Este documento trata sobre diferentes temas relacionados con la microbiología como la esterilización, métodos físicos y químicos de esterilización, medios de cultivo, temperatura, pH y su efecto en los microorganismos, morfología colonial y microscópica, métodos de tinción y fijación. Explica conceptos clave para el estudio de microorganismos en el laboratorio.

1. Instituto Tecnológico de Cd. Altamirano
MICROBIOLOGIA
LIC. EN BIOLOGÍA
ALUMNO:
JESUS HERRERA BELTRAN.
ERIKA OROPEZA BRUNO.
Semestre 4 Grupo : 506

2. ESTERILIZACIÓN.
Los procesos de esterilización o desinfección son
diariamente llevados acabo, no solamente en el
laboratorio, donde son fundamentales para evitar
la contaminación de medios, cultivos, placas etc.
Se utiliza una temperatura adecuada para la destrucción de esos microorganismos
La temperatura aproximada es de 100 grados centígrados

3. Metodos fisicos.
Los métodos físicos utilizan técnicas como la microinyección con una fina
aguja de cristal y la electroporación (exposición de las células aun choque
eléctrico).
La microinyecciónresulta ser una técnica muy potente y eficaz, ya que 1 de
cada 5 células consigue incorporar el DNA foráneo de forma permanente. El
problema de esta técnica es que exclusivamente se puede inyectar una
célula cada vez, y por tanto no es el más recomendable para una terapia
médica debido a que es demasiado laboriosa como para obtener un número
de células indicadas (suficientes, aproximadamente un millar o más) para
que el tratamiento tenga éxito.

4. El calor seco es un método
El calor húmedo es un método térmico térmico de esterilización y su
de esterilización y mata microorganismos efecto en
por la coagulación de proteínas los microorganismos es
(desnaturalización), lo que es causado por equivalente al horneado.
la rotura de los puentes de hidrógeno que El calor cambia
son los que mantienen a las proteínas en su las proteínasmicrobianas por
forma tridimensional las proteínas por lo las reacciones de oxidación y
tanto regresan a su estructura secundaria, crea un medio interno árido, así
se coagulan y se convierten en proteínas no quema a los microorganismos
funcionales. lentamente.1 Una simple
analogía es la lenta
carbonización de papel dentro
de un horno caliente, aunque
la temperatura permanezca por
debajo del punto de ignición
del papel.

5. METODOS QUIMICOS.
Métodos químicos de esterilización son los que
involucran el empleo de
Sustancias letales para matar los microorganismos tales
como el oxido de etileno y el perioxido
Ejemplos:
Formol
Etanol
Alcoholes
Oxido de etileno
Esta forma de esterilizacion es que aldehidos
algunas sustancias quimicas tienen la
capacidad de
Promover una o mas reacciones
quimicas capaces de producir la
muerte de algunos microorganismos.

6. MEDIO DE CULTIVO.
Un medio de cultivo consta de un gel o
una solución que cuenta con los nutrientes
necesarios para permitir, en condiciones
favorables de pH y temperatura, el
crecimiento
de virus, microorganismos, células, tejidos
vegetales o incluso pequeñas plantas.
Según lo que se quiera hacer crecer, el
medio requerirá unas u otras condiciones.
Generalmente se presentan desecados en
forma de polvo fino o granular antes de ser
preparados; ya preparados pueden
encontrarse en estado sólido, semisólido o
líquido. El objetivo último del cultivo es
variado: antibiograma, identificación,
multiplicación.

7. SEGÚN SU COMPOSICION.
Se dividen en varios están los sintéticos, empíricos y semisinteticos.
Empíricos: su composición por contener sustancias orgánicas.
Sintéticos: por contener sustancias químicas definidas.
Semisinteticos: aparecen moléculas de naturales hidrolizadas.

8. COMPOSICIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.
Los mas utilizados por sus contenidos y composición:
Gelatina
Agar
Peptona
Sangre
Suero
Extracto de levadura
Entre mas

9. PREPARACION Y CONTROL.
Pesar los reactivos necesarios para
preparar 250 mL de medio (por equipo).
Ponerlos en el matraz.
2. Con la probeta, medir 250 mL de agua
destilada y añadirla al matraz con el polvo.
3. Poner el matraz sobre el agitador con
una mosca para que la suspensión se
mezcle
homogéneamente.
4. Cuando la solución esté
homogénea, retirarla del agitador, sacar la
mosca y tapar
con un pedazo de aluminio.
5. La autoclave estará prendida
previamente por la profesora. Con su
ayuda, introduce
tu matraz en el interior de la autoclave.
Ciérrala siguiendo las indicaciones de la
maestra.

10. MÉTODOS DE SIEMBRA Y
AISLAMIENTO
En Microbiología se entiende como
siembra al proceso mediante el cual se
llevauna porción de una población de
microorganismos (inóculo), de un cultivo
crecido aun medio nutritivo para
su crecimiento.
La siembra puede ser :▪ Por inoculación
Por estrías simples ,Por dispersión
o agotamiento, Por puntura, extensión.

11. ESTRIAS CRUZADAS.
Es lograr aislar colonias, por eso estas
estrias se hacen con la misma cantidad de
muestra que se tomo inicialmente con el
asa, algunas personas acostumbran
flamear el asa despues de hacer sus
primeras estrias
y se van haciendo de tal forma que la
cantidad de muestra en cada estria va ser
siempre menor, y eso nos garantizara el
crecimiento de colonias.

12. TEMPERATURA..
- Según su comportamiento frente a la
temperatura, los organismos pueden ser
térmofilos, mesófilos y psicrotrofos.
Congelación.
- La congelación detiene el crecimiento de
todos los microorganismos.
RADIACION ULTRAVIOLETA.
- La radiación ultravioleta produce una
disminución exponencial en el número de
células vegetativas o de esporas vivas con
el tiempo de irradiación. Por tanto se
pueden calcular los valores D para la
irradiación.

13. TEMPERATURA:
El aumento de la temperatura aumenta el
poder
bactericida del agente, siempre que no lo
desnaturalice.
Así para temperaturas bajas, por lo
general, por cada
10ºC de incremento de esta, la tasa de
mortalidad se
Duplica.

14. LOS MICROORGANISMOS
NECESITAN LA PRESENCIA DE AGUA
en una forma disponible, para crecer y
llevar a cabo sus funciones metabólicas. La
mejor forma de medir la disponibilidad de
agua es mediante la actividad de agua (aw).
La aw de un alimento se puede reducir
aumentando la concentración de solutos en
la fase acuosa de los alimentos mediante la
extracción del agua o mediante la adición
de solutos. Algunas moléculas del agua se
orientan en torno a las moléculas del
soluto y otras quedan absorbidas por los
componentes insolubles de los alimentos.
En ambos casos, el agua queda en una
forma menos reactiva.

15. Varios métodos de conservación utilizan estos conceptos. La deshidratación es un
método de conservación de los alimentos basado en la reducción de la aw (lo que se
consigue eliminando el agua de los productos). También el agregado de solutos
desciende la aw lo cual se da durante el curado y salado, así como en el almíbar y
otros alimentos azucarados.
La aw de un alimento o solución se define como la relación entre la presión de vapor
del agua del alimento (p) y la del agua pura (po) a la misma temperatura
A medida que una solución se concentra, la presión de vapor disminuye y la
aw desciende a partir de un valor máximo de 1 para el agua pura (en ausencia de
capilares o fuerzas de adsorción). La aw está relacionada con el punto de congelación
y con el de ebullición así como con la humedad relativa en equilibrio (HRE) y la
presión osmótica.

16. PRECISIÓN HIDROSTÁTICA.
la presión hidrostática es la fuerza por
unidad de área que ejerce un liquido en
reposo sobre las paredes del recipiente que
lo contiene y sobre cualquier cuerpo que se
encuentre sumergido, como esta presión se
debe al peso del liquido, esta presión
depende de la densidad(p), la gravedad(g)
y la profundidad(h) del el lugar donde
medimos la presión(P)P=p*g*h

17. La acidez de una sustancia es el grado en
el que es ácida. El concepto
complementario es la basicidad.
La escala más común para cuantificar la
acidez o la basicidad es el pH, que sólo es
aplicable para disolución acuosa
Neutofilo: ph optimo de 7, bacterias patogenas
Acidofico: ph optimo de 7 menor hongos
Basofilo: ph optimo mayor 7 ejemplo suelos y aguas ricas en carbonatos.
La acidez de una sustancia se puede
determinar por métodos volumétricos.
Ésta medición se realiza mediante
una titulación, la cual implica siempre tres
agentes o medios: el titulante, el titulado (o
analito) y el indicador

18. PH:
Entre otras cosas determina el grado de ionización del
agente, siendo en general la forma no disociada la que
atraviesa mejor las paredes del microorganismo

19. DE ACUERDO AL OXIGENO.
Algunas bacterias requieren de oxigeno y se clasifican en :
Aerobias: dependen del oxigeno para su crecimiento y desarrollo.
Anaerobias: facultativos no requieren de oxigeno ejemplo las levaduras.
Microaerofilos: solo se pueden desarrollar en una presencia baja de
Tensiones de oxigeno menor de 12 % y altas tensiones de oxigeno.

20. RADIACIÓN
Las radiaciones ultravioleta (uv), Rayos X
y radiación g producen efectos esterilizan
tés (destrucción de microorganismos) al
alterar las proteínas, membranas, ácidos
nucleídos y al generar radicales libres del
tipo OH· y H·. El tratamiento matemático
de la destrucción de microorganismos por
estos procedimientos es similar al descrito
para el uso de altas temperaturas. Hay que
considerar, sin embargo, los poderes de
penetración de los diferentes tipos de
radiación. Así, por ejemplo, la radiación uv
tiene un poder de penetración muy bajo
y, por consiguiente, se utiliza para
esterilizar superficies, mientras que la
radiación X o log tiene poderes de
penetración mucho mayores.

21. MORFOLOGIA COLONIAL.
Generalmente se reporta la morfología
colonial tal como uno la percibe, por
ejemplo si se ves que las colonias
bacterianas son como puntitos, pues
reportan que son puntiformes, si son lisas
pues reportan que son lisas, si observas
que están como moco, pues reportan que
están mucosas, si su color es amarillento
pues reportan que son de color
amarillento, y así sucesivamente., también
puedes agregar características que
consideres importante para
identificarlas, por ejemplo el olor., Aun así
checa las siguientes imágenes para
orientarte.

22. MORFOLOGIA MICROSCOPICA.
unque existe un enorme número de bacterias implicadas
en procesos infecciosos todas ellas se parecen mucho entre
si desde el punto de vista morfológico. Su forma
individual y su agrupación sólo en raras ocasiones generan
un diagnóstico definitivo.
La tinción de gram es muy frecuentemente
el primer paso del esquema de
identificación bacteriana, y por eso se
realiza muchísimo. Cabe destacar que no
siempre es fácil ubicar los aislamientos
bacterianos en la clasificación de gram.
Algunas bacterias no presentan una forma
constante (pleomorfismo) y otras pueden
cambiar sus propiedades de tinción según
la antigüedad del cultivo.

23. METODOS DE TINCION.
Tinción Simple
Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tiñen con la misma tonalidad (Tinta china, Azul
Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol).
El Hidróxido de potasio al 10% (solución de KOH) permite ver elementos de hongos ya que el KOH digiere parcialmente los
componentes proteicos, por ejemplo de la célula huésped, pero no actúa sobre los polisacáridos de las paredes celulares de los hongos.
Tinción Diferencial
Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras celulares se diferencian en función de los
diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitución química.
Los ejemplos clásicos sería la tinción de GRAM o la de Ziehl-Neelsen
En la imagen: BGN y levaduras en una tinción GRAM
Sin Tinción
No se utiliza ningún tipo de colorante.
Es el montaje directo húmedo o examen en fresco: las muestras se extienden
directamente sobre la superficie de un portaobjetos para su observación. El material
que es demasiado espeso para permitar la diferenciación de sus elementos puede
diluirse con igual volumen de solución salina fisiológica estéril. Se deposita
suavemente un cubreobjetos sobre la superficie del mate

24. TÉCNICAS DE FIJACIÓN:
Se puede entender por técnicas de fijación dos conceptos: 1º la
conservación de los tejidos, células y estructuras en el estado más
aproximado posible a la materia viva; 2º la fijación de los
colorantes con otras sustancias, para que sean
estables, longevos, que penetren y tengan un poder cromógeno
adecuado para el uso que se persigue. Al empleo de estas
sustancias se le llama comúnmente, utilización de
mordiente, aunque la palabra ‘mordiente’ tiene otra acepción
radicalmente distinta, generando cierta confusión.
Mordiente, también es el punto en que algunas sustancias, muy
cercanas al secado, están ligeramente pringosas al tacto, pero no
manchan, por ejemplo en la técnica del Mixtión.

25. LA TINCIÓN SIMPLE se basa en la
afinidad del colorante por los componentes
celulares. La tinción puede ser uniforme o
presentar algunos gránulos en su interior.
Utiliza un solo colorante (violeta de
genciana, azul de metileno, fuscina
diluida).La tinción simple se utiliza para
destacar el microorganismo completo para
que se vean las formas y las estructuras
celulares básicas. En las
tinciones simples
se usa un único reactivo, que
preferentemente es de tipo básico y
contiene un cromógeno (compuesto que da
color al tinte) con carga positiva, ya que la
pared celular de las bacterias posee
componentes con carga negativa que
atraen y enlazan el cromógeno. Se utilizan
solamente para incrementar el contraste;
todas las células absorberán el colorante y
quedarán teñidas del mismo color.