2. INTRODUCCION
• En general no se determina la concentración de las enzimas en
tejidos/fluidos orgánicos sino su actividad.
• En el suero la concentración de las enzimas frecuentemente es baja, sin
embargo, dada su actividad catalítica, es posible determinar su actividad
con fiabilidad.
• La actividad es proporcional a la concentración.
3. nA+mB qC + pD
E
Para determinar la AE es necesario conocer:
- La estequiometria de la reacción que cataliza
[C]q
[A]n
[D]p
[B]m
Ke =
A,B: sustratos;
C,D : productos;
E: enzima;
n, m, q, p: coeficientes estequiométricos
Ke: constante de equilibrio
4. - Si necesita o no factor y cual es.
- La concentración mínima de sustrato y cofactor para alcanzar la Vmax de reacción.
- Las “condiciones óptimas” de medida:
pH
Tiempo de incubación
Procesado de las muestra biológica y los reactivos
Temperatura
Posibles activadores e inhibidores endógenos y exógenos de la muestra
Métodos
robustos
- Las características de la técnica analítica para esa muestra biológica
5. Actividad Enzimatica
Se mide en Unidades Internacionales por unidad
de volumen.
Se define a la unidad internacional como la
cantidad de enzima que transforma un micromol
de sustrato en un minuto en condiciones
estandares previamente establecidas.
9. Cálculo de la actividad enzimática:
- Aplicación de una variante de la ley de Lambert – Beer.
- Construcción de una recta de calibrado.
- Medidas indirectas de la concentración del sustrato (p, ej. % de inhibición).
