Determinación de fungicidas en vino mediante extracción en fase sólida y cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas usando un analizador híbrido tipo Q-TOF
Este proyecto describe el desarrollo de un método para la determinación de nueve fungicidas orgánicos en vino mediante extracción en fase sólida y cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas de alta resolución. El método implica la optimización de la preparación de muestras usando SPE y de la separación cromatográfica y detección por LC-MS/MS. El método desarrollado proporciona límites de detección bajos y recuperaciones cuantitativas
Optimización y aplicación de un procedimiento de dispersión de matriz en fase...Jorge Casado Agrelo
A simplified sample preparation method, based on the matrix solid-phase dispersion technique,
is proposed for the sensitive determination of 15 organic fungicides in vineyard
soils by gas chromatography–mass spectrometry (GC–MS). Under final working conditions,
sieved samples (0.5 g) were blended and dispersed with 2 g of C18 and transferred to a
polypropylene syringe containing 1 g of diatomaceous earth.Analyteswere recovered using
10 mL of ethyl acetate, this extract was concentrated to 1 mL and fungicides determined by
GC–MS, without additional cleanup. The method provided recoveries in the range from 74
to 122% for soils with total carbon contents up to 5.5% and it allowed the use of external
standard as quantification technique. Inter-day precision, given as relative standard deviations,
stayed between 3 and 13%, and the limits of quantification were comprised between
0.6 and 15 ng g−1. Several fungicides were found in the top layer of vineyard soils with the
highest detection frequency and maximum concentration corresponding to iprovalicarb.
Some real samples were also submitted to pressurized liquid extraction. Measured concentrations
were in excellent agreement with those obtained by matrix solid-phase dispersion,
which reinforces the accuracy of the latter methodology.
Determinación de benzotriazoles en muestras de agua mediante microextracción ...Jorge Casado Agrelo
In this work, we investigate the suitability of a commercial available and low cost polyethersufone (PES) sorbent for the microextraction of 1H-benzotriazole (BTri), and four polar derivatives (4 and 5-methyl-1H-benzotriazole, 4-TTri and 5-TTri; 5,6-dimethyl-1H benzotriazole, XTri; and 5-chloro-1H-benzotriazole, 5-ClBTri) from surface and wastewater samples. The performance of liquid chromatography (LC) combined with quadrupole time-of-flight mass spectrometry (QTOF-MS) for the selective determination of target compounds is also discussed. Parameters affecting the efficiency of the microextraction step, such as sample’s pH, ionic strength, stirring speed and extraction lapse of time, and the PES membrane desorption process have been thoroughly investigated. Analytes were extracted from 15 mL samples, containing a 30% of sodium chloride and adjusted at pH 4.5, using a tubular PES sorbent (5 cm length x 0.7 mm o.d., sorbent volume 42 μL). After methanol desorption and solvent exchange, benzotriazoles were determined by LC-MS, with chromatograms extracted using a mass window of 20 ppm, centered in their [M+H]+ ions. The identity of chromatographic peaks was confirmed with accurate ion product scan (MS/MS) spectra. The method provided limits of quantification (LOQs) between 0.005 and 0.1 ng mL-1, and relative recoveries from 81% to 124% (except for XTri in sewage samples, ca. 60%) with associated standard deviations between 2% and 9%. The efficiency of the PES sorbent for the extraction of these compounds has been compared with that attained by stir-bar sorptive extraction (SBSE), with polydimethylsiloxane (PDMS) covered stir bars. The PES polymer achieved significant higher responses (5- to 20-fold) for these polar pollutants. To the best of our knowledge, this research constitutes the first application of both techniques (microextraction using a PES sorbent and LC-QTOF-MS) for benzotriazoles determination in water samples. The method was used to provide data regarding the levels of target compounds in river and urban wastewater samples, including the individual quantification of 4-methyl and 5-methyl-benzotriazole isomers. Obtained results confirmed the ubiquity of benzotriazole, 4-methyl and 5-methyl-benzotriazole in urban wastewater and their incomplete removal at sewage treatment plants
Presentación de equipos de intercambio iónico para la estabilización de vinos y mostos. Caracteríscticas y ventajas. Si desea más información puede contactar con nosotros a través de correo electrónico info@invia1912.com o por teléfono en horario comercial (+34) 93 890 24 18 extensión 4
Optimización y aplicación de un procedimiento de dispersión de matriz en fase...Jorge Casado Agrelo
A simplified sample preparation method, based on the matrix solid-phase dispersion technique,
is proposed for the sensitive determination of 15 organic fungicides in vineyard
soils by gas chromatography–mass spectrometry (GC–MS). Under final working conditions,
sieved samples (0.5 g) were blended and dispersed with 2 g of C18 and transferred to a
polypropylene syringe containing 1 g of diatomaceous earth.Analyteswere recovered using
10 mL of ethyl acetate, this extract was concentrated to 1 mL and fungicides determined by
GC–MS, without additional cleanup. The method provided recoveries in the range from 74
to 122% for soils with total carbon contents up to 5.5% and it allowed the use of external
standard as quantification technique. Inter-day precision, given as relative standard deviations,
stayed between 3 and 13%, and the limits of quantification were comprised between
0.6 and 15 ng g−1. Several fungicides were found in the top layer of vineyard soils with the
highest detection frequency and maximum concentration corresponding to iprovalicarb.
Some real samples were also submitted to pressurized liquid extraction. Measured concentrations
were in excellent agreement with those obtained by matrix solid-phase dispersion,
which reinforces the accuracy of the latter methodology.
Determinación de benzotriazoles en muestras de agua mediante microextracción ...Jorge Casado Agrelo
In this work, we investigate the suitability of a commercial available and low cost polyethersufone (PES) sorbent for the microextraction of 1H-benzotriazole (BTri), and four polar derivatives (4 and 5-methyl-1H-benzotriazole, 4-TTri and 5-TTri; 5,6-dimethyl-1H benzotriazole, XTri; and 5-chloro-1H-benzotriazole, 5-ClBTri) from surface and wastewater samples. The performance of liquid chromatography (LC) combined with quadrupole time-of-flight mass spectrometry (QTOF-MS) for the selective determination of target compounds is also discussed. Parameters affecting the efficiency of the microextraction step, such as sample’s pH, ionic strength, stirring speed and extraction lapse of time, and the PES membrane desorption process have been thoroughly investigated. Analytes were extracted from 15 mL samples, containing a 30% of sodium chloride and adjusted at pH 4.5, using a tubular PES sorbent (5 cm length x 0.7 mm o.d., sorbent volume 42 μL). After methanol desorption and solvent exchange, benzotriazoles were determined by LC-MS, with chromatograms extracted using a mass window of 20 ppm, centered in their [M+H]+ ions. The identity of chromatographic peaks was confirmed with accurate ion product scan (MS/MS) spectra. The method provided limits of quantification (LOQs) between 0.005 and 0.1 ng mL-1, and relative recoveries from 81% to 124% (except for XTri in sewage samples, ca. 60%) with associated standard deviations between 2% and 9%. The efficiency of the PES sorbent for the extraction of these compounds has been compared with that attained by stir-bar sorptive extraction (SBSE), with polydimethylsiloxane (PDMS) covered stir bars. The PES polymer achieved significant higher responses (5- to 20-fold) for these polar pollutants. To the best of our knowledge, this research constitutes the first application of both techniques (microextraction using a PES sorbent and LC-QTOF-MS) for benzotriazoles determination in water samples. The method was used to provide data regarding the levels of target compounds in river and urban wastewater samples, including the individual quantification of 4-methyl and 5-methyl-benzotriazole isomers. Obtained results confirmed the ubiquity of benzotriazole, 4-methyl and 5-methyl-benzotriazole in urban wastewater and their incomplete removal at sewage treatment plants
Presentación de equipos de intercambio iónico para la estabilización de vinos y mostos. Caracteríscticas y ventajas. Si desea más información puede contactar con nosotros a través de correo electrónico info@invia1912.com o por teléfono en horario comercial (+34) 93 890 24 18 extensión 4
ELABORACION DE UN LIMPIADOR ANTIBACTERIAL A BASE DE LIMON Melani930482
DIAPOSITIVAS SOBRE PROYECTO DE GRADO QUE LLEVA POR TITULO:
ELABORACION DE UN LIMPIADOR ANTIBACTERIAL A BASE DE LIMON (CITRUS LIMONIUM) EN EL SECTOR SABATINO, SAN JOSE DE GUANIPA, ESTADO ANZOATEGUI.
Soluciones METTLER TOLEDO para ingenierias del sector agua☆ Sara Bernia
Presentación de soluciones para la instrumentación de parámetros de control del agua en diferentes sectores industriales. Instrumentación recomendada y presentación de equipos.
Más información: sara.bernia@mt.com
Tratamiento de Suelos y Aguas pesadas con Ficonutrientes y Enficonado.”Isabel Rojas Rodríguez
Solución a estos problemas:
- Manejo del riego (Binomio fertirriego/suelo)
- Ayudas externas (mejorantes de suelo, desalinizantes, mejorantes de estructura, etc…)
Nueva promoción lanzada por CIC Controltecnica de equipamiento e instrumentación para Biología Molecular. Promoción válida 2015 - 2016.
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DIAPOSITIVAS SOBRE PROYECTO DE GRADO QUE LLEVA POR TITULO:
ELABORACION DE UN LIMPIADOR ANTIBACTERIAL A BASE DE LIMON (CITRUS LIMONIUM) EN EL SECTOR SABATINO, SAN JOSE DE GUANIPA, ESTADO ANZOATEGUI.
Soluciones METTLER TOLEDO para ingenierias del sector agua☆ Sara Bernia
Presentación de soluciones para la instrumentación de parámetros de control del agua en diferentes sectores industriales. Instrumentación recomendada y presentación de equipos.
Más información: sara.bernia@mt.com
Tratamiento de Suelos y Aguas pesadas con Ficonutrientes y Enficonado.”Isabel Rojas Rodríguez
Solución a estos problemas:
- Manejo del riego (Binomio fertirriego/suelo)
- Ayudas externas (mejorantes de suelo, desalinizantes, mejorantes de estructura, etc…)
Nueva promoción lanzada por CIC Controltecnica de equipamiento e instrumentación para Biología Molecular. Promoción válida 2015 - 2016.
Similar a Determinación de fungicidas en vino mediante extracción en fase sólida y cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas usando un analizador híbrido tipo Q-TOF (20)
Determinación de fungicidas en vino mediante extracción en fase sólida y cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas usando un analizador híbrido tipo Q-TOF
1. PROYECTO DE LA LICENCIATURA EN QUÍMICA
DETERMINACIÓN DE FUNGICIDAS EN VINO
MEDIANTE EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA Y
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDAACOPLADAA
ESPECTROMETRÍA DE MASAS USANDO UN
ANALIZADOR HÍBRIDO TIPO Q-TOF
JORGE CASADO AGRELO
Santiago de Compostela, Marzo de 2011
FACULTAD DE QUÍMICA
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
ANALÍTICA, NUTRICIÓN Y
BROMATOLOGÍA
2. NTRODUCCIÓN
• Los Fungicidas Sustancias tóxicas empleadas para impedir el crecimiento de
hongos perjudiciales para plantas, animales y personas.
• Riesgo
• Legislación
Inhibición de enzimas problemas en aparato reproductor
Tóxicos LC50
Unión Europea: niveles máximos de residuos (MRLs) de
fungicidas en frutas y verduras
Suiza e Italia: niveles máximos de fungicidas en vino
I
• Propiedades grupo básico pKa < 3,4
grupo ácido pKa > 11,4
vino pH ≈ 3,7
Forma neutra
Sólidos a T ambiente (excepto MET líquido)
Lipofílicos Log Kow: 2,15 - 5,13
Solubilidad en agua baja
3. • En este proyecto
Fungicidas orgánicos,
algunos de ellos sistémicos:
4. • Métodos de determinación
• Métodos de preparación de muestra
Para extraer fungicidas de muestras de vino o agua se ha empleado en la bibliografía:
► LLE
► SPE
► SPME
► LPME
Para determinar fungicidas en muestras de vino o agua se ha desarrollado en la bibliografía:
► GC
► LC
combinada con detectores de:
► ECD
► NPD
► MS
Q-TOF m/z exactas sensibilidad en modo SCAN
5. BJETIVOS
Avanzar en la optimización de metodologías de preparación de muestra mediante extracción en
fase sólida, así como en la determinación de un grupo amplio de fungicidas orgánicos en vino.
1. Optimización del método de determinación por LC-MS/MS.
2. Caracterización del método de determinación.
3. Optimización del proceso de preparación de muestra mediante SPE.
4. Caracterización y validación del método propuesto.
5. Aplicación a muestras de vino comercial para determinar su posible
contaminación con los fungicidas considerados.
Para ello se siguieron los siguientes pasos:
O
6. ESARROLLO
• Optimización de LC-ESI-MS/MS
Parámetros de la ionización (ESI):
Todos los analitos dieron señal en modo
positivo (carácter básico)
► Voltaje del capilar (80-200 V): no
resultó significativo. Se trabajó a
160 V.
► Energía de colisión (10-20 eV):
diferente para cada fungicida.
Modificadores de la fase móvil:
Efecto del pH y de la fuerza iónica en la
ionización y la separación
cromatográfica
► Ácido fórmico (pH)
► Acetato amónico (fuerza iónica)
Se empleó 1 mM de acetato amónico
D
Gradiente cromatográfico:
A: agua con 1 mM de acetato amónico
B: acetonitrilo con 1 mM de acetato amónico
Tiempo /min 0 2 7 15 20 23 24 27 28 34
% A 70 70 50 50 35 25 0 70 70 70
% B 30 30 50 50 65 75 100 30 30 30
7. 5
x10
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
Tiempo (
min)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Cuentas
9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
LC Agilent 1200
Columna cromatográfica Zorbax Eclipse XDB C18
Fase estacionaria C18
Dimensiones 100 mm x 2,1 mm
Tamaño de partícula 3,5 µm
Temperatura del horno 35 °C
Volumen de inyección 15 μL
Flujo 0,2 mL/min
Fase acuosa Agua 1 mM acetato amónico
Fase orgánica Acetonitrilo 1 mM acetato amónico
MS/MS Agilent 6520
Modo de ionización ESI positivo
Voltaje de la aguja 4000 V
Temperatura gas secado (N2) 300 ºC
Flujo gas de secado (N2) 9 L/min
Presión gas nebulización (N2) 40 PSI
Iones referencia m/z 121,0509 y m/z 922,0098
Modo de adquisición Centroide
MET TRI IPR AZO TEB PEN DIN CYP BEN DIF
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
tR 10,31 13,16 14,97 15,53 16,52 17,42 18,78 19,72 21,91 22,59
8. • Caracterización de LC-MS/MS
TRI
y = 516,51x - 7490,2
R2
= 0,9998
0
200000
400000
600000
800000
1000000
1200000
0 500 1000 1500 2000 2500
Concentración (ng/mL)
Área
Las transiciones más intensas fueron
empleadas para la cuantificación:
► Repetibilidad: RSD < 9,2 % (10 ng/mL)
► Reproducibilidad: RSD < 8,5 % (25 ng/mL)
► LOQ (10 mL): 0,2 – 1,2 ng/mL
► Linealidad: R2 > 0,991
MET
y = 4066,6x + 39954
R2
= 0,999
0
1000000
2000000
3000000
4000000
5000000
0 200 400 600 800 1000
Concentración (ng/mL)
Área
Fungicida Transición Energía colisión
MET 280,1539 → 220,1328 10
TRI 296,1159 → 70,0407 3
IPR 321,2165 → 119,085 8
AZO 404,1225 → 372,0968 20
TEB 308,1517 → 70,0407 18
PEN 284,0707 → 70,0406 15
DIN 326,0805 → 70,0406 22
CYP 226,1332 → 93,0575 35
BEN 326,1746 → 148,1115 10
DIF 406,0708 → 251,002 20
9. • Optimización de la SPE
Se evaluaron dos adsorbentes poliméricos:
► Oasis HLB: DVB-VP
► Oasis MAX: DVB-VP funcionalizado con amina cuaternaria
Se evaluaron dos disolventes de elución:
► Metanol: extractos coloreados con HLB
► Acetonitrilo: empleado en la fase móvil de LC
Se escogió acetonitrilo por compatibilidad y selectividad
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
MAX
HLB
MAX
HLB
MAX
HLB
MAX
HLB
MAX
HLB
MAX
HLB
MAX
HLB
MAX
HLB
MAX
HLB
MAX
HLB
MET TRI IPR AZO TEB PEN DIN CYP BEN DIF
% F3
% F2
% F1
Pruebas de volumen de
rotura (20 mL):
• MAX: 21,2 % MET en
2º cartucho
• HLB: 0,1 % en 2º
cartucho
Volumen de elución
2 mL
10. 10 – 20 mL de vino
Dilución 1:2 (v/v) con agua milliQ
SPE cartucho Oasis HLB 200 mg
1. Acondicionamiento: 4 mL metanol,
4 mL agua milliQ pH 3,7
2. Paso de muestra: 3 mL/min
3. Lavado: 5 mL agua milliQ
4. Secado: 40 min bajo corriente de N2
5. Elución: 2 mL acetonitrilo
6. Dilución: 1:1 (v/v) con agua milliQ
LC-MS/MS
(inyección 15 μL)
14. 7
x10
0.5
1
+ESI TIC MS(all) W 62.d Smooth (2)
3
x10
0
2
4
+ESI EIC Product Ion Frag=80.0V CID@3.0 (296.1165[z=1] -> 70.0405) W 62.d Smooth (2)
5
x10
0.5
1
1.5
+ESI EIC Product Ion Frag=160.0V CID@8.0 (321.2173[z=1] -> 119.0852) W 62.d Smooth (…
5
x10
0.5
1
1.5
+ESI EIC Product Ion Frag=160.0V CID@10.0 (280.1543[z=1] -> 220.1327) W 62.d Smooth
3
x10
0
2
4
+ESI EIC Product Ion Frag=160.0V CID@20.0 (404.1242[z=1] -> 372.0971) W 62.d Smooth
Cuentas vs. Tiempo de adquisición (min)
2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32
TRI
IPR
AZO
MET
7
x10
0.5
1
+ESI TIC MS(all) W 62.d Smooth (2)
3
x10
0
2
4
+ESI EIC Product Ion Frag=80.0V CID@3.0 (296.1165[z=1] -> 70.0405) W 62.d Smooth (2)
5
x10
0.5
1
1.5
+ESI EIC Product Ion Frag=160.0V CID@8.0 (321.2173[z=1] -> 119.0852) W 62.d Smooth (…
5
x10
0.5
1
1.5
+ESI EIC Product Ion Frag=160.0V CID@10.0 (280.1543[z=1] -> 220.1327) W 62.d Smooth
3
x10
0
2
4
+ESI EIC Product Ion Frag=160.0V CID@20.0 (404.1242[z=1] -> 372.0971) W 62.d Smooth
Cuentas vs. Tiempo de adquisición (min)
2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32
TRI
IPR
AZO
MET
7
x10
0.25
0.5
0.75
1
1.25
+ESI TIC MS(all) W 62.d Smooth (3)
3
x10
0
0.5
1
1.5
2
2.5
+ESI EIC Product Ion Frag=160.0V CID@18.0 (308.1528[z=1] -> 70.0406) W 62.d Smooth (…
3
x10
0
2
4
6
+ESI EIC Product Ion Frag=160.0V CID@35.0 (226.1337[z=1] -> 93.0574) W 62.d Smooth (…
3
x10
0
0.25
0.5
0.75
1
1.25
+ESI EIC Product Ion Frag=160.0V CID@10.0 (326.1751[z=1] -> 148.1114) W 62.d Smooth
2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32
Cuentas vs. Tiempo de adquisición (min)
TEB
CYP
BEN
7
x10
0.25
0.5
0.75
1
1.25
+ESI TIC MS(all) W 62.d Smooth (3)
3
x10
0
0.5
1
1.5
2
2.5
+ESI EIC Product Ion Frag=160.0V CID@18.0 (308.1528[z=1] -> 70.0406) W 62.d Smooth (…
3
x10
0
2
4
6
+ESI EIC Product Ion Frag=160.0V CID@35.0 (226.1337[z=1] -> 93.0574) W 62.d Smooth (…
3
x10
0
0.25
0.5
0.75
1
1.25
+ESI EIC Product Ion Frag=160.0V CID@10.0 (326.1751[z=1] -> 148.1114) W 62.d Smooth
2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32
Cuentas vs. Tiempo de adquisición (min)
TEB
CYP
BEN
Cromatogramas muestra W7:
15. ONCLUSIONES
C
► SPE excelente método de preparación de muestra Buena la combinación de
cartuchos HLB con acetonitrilo.
► Método aplicable a distintos tipos de vinos blancos y tintos.
► LOQ: 0,08-0,48 ng/mL Muy por debajo de lo legislado por la Unión Europea.
► Método adecuado para determinar fungicidas en muestras de vino.
► Concentraciones en muestras analizadas por debajo de lo legislado.