INSTITUTO TECNOLÓGICO DE Cd. ALTAMIRANO.Lic. En Biología/ 4to semestreMICROBIOLOGIA    UNIDAD 2:                    Alumna...
TECNICASMICROBIOLOGICAS
2.1 ESTERILIZACIÓNMétodo de control del crecimiento microbiano queinvolucra la eliminación de todas las formasde          ...
2.1.1 MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN                                                            Ebullición   Vapor             ...
2.1.2MÉTODOS QUÍMICOS            • EtanolAlcohol    • Alcohol          isopropílico                            • Formol   ...
2.2MEDIOS DE CULTIVOconsta de un gel o una solución que cuenta con losnutrientes necesarios para permitir, en condicionesf...
2.2.1CLASIFICACIÓNcualidades físicas• líquidos• semisólidos                                    formulación:• sólidos      ...
USOS DE LOS MEDIOSMedio General: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los que necesitan condiciones...
2.2.2 PRPARACIÓN DEL CULTIVOLos medios de cultivo se puedenpreparar en el laboratorio a partir decada uno de sus constituy...
CONTROL DE CALIDAD El Control de Calidad en la preparación y evaluación de los medios de cultivoes considerado como una e...
2.3 MÉTODOS DE SIEMBRA
EL MÉTODO DE SIEMBRA POR ESTRÍA EN PLACAmétodo más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un ...
LOS MÉTODOS DE VERTIDO EN PLACA Y EXTENSIÓN EN PLACA  las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se vierten enpla...
Los métodos de siembra se utilizan para inocular por distintos métodos sobre un mediode cultivo apropiado una muestra que ...
2.3.1 ESTRIA CRUZADA         El método de estrías es el mas utilizado para el         aislamiento de colonias bacterianas....
2.3.1 DILUCIONES preparar una disolución menos concentrada a partir de una más concentrada. Una dilución es una mezcla hom...
2.4 FACTORES AMBIENTASLES QUE AFECTAN A                                     LOS MICROORGANISMOS                           ...
2.5 MORFOLOGIA COLONIAL Y MICROSCOPICA
2.5 MORFOLOGIA COLONIAL Y MICROSCOPICA                    Una colonia se define como                        una masa visib...
2.5 MORFOLOGIA COLONIAL Y MICROSCOPICA
2.6 MÈTODOS DE TINCIÒN                                                                           estudiar                 ...
2.6.1 TINCIÒN SIMPLEse llama así porque nada mas usan un (1) solocolorante, que puede ser azul de metileno, cristalvioleta...
2.6.2 TINCIÒN DIFERENCIALES: GRAM, ACIDO                             RESISTENTE, KANAYSI, ALBERTUn medio diferencial consi...
2.6.2 TINCIÒN DIFERENCIALES: GRAM, ACIDO        RESISTENTE, KANAYSI, ALBERT                tinción de Gram o coloración de...
2.6.2 TINCIÒN DIFERENCIALES: GRAM, ACIDO                            RESISTENTE, KANAYSI, ALBERTÁcido-alcohol resistencia  ...
2.7 MÈTODOS DE CONSERVACIÒN DE CEPAS           los tres objetivos que hay que alcanzar para           conservar correctame...
2.8 ANALISIS DE AGUALas Normas Mexicanas de Análisis de Aguaestablecen los métodos de prueba quepermitan determinar los pa...
BIBLIOGRAFIASPommerville, Jeffrey C. (2010). Alcamo’s fundamentals of Microbiology (4ta edición).                        ...
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  1. 1. INSTITUTO TECNOLÓGICO DE Cd. ALTAMIRANO.Lic. En Biología/ 4to semestreMICROBIOLOGIA UNIDAD 2: Alumna: Wendy Campos Ayala. TÉCNICASMICROBIOLOGICAS .Docente: Erika Oropeza Bruno
  2. 2. TECNICASMICROBIOLOGICAS
  3. 3. 2.1 ESTERILIZACIÓNMétodo de control del crecimiento microbiano queinvolucra la eliminación de todas las formasde vida microscópicas,incluidos virus, esporas y hongos. La temperaturautilizada para la destrucción de los mismos, es de100 °C en adelante. Es un término absoluto queimplica la pérdida de la viabilidad mediante ladestrucción de todoslos microorganismos contenidos en un objeto, áreaespecífica o sustancia, acondicionando de tal modola posterior propagación o contaminación a otrosobjetos o al medio ambiente.
  4. 4. 2.1.1 MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN Ebullición Vapor Pasteurización Tyndalización Aire caliente Radiación Radiación Flama directa Ionizante, no e Indirecta Ionizante Radiación calor seco InfrarrojaCalor Húmedo Métodos Radiación Físicos Ultravioleta
  5. 5. 2.1.2MÉTODOS QUÍMICOS • EtanolAlcohol • Alcohol isopropílico • Formol Aldehídos • Glutaraldehí do • Xileno Fenoles Óxido de etileno Peróxido de Hidrógeno
  6. 6. 2.2MEDIOS DE CULTIVOconsta de un gel o una solución que cuenta con losnutrientes necesarios para permitir, en condicionesfavorables de pH y temperatura, el crecimientode virus, microorganismos, células, tejidosvegetales o incluso pequeñas plantas. Según lo quese quiera hacer crecer, el medio requerirá unas uotras condiciones Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados; ya preparados pueden encontrarse en estado sólido, semisólido o líquido. El objetivo último del cultivo es variado: antibiograma, identificación, multiplicación.
  7. 7. 2.2.1CLASIFICACIÓNcualidades físicas• líquidos• semisólidos formulación:• sólidos • químicamente definidos • complejos uso: medio selectivo medio diferencial medio de enriquecimiento medio mínimo medio de transporte
  8. 8. USOS DE LOS MEDIOSMedio General: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los que necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED). Medio Selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo determinado (hongos, bacterias entéricas, protozoos.) • medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo medio. Puede ser por su crecimiento, su metabolismo, su respiración, etc. (por ejemplo, medio de McConkey medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la cosecha de diferentes tipos de microorganismos en un mismo medio. medio mínimo: contiene la mínima cantidad de nutrientes posible que permite el crecimiento de una especie.medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal a especímenes transportados; mantienen su viabilidad y su concentración Simple
  9. 9. 2.2.2 PRPARACIÓN DEL CULTIVOLos medios de cultivo se puedenpreparar en el laboratorio a partir decada uno de sus constituyentesbásicos, o por simple rehidratación deproductos asequibles comercialmente(medios de cultivo deshidratados).Generalmente se prefiere el uso delos medios de cultivo deshidratadosporque, además de simplificar eltrabajo, con ellos se tiene mayorprobabilidad de obtener resultadosreproducibles
  10. 10. CONTROL DE CALIDAD El Control de Calidad en la preparación y evaluación de los medios de cultivoes considerado como una esencial y buena práctica de laboratorio, necesariapara mantener el nivel y la ejecución de cualquier técnica microbiológica.Proceso continuo que se extiende desde las materias primas ; a través delproductor hasta el producto final utilizado en los diferentes departamentos deanálisis y diagnóstico microbiológico.
  11. 11. 2.3 MÉTODOS DE SIEMBRA
  12. 12. EL MÉTODO DE SIEMBRA POR ESTRÍA EN PLACAmétodo más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un asa de siembra se toma unamuestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio sólido preparadoen una placa Petri(a las placas Petri también se les denomina simplemente placas). Conforme se van haciendo estrías en zigzagcon el asa, cada vez se van depositando en la superficie del medio menos microorganismos. A continuación, seflamea el asa, se toca en la región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con lamisma técnica, en la superficie de medio sin sembrar aún. Repitiendo este proceso varias veces se logra separarcélulas individuales. A continuación, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las célulasaisladas experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada coloniaposiblemente representa un clon derivado de una sola célula, no podemos asegurarlo. Quizás, dos célulasquedaron depositadas tan juntas que han originado una única colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos de quehemos obtenido un cultivo axénico, conviene repetir el procedimiento a partir deuna colonia bien aislada enla primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, serán, casi con toda seguridad, cultivos axénico
  13. 13. LOS MÉTODOS DE VERTIDO EN PLACA Y EXTENSIÓN EN PLACA las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se vierten enplaca.Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras creceránen la superficie. Las colonias superficiales se extenderán y serán másgrandes. En el segundo método (extensión en placa), las muestrasdiluidas se siembran directamente en la superficie de la placa deagar, extendiéndolas con avuda de un asa de Diralsky de cristalestéril.La suspensión se absorbe en el agar, dejando las células microbianassobre la superficie. En ambas técnicas las placas se incuban hasta laaparición de las colonias. Como en el método de siembra por estría, noexiste la seguridad de que las colonias que aparecen en las placassembradas por extensión o en el agar solidificado sembrado por elmétodo del vertido en placas sean cultivos axénicos hasta que se repitael proceso. Las dos técnicas de siembra por dilución presentan laventaja de que permiten obtener un mayor número de colonias aisladasque el método de siembra por estría, por tanto se eligen cuando se hade seleccionar una cepa partir de una mezcla con varios tipos demicroorganismos.
  14. 14. Los métodos de siembra se utilizan para inocular por distintos métodos sobre un mediode cultivo apropiado una muestra que contenga bacterias con el fin de reproducirlas paraaumentar el número de individuos de la población y formar colonias encaso de mediossolidos
  15. 15. 2.3.1 ESTRIA CRUZADA El método de estrías es el mas utilizado para el aislamiento de colonias bacterianas. es un método rápido y simple de agotamiento progresivo y continuo del inoculo sobre un medio solido para obtener un numero complejo de reducción de bacterias estas distribuidas individualmente sobre la superficie de la caja de Petri que al incubar, cada una originara colonias.
  16. 16. 2.3.1 DILUCIONES preparar una disolución menos concentrada a partir de una más concentrada. Una dilución es una mezcla homogénea, uniforme y estable, formada por dos o más sustancias denominadas componentes. La sustancia presente en mayor cantidad suele recibir el nombre de solvente, y a la de menor cantidad se le llama soluto y es la sustancia disuelta. El soluto puede ser un gas, un líquido o un sólido, y el disolvente puede ser también un gas, un líquido o un sólido.
  17. 17. 2.4 FACTORES AMBIENTASLES QUE AFECTAN A LOS MICROORGANISMOS ACIDOS pH Y LA ORGANICO ACIDEZ. S SALES DE ACTIVIDAD CURADO Y DE AGUA SUBSTANCIAS REDUCIDA. ANALOGAS GASES RADIACION COMO IONIZANTE. CONSERVA DORES. RADIACION ULTRAVIOL OXIGENO ETA. FACTORES AGUA YTEMPERATU AMBIENTALE ACTIVIDAD RA S DE AGUA
  18. 18. 2.5 MORFOLOGIA COLONIAL Y MICROSCOPICA
  19. 19. 2.5 MORFOLOGIA COLONIAL Y MICROSCOPICA Una colonia se define como una masa visible de microorganismos, todos originados de una sólo célula madre. de manera que una colonia constituye todos originados de una clones de bacterias, sólo célula madre todas genéticamente similares
  20. 20. 2.5 MORFOLOGIA COLONIAL Y MICROSCOPICA
  21. 21. 2.6 MÈTODOS DE TINCIÒN estudiar tinciones biológicas la morfología deUna tinción o color son utilizadas Los diferentes otros materiales (por ación es una también para colorantes pueden ejemplo, las técnica auxiliar marcar células ser utilizados para estructuras utilizada en citometría de aumentar la lamelares deen microscopía para flujo y para marcar definición y polímerosmejorar el contraste proteínas ó ácidos examinar grandes semicristalinos de en la imagen vista nucleicos cortes de tejido las estructuras de al microscopio en electroforesis en dominio de bloques gel de copolímeros.
  22. 22. 2.6.1 TINCIÒN SIMPLEse llama así porque nada mas usan un (1) solocolorante, que puede ser azul de metileno, cristalvioleta o carbolfucsina. Con este tipo de tinción tuvas a poder crear un contraste con el mediodonde estas haciendo el frotes o tinción y vas apoder observar la morfología y ladisposiciónbacteriana. La importancia esta enque es muy fácil de aplicar. Un ejemplo de uso detinción simple esta cuando quieres ver levadurasy diferenciar las vivas de las muertas. Laslevaduras muertas se tiñen en su interior y se vencon el mismo color del tinte que aplicaste. Laslevaduras vivas no se tiñen por dentro.
  23. 23. 2.6.2 TINCIÒN DIFERENCIALES: GRAM, ACIDO RESISTENTE, KANAYSI, ALBERTUn medio diferencial consiste enun medio de cultivo que es capaz dedistinguir dos microorganismos por sucrecimiento diferencial en el mismo,usando las propiedades metabólicasde ambos en presencia de undeterminado nutriente y de unindicador que evidencia por ejemplo,un pH ácido en su entorno.
  24. 24. 2.6.2 TINCIÒN DIFERENCIALES: GRAM, ACIDO RESISTENTE, KANAYSI, ALBERT tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en Bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.
  25. 25. 2.6.2 TINCIÒN DIFERENCIALES: GRAM, ACIDO RESISTENTE, KANAYSI, ALBERTÁcido-alcohol resistencia es lapropiedad física de algunas bacterias a laresistencia a la decoloración de la fucsinabásica (rojo) la cual penetra en la célula poracción del fenol y el calor.Las bacterias ácido-alcohol resistentes nopueden ser clasificados según la tinción deGram, la cual es la técnica más común en lamicrobiología contemporánea, sin embargopuede ser teñido con algunas tincionesconcentradas combinadas con calor. Una vezteñida tiene la capacidad de resistir ladecoloración de una combinación de alcohol-ácido, el cual es el decolorante más común enlos protocolos de tinción de bacterias, dedonde viene el nombre Alcohol-ácidoresistente.
  26. 26. 2.7 MÈTODOS DE CONSERVACIÒN DE CEPAS los tres objetivos que hay que alcanzar para conservar correctamente las cepas microbianas en los laboratorios de microbiología son: que el cultivo a conservar sea puro, evitando que se produzcan contaminaciones durante el proceso de conservación; que durante el tiempo de conservación sobrevivan al menos el 70-80% de las células, y por último, que estas células permanezcan gené-ticamente estables. métodos agrupándolos en tres apartados, que son: Métodos de elección o de conservación a largo plazo, métodos alternativos y métodos restringidos
  27. 27. 2.8 ANALISIS DE AGUALas Normas Mexicanas de Análisis de Aguaestablecen los métodos de prueba quepermitan determinar los parámetros quedefinen la calidad de los diferente tipos deagua. Para facilitar su consulta en estapágina estas normas mexicanas se hanclasificado en:1.- Muestreo, Procedimientos y Vocabulario2.- Parámetros biológicos y toxicidad
  28. 28. BIBLIOGRAFIASPommerville, Jeffrey C. (2010). Alcamo’s fundamentals of Microbiology (4ta edición). Jones and Bartlett Publishers http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/09- factores%20de%20supervivencia.htm http://www.ecured.cu/index.php/Medio_de_cultivo_(Microbiolog%C3%ADa) http://es.scribd.com/doc/14173131/5-Tecnicas-Basicas-Para-El-Cultivo-de- Microorganismo http://perso.wanadoo.es/sergioram1/medios_de_cultivo.htm http://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido-alcohol_resistencia http://www.cect.org/docs/cons.pdf http://www.conagua.gob.mx/Contenido.aspx?n1=2&n2=16&n3=2&n4=141

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