que incluye azul de metileno (básico) y
eosina (ácida). La naturaleza química de
estos componentes permite que la tinción
actúe tanto en componentes ácidos como
básicos de las células, dependiendo de las
afinidades de los diferentes elementos
celulares hacia los componentes de la
tinción.
¿Acídoobásica?
44. La tinción de Giemsa es de naturaleza
compleja debido a la combinación de tintes
básicos y ácidos. Esta combinación permite
la diferenciación entre distintos componentes
celulares basándose en sus propiedades
químicas, lo que resulta en una gama de
colores en la muestra observada que facilita
la identificación de estructuras específicas.
NATURALEZA
45. Material
· Frotis sanguíneo seco y rotulado.
· Cubeta.
· Varillas paralelas.
· Frasco lavador con agua destilada.
· Pipetas pasteur.
· Cronómetro.
¿Cómoseocupa?
Reactivos
· Metanol como solución fijadora.
· Colorante de Giemsa.
46. Técnica
1. Llenar de agua la cubeta para que los colorantes no se peguen al fondo.
2. Colocar las varillas paralelas sobre los bordes de la cubeta.
3. Colocar las extensiones sanguíneas sobre las varillas paralelas.
4. Cubrir las extensiones con metanol y esperar 4-5 minutos.
5. Decantar para eliminar el metanol.
6. Cubrir las extensiones con solución extemporánea de Giemsa recién diluida a
1/10 (1 gota de Giemsa por 9 gotas de agua destilada) y dejar actuar durante
25 minutos.
7. Lavar las extensiones con agua destilada para eliminar los restos de colorante.
8. Secar las extensiones al aire, colocas en vertical
9. Observar los frotis sanguíneos teñidos al microscopio óptico
47. Tinción de
FucsinaÁcida
La tinción de fucsina ácida se utiliza
principalmente en el diagnóstico de
tuberculosis y otras micobacterias,
mediante la técnica de tinción de
Ziehl-Neelsen, así como para la
identificación de ciertos hongos y
parásitos. Es efectiva para destacar
bacterias ácido-alcohol resistentes.
48. La fucsina ácida es, como su nombre
indica, un tinte ácido. Sin embargo, en el
contexto de la tinción de Ziehl-Neelsen, su
propósito es teñir organismos que son
resistentes a la decoloración por ácidos y
alcoholes debido a la presencia de lípidos
en sus paredes celulares.
¿Acídoobásica?
49. La fucsina ácida es un tinte sintético con
propiedades que permiten la adhesión a
componentes celulares específicos,
particularmente aquellos con alta
concentración de lípidos en sus paredes.
Esto la hace especialmente útil para
identificar micobacterias, cuya característica
de resistencia a la decoloración por ácidos es
un rasgo distintivo importante para su
diagnóstico.
NATURALEZA
50. Técnica
Tinción en la cubeta de tinción
Desparafinar de forma habitual los
preparados histológicos y rehidratar
en serie descendente de alcohol.
Los portaobjetos deberían ser
escurridos bien por goteo después
de los diferentes pasos de tinción,
de esta manera se podrá evitar el
innecesario arrastre de soluciones.
¿Cómoseocupa?
51. Las tinciones simples en microbiología son fundamentales
para la observación y el estudio de microorganismos, ya que
permiten aumentar el contraste entre las células y el medio,
haciendo posible su visualización bajo el microscopio. A
través de estas técnicas, se pueden identificar formas,
tamaños y arreglos celulares básicos, proporcionando
información preliminar valiosa para la clasificación y
diagnóstico de microbios.
CONCLUSIÓN
52. BIBLIOGRAFÍA
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ptima.
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https://bibliotecaia.ism.edu.ec/Repo-book/m/MicrobiologiaMedica.pdf
