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Ana Stephanie Troestch
EL MICROSCOPIO
  Del micro- (pequeño) y
  scopio, (observar)
Instrumento       óptico
destinado a observar
de cerca objetos u
organismos
extremadamentes
pequeños.
Es    la     herramienta
básica para el estudio
de la Biología.
Para el estudio del material biológico se
dispone de varios tipos de microscopios, lo
cuales se pueden clasificar básicamente de
acuerdo al tipo de fuente luminosa que usan:
• Ópticos o luminosos:
     - Campo claro
     - Campo oscuro
     - Contraste de fases
     - Fluorescencia
     - Ultravioleta
• Electrónicos
    - Barrido
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El       microscopio       óptico
convencional    es    compuesto
porque posee dos sistemas
principales       de       lentes
convergentes       (ocular      y
objetivo). La mayoría de los
modelos        actuales       son
binoculares, aunque también
los    hay    monoculares.     El
microscopio           compuesto
convencional se denomina quot;de
campo claroquot; o quot;de campo
brillantequot;   porque     todo   el
campo se ilumina con una lente
condensadora       común      que
Microscopio óptico o de campo
            claro mecánico: sostiene
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            al sistema óptico y aloja los
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              Sistema de iluminación: lo
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              Sistema óptico: incluye
            todos los elementos que
            colaboran en la ampliación de
El condensador proyecta un
cono de luz sobre las células
que están siendo examinadas
en el microscopio. Después de
atravesar a las células, ese
haz luminoso, en forma de
cono, penetra en el objetivo;
el objetivo proyecta una
imagen aumentada en el plano
focal    del    ocular,   que
nuevamente la amplia. Por fin
la imagen provista por el
ocular puede ser percibida
por la retina del ojo
Limite de resolución: es la menor distancia que
debe existir entre dos objetos para que puedan
visualizarse por separado. Cuando se ilumina un
objeto, los puntos de su superficie reflejan las
ondas luminosas. Dos puntos próximos de la
superficie se verán como distintos si la
distancia que los separa es grande comparada
con la longitud de onda que reciben.
Si la distancia que los separa es inferior a la
longitud de onda que los ilumina aparecerán a
nuestra vista como dos puntos unidos.
Comparación de limites de resolución
entre microscopio óptico, electrónico y
ojo humano.
Cálculo del límite de
resolución
            LR= λC/NA



Donde:
λ= longitud de onda de la luz (en
µm)
C= constante de proporcionalidad
NA= abertura numérica
Longitud de onda
La longitud de una onda es la
distancia     entre     dos     crestas
consecutivas,    en   otras    palabras
describe lo larga que es la onda.
En el espectro visible, las diferencias
en longitud de onda se manifiestan
como diferencias de color.

Si el espécimen se ilumina con luz
blanca, se considera la longitud de
onda del verde amarillo (0,55 um)
Constante de proporcionalidad

Constante de proporcionalidad esta
relacionada   con  el   grado    de
superposición de dos puntos para
que puedan ser resueltos por el ojo
humano.

Esta constante es 0,61
Abertura
           numérica
Es una medida de la capacidad del
microscopio de agrupar las refracciones
de la luz producidas por los finos
detalles del objeto, debido a que
determina el tamaño del haz de luz que
es captado por el objetivo luego de a
través del objeto. Es una característica
propia de cada objetivo, es por estoque
forma    parte   de    las  inscripciones
grabadas en los objetivos.
La calidad de un objetivo es tanto
mayor cuanto más elevada es su
apertura numérica.
Cálculo de la abertura
  númerica
             NA=n sen Θ

Donde:
n es el índice de refracción
del medio en el que la lente se
encuentra
θ es la mitad del ángulo de
aceptancia máximo que puede
entrar o salir de la lente.
Calcular el limite de resolución de los
diferentes objetivos del microscopio
óptico
 10 x
 LR= λC/NA
 LR= 0,55 µm(0,61) /
 0,30
 LR= 1,12 µm    40 x
                LR= λC/NA
                LR= 0,55 µm(0,61) /
                0,65
                LR= 0,52 µm
Calcular el limite de resolución de los
diferentes objetivos del microscopio
óptico

       100x

       LR= λC/NA
       LR= 0,55 µm(0,61) /
       1,30
       LR= 0,26 µm
Los microscopios ópticos modernos
tienen un limite de resolución de 0,2
a 0,4 um, aproximadamente l/20 del
diámetro de un eritrocito humano
normal

Para disminuir el LR podemos utilizar
una fuente con menor longitud de
onda (el caso extremo es el de los
microscopios electrónicos) o bien
aumentar n, para lo que podemos
intercalar entre la preparación y el
objetivo un medio más denso que el
Características del ME que lo
diferencian de la microscopía
de luz y que permite mejorar
el límite de resolución de
este último. Se logran haces
de     electrones   con   una
longitud de onda de 0,05
nm, cuyo poder de resolución
es de 0,2 nm mientras que la
longitud de onda de la luz
visible oscila alrededor de
500 nm y su poder de
resolución es de 0,2 µm
Características importantes del
           microscopio

Aumento total
Poder de penetración
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Poder definidor
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  • 2.
  • 3. EL MICROSCOPIO Del micro- (pequeño) y scopio, (observar) Instrumento óptico destinado a observar de cerca objetos u organismos extremadamentes pequeños. Es la herramienta básica para el estudio de la Biología.
  • 4. Para el estudio del material biológico se dispone de varios tipos de microscopios, lo cuales se pueden clasificar básicamente de acuerdo al tipo de fuente luminosa que usan: • Ópticos o luminosos: - Campo claro - Campo oscuro - Contraste de fases - Fluorescencia - Ultravioleta • Electrónicos - Barrido - Transmisión
  • 5.
  • 6. El microscopio óptico convencional es compuesto porque posee dos sistemas principales de lentes convergentes (ocular y objetivo). La mayoría de los modelos actuales son binoculares, aunque también los hay monoculares. El microscopio compuesto convencional se denomina quot;de campo claroquot; o quot;de campo brillantequot; porque todo el campo se ilumina con una lente condensadora común que
  • 7. Microscopio óptico o de campo claro mecánico: sostiene Sistema al sistema óptico y aloja los elementos necesarios para la iluminación y enfoque del preparado. Sistema de iluminación: lo integran aquellos componentes encargados de colectar la luz, dosificarla y dirigirla a través del preparado Sistema óptico: incluye todos los elementos que colaboran en la ampliación de
  • 8. El condensador proyecta un cono de luz sobre las células que están siendo examinadas en el microscopio. Después de atravesar a las células, ese haz luminoso, en forma de cono, penetra en el objetivo; el objetivo proyecta una imagen aumentada en el plano focal del ocular, que nuevamente la amplia. Por fin la imagen provista por el ocular puede ser percibida por la retina del ojo
  • 9.
  • 10. Limite de resolución: es la menor distancia que debe existir entre dos objetos para que puedan visualizarse por separado. Cuando se ilumina un objeto, los puntos de su superficie reflejan las ondas luminosas. Dos puntos próximos de la superficie se verán como distintos si la distancia que los separa es grande comparada con la longitud de onda que reciben. Si la distancia que los separa es inferior a la longitud de onda que los ilumina aparecerán a nuestra vista como dos puntos unidos.
  • 11. Comparación de limites de resolución entre microscopio óptico, electrónico y ojo humano.
  • 12. Cálculo del límite de resolución LR= λC/NA Donde: λ= longitud de onda de la luz (en µm) C= constante de proporcionalidad NA= abertura numérica
  • 13. Longitud de onda La longitud de una onda es la distancia entre dos crestas consecutivas, en otras palabras describe lo larga que es la onda. En el espectro visible, las diferencias en longitud de onda se manifiestan como diferencias de color. Si el espécimen se ilumina con luz blanca, se considera la longitud de onda del verde amarillo (0,55 um)
  • 14.
  • 15. Constante de proporcionalidad Constante de proporcionalidad esta relacionada con el grado de superposición de dos puntos para que puedan ser resueltos por el ojo humano. Esta constante es 0,61
  • 16. Abertura numérica Es una medida de la capacidad del microscopio de agrupar las refracciones de la luz producidas por los finos detalles del objeto, debido a que determina el tamaño del haz de luz que es captado por el objetivo luego de a través del objeto. Es una característica propia de cada objetivo, es por estoque forma parte de las inscripciones grabadas en los objetivos.
  • 17. La calidad de un objetivo es tanto mayor cuanto más elevada es su apertura numérica.
  • 18. Cálculo de la abertura númerica NA=n sen Θ Donde: n es el índice de refracción del medio en el que la lente se encuentra θ es la mitad del ángulo de aceptancia máximo que puede entrar o salir de la lente.
  • 19. Calcular el limite de resolución de los diferentes objetivos del microscopio óptico 10 x LR= λC/NA LR= 0,55 µm(0,61) / 0,30 LR= 1,12 µm 40 x LR= λC/NA LR= 0,55 µm(0,61) / 0,65 LR= 0,52 µm
  • 20. Calcular el limite de resolución de los diferentes objetivos del microscopio óptico 100x LR= λC/NA LR= 0,55 µm(0,61) / 1,30 LR= 0,26 µm
  • 21. Los microscopios ópticos modernos tienen un limite de resolución de 0,2 a 0,4 um, aproximadamente l/20 del diámetro de un eritrocito humano normal Para disminuir el LR podemos utilizar una fuente con menor longitud de onda (el caso extremo es el de los microscopios electrónicos) o bien aumentar n, para lo que podemos intercalar entre la preparación y el objetivo un medio más denso que el
  • 22. Características del ME que lo diferencian de la microscopía de luz y que permite mejorar el límite de resolución de este último. Se logran haces de electrones con una longitud de onda de 0,05 nm, cuyo poder de resolución es de 0,2 nm mientras que la longitud de onda de la luz visible oscila alrededor de 500 nm y su poder de resolución es de 0,2 µm
  • 23. Características importantes del microscopio Aumento total Poder de penetración Distancia focal Poder definidor Poder de resolución