Explica medios de cultivo

1. PRACTICA Nº 07
MICROBIOLOGIA
PREPARACION DE MEDIOS DE
CULTIVO

2. PRACTICA: PREPARACION DE MEDIOS DE
CULTIVO

3. OBJETIVOS:
 Conocer los distintos medios de cultivo
 Conocer la composición de los medios de cultivo
 Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus
ingredientes y a partir de medios de cultivo deshidratados
 Indicar el método de esterilización apropiado.

4. FUNDAMENTO
• La preparación adecuada de un medio de cultivo nos permite
disponer de los nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el
crecimiento de los microorganismos en el laboratorio.

5. INTRODUCCIÒN
• QUE SON MEDIOS DE CULTIVO?
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en
concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten
el crecimiento de los microorganismos.
Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo
que un control en su fabricación, preparación, conservación y uso,
asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados
obtenidos.

6. MEDIO DE CULTIVO
• Conjunto de nutrientes, factores de crecimiento
y otros componentes.
• Es la mezcla de sustancias, naturales, sintéticas o
ambas, que permite el crecimiento y la
reproducción de microorganismos o bien que
permite mantener su viabilidad es lo que
conocemos como Medio deCultivo.
• No existe un medio universal
común.

7. ADECUADOS
• Como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas,
vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento; sustancias adecuadas
para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones
químicas que tengan lugar.
DISPONIBILIDAD DE • Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los
NUTRIENTES medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente
asequible de nitrógeno y carbóno
CONSISTENCIA
ADECUADA DEL
MEDIO
• Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo
productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en
estado semisólido
• Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y
comodidad, su inconveniente es que muchos microorganismos no se desarrollan
adecuadamente sino a temperaturas inferiores al punto de fusión de este
solidificante
PRESENCIA (O
AUSENCIA) DE
OXÍGENO Y OTROS
GASES

8. POR SU COMPOSICIÓN
MEDIOS LÍQUIDOS
• Llamado también caldo.
• USO:
diluciones
homogenizar mezclas
enriquecer cultivos
Ejemplos: Infusión
cerebro corazón, Caldo
Selenito, Agua peptonada
alcalinizada

9. POR SU COMPOSICIÓN
MEDIOS SÓLIDOS
• Llamado también agar.
• Se le añade 2% de agar.
• En cajas petri o en tubos
• USO:
 Para separar
microorganismos
 Para favorecer el desarrollo de
colonias aisladas
Ejemplo: Agar sangre, Agar azida
sangre, Mac conkey, Agar SS, Agar XLD

10. POR SU COMPOSICIÓN
MEDIOS SEMISÓLIDOS
• Consistencia leve o gelatinosa.
• Medio líquido al que se adiciona
agar (0.4 a 0.8%).
• USO:
 Para determinar la movilidad de los
microorganismos microaerófilos.
Ejemplo: Medio de MIO, medio de SIM

11. MEDIO DE CULTIVO SOLIDO MEDIO DE CULTIVO LIQUIDO
MEDIO DE CULTIVO
SEMI SOLIDO

12. POR SU USO
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
* MEDIOS DE
CULTIVO
GENERALES,
UNIVERSALES,
NOSELECTIVOS
•Permiten el
crecimiento de gran
variedad de
microorganismos.
Pertenecen a esta
categoría las
infusiones de
extractos de carne y
peptona, una mezcla
de
composición similar
a la de los líquidos
orgánicos
* MEDIOS DE
CULTIVO
SELECTIVOS.
•llevan incorporadas
determinadas
sustancias que
inhiben el
crecimiento de un
microorganismo y
facilita el
crecimiento del
microorganismo
que nos interesa.
Ejm.l caldo lactosa
bilis verde brillanteo
el agar
Salmonella-
Shigella.
M EDIOS DE
CULTIVO
DIFERENCIALES.
• incorpora
determinadas
sustancias que nos
permiten
diferenciar entre
dos tipos de
microorganismos.
Ej. El agar de sal y
manitol: nos
permite diferenciar
en el caso de los
staphylococos, los
que utilizan el
manitol en su
metabolismo de los
que no.
MEDIOS DE
ENRIQUECIMIENTO.
•son aquellos medios
en los cuales a un
medio base se le
añaden determinadas
sustancias nutritivas
que son necesarias
para el crecimiento de
un microorganismo
exigente.. Por ejemplo
el caldo selenito
cistina o el caldo agar
sangre.

13. Tipos de medios de cultivos
https://www.youtube.com/watch?v=HnRbriYrHHw

14. ALMACENAMIENTO DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO
• Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en
envases sellados bajo las condiciones que señale el fabricante.
Generalmente se almacenan en un lugar fresco (entre 15 y 25°),
con poca humedad y protegidos de la luz solar directa. Nunca
se deben almacenar en calor.
etiquetar con el nombre del
medio de
cultivo correspondiente, el
número de lote y la fe cha de
caducidad. Se almacenan en
frigorífico

15. Preparación de medios
https://www.youtube.com/watch?v=xl264TosO5s

16. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

17. • Material y Reactivos:
• *Papel de filtro.
• *Probeta o vaso de precipitado.
• *Varilla de vidrio.
• *Papel de aluminio.
• *Lápiz.
• *Placa Petri.
• *Rotulador permanente.
• *Mechero Bunsen.
• *Mechero.
• *Balanza.
• *Espátula.
• *Medio de cultivo deshodratado.
• *Agua destilada.
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO (PROTOCOLO)

18. PROCEDIMIENTO
1. Leer cuidadosamente las instrucciones de preparación del medio
de cultivo asignado.
2. Pesar la cantidad exacta del medio deshidratado o las porciones
correctas de cada uno de los ingredientes. Cerrar inmediatamente
el frasco de medio de cultivo
3. Disolver la porción pesada de acuerdo con las indicaciones del
fabricante. Si es necesario calentar se debe tener cuidado de no
sobrecalentar.
4. Esterilizar de inmediato el medio de cultivo siguiendo las
instrucciones señaladas por el fabricante.
5. Distribuir el medio de cultivo de acuerdo a las indicaciones
señaladas por el profesor.
6. Identificar el lote de medio de cultivo preparado indicando su
nombre, distribución y fecha de preparación

19. Ejemplo de preparación:
• 1. Preparar todos los materiales necesarios en la mesa de trabajo.
• 2. Depositar 250mL de agua destilada en una probeta.
• 3. Pesar en la balanza el agar nutritivo. ( Queremos preparar 250mL
de caldo nutritivo: en las indicaciones del bote nos indica que hay
que poner 23g por cada 1L, por lo que al querer preparar 250mL (
0,25 L) —> 5,75g por 250mL ( 23×0,25= 5,75g).
• 4. Mida la cantidad de agua necesaria, poner un poco de agua
destilada del vaso de precipitado o matraz. Depositar la cantidad de
agar pesado y termine de añadir el resto de agua destilada. Cuando
se haya añadido todo el Agar nutritivo y el agua destilada remover
bien para eliminar posibles grumos.
• 5. Tapar el bote con su tapón o con papel y una liga de coloque
encima de la cocinilla removiendo constantemente hasta hervir y
complete su disolución.

20. • 6. Meter en el autoclave, a 121ºC durante 15-20 minutos, el bote con el
caldo de cultivo para esterilizarlo.
• 7. Tras aproximadamente 20 minutos se terminará la esterilización del
autoclave. Sacar el bote de Agar nutritivo y dejar enfriar un poco el bote en
la mesa de trabajo.
• 8. Rotular con permanente las placas de Petri ( fecha y medio de cultivo).
• 9. Encender el mechero Bunsen para crear un ambiente de esterilidad. Pasar
la boca del bote por el mechero, abrir la placa de Petri ( coger un montón de
tres o cuatro placas de Petri y coger de abajo a arriba), depositar Agar
nutritivo hasta la mitad de la placa de Petri y tapar. Hacer 3 o 4 placas y
volver a esterilizar la boca del bote y repetir el proceso. Continuaremos
hasta terminar con el Agar nutritivo del bote.
• 10. Dejar en reposo las placas Petri hasta que solidifiquen, introducirlas en la
nevera con papel de aluminio con el nombre del cultivo y fecha rotuladas
con permanente en montones de 10-12 placas de Petri.

21. REVISIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Es importante comprobar que el medio se comporta correctamente.
Las pruebas que debes hacer para tener seguridad son:
Revisión macroscópica: Se examina el medio a simple vista,
atendiendo a su color, a su opalescencia y transparencia, a la
humedad en las placas ya preparadas y a la posible aparición
de precipitados.
Vigilancia de Ph: Porque la mayoría de los microorganismos se
desarrollan mejor en medios con un pH neutro.
Vigilancia de la esterilidad: Se lleva a cabo incubando a 30 ºC
durante 72 horas una pequeña porción, representativa del lote
de medio preparado, para comprobar que allí no crecen
gérmenes.
Prueba de la eficacia: En una pequeña porción representativa del
medio preparado, se
inocula un microorganismo normalmente el propio fabricantea
conseja el más adecuado y se cultiva. Así se comprueba si en
el medio de cultivo preparado ese microorganismo se
desarrolla correctamente.

22. Medios de cultivo selectivos y diferenciales
https://www.youtube.com/watch?v=H1-IpZ8T-_U

23. RESULTADOS
• MEDIO DE CULTIVO PREPARADO:____________________________
• CANTIDAD PREPARADA: ___________________________________
• CANTIDAD PESADA: ______________________________________
• CÁLCULOS REALIZADOS:
• MODO DE PREPARACION:

24. • ASPECTO DEL MEDIO DE CULTIVO:
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
• ESTADO FÍSICO:
Sólido:…… Líquido:………… Semisólido:………..
• TIPO DE MEDIO DE CULTIVO
• Según la naturaleza de los ingredientes:
Natural o complejo:…….. Sintético:………
• Según el propósito de uso:
Enriquecimiento……… Selectivo:…….. Diferencial:………. Otro:………
DISTRIBUCIÓN: ______________________________________________________________
CONDICIONES DE ESTERILIZACIÓN: _______________________________________________
CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO: ____________________________________________

25. Fuentes de error en la preparación de
medios de cultivo
• Las posibles fuentes de error son:
• Selección inadecuada del medio de cultivo o uso inapropiado.
• Adición de un volumen incorrecto de agua o utilización de agua corriente
con impurezas.
• Adición de menor cantidad de agar al medio, lo cual se manifiesta por la
no solidificación correcta del mismo.
• Utilización de balanzas inadecuadas cuyo margen de error altera la
composición del medio.
• Distribución errónea del volumen del medio que puede resultar
inapropiado para su utilización.
• Disolución insuficiente del agar. Al distribuir el medio agarizado en
recipientes (tubos) dan como resultado tubos con medio que no logran
solidificar.
• La esterilización a temperaturas elevadas y/o durante períodos de tiempo
largos, puede ocasionar el deterioro de algunos constituyentes.
• Los residuos adheridos al vidrio pueden inhibir algunos microorganismos
exigentes.