Beginners Guide to TikTok for Search - Rachel Pearson - We are Tilt __ Bright...
Ppt_UISEK_presencial.pptx
1. DEVELOPMENT OF A
HYPERIMMUNE EQUINE
SERUM THERAPY FOR COVID-
19 IN ARGENTINA
Desarrollo de una terapia de
suero equino hiperinmune
para COVID-19 en Argentina
2. OBJETIVOS
• El uso de anticuerpos policlonales equinos (EpAbs) contra la COVD-19
• Mostrar el desarrollo de un suero terapéutico obtenido luego de la inmunización
de caballos utilizando el receptor-binding domain de la glicoproteína Spike del
virus.
3. MÉTODO
A: Structural model of the interaction between the human ACE2 enzyme (pink) and the viral Spike glycoprotein
(grey) through its receptor binding domain (RBD, cyan). The interacting region is highlighted with a dashed oval.
The figure was prepared with PyMOL (Schrödinger, USA) based on the Protein Data Bank entries 6VSB16 and
6VW117. B: Analysis of purified RBD by SDS-PAGE. From left to right: protein marker (M), RBD in reducing
conditions (6 μg, RBD red), and RBD in non-reducing conditions (6 μg, RBD non-red)
4. A: Títulos de anticuerpos (Ab) de suero de caballo medidos por ELISA. Los caballos se inmunizaron inicialmente con 1mg RBD con adyuvante completo de
Freund mediante inyección intramuscular, y luego se reforzaron con 1 mg RBD en la segunda y tercera inmunización con adyuvante de Freund incompleto
cada vez. El plasma se recolectó los días 7, 14, 23, 28 y 35 después de la primera inmunización para controlar la respuesta del anticuerpo. A modo de
comparación, el título de Ab del producto de fragmentos F (ab ') 2 se determinó el día 42. Los títulos de Ab ELISA se determinaron como la dilución de Ab a
razón del OD ratio (valor medio de la OD. ratio a 450 nm de tres mediciones individuales dividida por la OD ratio el día 0) estaba entre 1.8-2.2.
B: Los títulos de Ab neutralizantes de suero de caballo se determinaron mediante ensayos de seroneutralización de un grupo de dos muestras de suero de
caballo los días 14, 28 y 35, y del producto de fragmentos F (ab ') 2 el día 42
5. CONCLUSIÓN
• En este trabajo mostramos que los caballos inmunizados con RBD provocan una
gran cantidad de anticuerpos neutralizantes anti-SARS-CoV-2, que son capaces de
neutralizar in vitro el virus con alrededor de 50 veces más potencia que el plasma
convaleciente.
• Hemos producido anticuerpos policlonales F (ab ́) 2 que demostraron tener una
capacidad neutralizante igualmente alta. Inmunoterapia pasiva en pacientes en
estadios tempranos de la enfermedad.
• Además, el perfil de seguridad de este tipo de sueros es bien conocido y los
anticuerpos carecen del dominio Fc, lo que evita la activación potencial de
intensificación dependiente de anticuerpos o tormentas de citocinas.
Notas del editor
Un informe reciente ha demostrado que el dominio de unión al receptor (RBD) de la glicoproteína Spike viral provoca altos títulos de anticuerpos neutralizantes contra el SARS-CoV-2 cuando se usa como inmunógeno en caballos. Sueros hiperinmunes equinos para el tratamiento de pacientes con COVID-19
la mayoría de los epítopos neutralizadores de Spike residen en este dominio. Los sueros de pacientes infectados con SARS-CoV-2 muestran una clara correlación entre la reactividad en ensayos de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) contra RBD y los títulos obtenidos en ensayos de sero-neutralización. el uso de RBD como un inmunógeno evita provocar anticuerpos contra otros dominios de Spik. EL RBD PLASMIDO(CODIFICANTE-PEPTIDO DE SEÑAL.C TERMINAL HEXAHISTIDINA) TRANSFECTO A CEL. RIÑON EMB. 7,5 mg por litro de cultivo ab.270nm y reduccion sds page comassie.
Ratas y caballo. Dosis 10 veces menor y mejor resultado. medidas por ELISA utilizando RBD como antígeno. Los valores de absorbancia a 450 nm superiores al doble de los de los controles negativos se consideraron positivos. 1 mg de RBD para cada una de las tres inmunizaciones repetidas (en los días 0, 14 y 23) y 0.5 mg para el refuerzo final (el día 28)