3. EL MICROSCOPIO
Del micro- (pequeño) y
scopio, (observar)
Instrumento óptico
destinado a observar
de cerca objetos u
organismos
extremadamentes
pequeños.
Es la herramienta
básica para el estudio
de la Biología.
4. Para el estudio del material biológico se
dispone de varios tipos de microscopios, lo
cuales se pueden clasificar básicamente de
acuerdo al tipo de fuente luminosa que usan:
• Ópticos o luminosos:
- Campo claro
- Campo oscuro
- Contraste de fases
- Fluorescencia
- Ultravioleta
• Electrónicos
- Barrido
- Transmisión
5.
6. El microscopio óptico
convencional es compuesto
porque posee dos sistemas
principales de lentes
convergentes (ocular y
objetivo). La mayoría de los
modelos actuales son
binoculares, aunque también
los hay monoculares. El
microscopio compuesto
convencional se denomina quot;de
campo claroquot; o quot;de campo
brillantequot; porque todo el
campo se ilumina con una lente
condensadora común que
7. Microscopio óptico o de campo
claro mecánico: sostiene
Sistema
al sistema óptico y aloja los
elementos necesarios para la
iluminación y enfoque del
preparado.
Sistema de iluminación: lo
integran aquellos
componentes encargados de
colectar la luz, dosificarla y
dirigirla a través del
preparado
Sistema óptico: incluye
todos los elementos que
colaboran en la ampliación de
8. El condensador proyecta un
cono de luz sobre las células
que están siendo examinadas
en el microscopio. Después de
atravesar a las células, ese
haz luminoso, en forma de
cono, penetra en el objetivo;
el objetivo proyecta una
imagen aumentada en el plano
focal del ocular, que
nuevamente la amplia. Por fin
la imagen provista por el
ocular puede ser percibida
por la retina del ojo
9.
10. Limite de resolución: es la menor distancia que
debe existir entre dos objetos para que puedan
visualizarse por separado. Cuando se ilumina un
objeto, los puntos de su superficie reflejan las
ondas luminosas. Dos puntos próximos de la
superficie se verán como distintos si la
distancia que los separa es grande comparada
con la longitud de onda que reciben.
Si la distancia que los separa es inferior a la
longitud de onda que los ilumina aparecerán a
nuestra vista como dos puntos unidos.
11. Comparación de limites de resolución
entre microscopio óptico, electrónico y
ojo humano.
12. Cálculo del límite de
resolución
LR= λC/NA
Donde:
λ= longitud de onda de la luz (en
µm)
C= constante de proporcionalidad
NA= abertura numérica
13. Longitud de onda
La longitud de una onda es la
distancia entre dos crestas
consecutivas, en otras palabras
describe lo larga que es la onda.
En el espectro visible, las diferencias
en longitud de onda se manifiestan
como diferencias de color.
Si el espécimen se ilumina con luz
blanca, se considera la longitud de
onda del verde amarillo (0,55 um)
14.
15. Constante de proporcionalidad
Constante de proporcionalidad esta
relacionada con el grado de
superposición de dos puntos para
que puedan ser resueltos por el ojo
humano.
Esta constante es 0,61
16. Abertura
numérica
Es una medida de la capacidad del
microscopio de agrupar las refracciones
de la luz producidas por los finos
detalles del objeto, debido a que
determina el tamaño del haz de luz que
es captado por el objetivo luego de a
través del objeto. Es una característica
propia de cada objetivo, es por estoque
forma parte de las inscripciones
grabadas en los objetivos.
17. La calidad de un objetivo es tanto
mayor cuanto más elevada es su
apertura numérica.
18. Cálculo de la abertura
númerica
NA=n sen Θ
Donde:
n es el índice de refracción
del medio en el que la lente se
encuentra
θ es la mitad del ángulo de
aceptancia máximo que puede
entrar o salir de la lente.
19. Calcular el limite de resolución de los
diferentes objetivos del microscopio
óptico
10 x
LR= λC/NA
LR= 0,55 µm(0,61) /
0,30
LR= 1,12 µm 40 x
LR= λC/NA
LR= 0,55 µm(0,61) /
0,65
LR= 0,52 µm
20. Calcular el limite de resolución de los
diferentes objetivos del microscopio
óptico
100x
LR= λC/NA
LR= 0,55 µm(0,61) /
1,30
LR= 0,26 µm
21. Los microscopios ópticos modernos
tienen un limite de resolución de 0,2
a 0,4 um, aproximadamente l/20 del
diámetro de un eritrocito humano
normal
Para disminuir el LR podemos utilizar
una fuente con menor longitud de
onda (el caso extremo es el de los
microscopios electrónicos) o bien
aumentar n, para lo que podemos
intercalar entre la preparación y el
objetivo un medio más denso que el
22. Características del ME que lo
diferencian de la microscopía
de luz y que permite mejorar
el límite de resolución de
este último. Se logran haces
de electrones con una
longitud de onda de 0,05
nm, cuyo poder de resolución
es de 0,2 nm mientras que la
longitud de onda de la luz
visible oscila alrededor de
500 nm y su poder de
resolución es de 0,2 µm
23. Características importantes del
microscopio
Aumento total
Poder de penetración
Distancia focal
Poder definidor
Poder de resolución