Trabajo sobre la extracccion de ADN de plátano

1. LICEO POLITÉCNICO LAB 1/1
HÉROES DE LA CONCEPCIÓN 2° VHS
L A J A
D P T O. D E B I O L O G I A
Asignatura: Biologia
Profesor: Victor H. Seguel P.
Alumnos: Pedro Max Alejandro Catricura Muñoz
Rodrigo Ignacio Contreras Pérez
Consuelo Belén Mendoza Maureira
Esteban Alonso Toledo Quinteros
Jorge Alejandro Vilches Montecinos
Fecha: Jueves 28 de Marzo del año 2013

2. LAB 1/2
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3. Introducción LAB 1/3
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El ácido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado ADN constituye el principal
componente del material genético de la inmensa mayoría de los organismos, junto con el
ARN (Ácido Ribonucleico), siendo el componente químico primario de los cromosomas y el
material en que los genes están codificados.
En las bacterias, el ADN se encuentra en el citoplasma mientras que en organismos
más complejos, tales como las plantas, animales y otros organismos multicelulares, la
mayoría del ADN reside en el núcleo celular.
Se conoce desde hace más de 100 años. El ADN fue identificado inicialmente en1868
por Friedrich Miescher, biólogo suizo, en los núcleos de las células del pus obtenidas de los
vendajes quirúrgicos desechados y en el esperma del salmón. Él llamó a la sustancia
nucleica, aunque no fue reconocida hasta 1943 gracia al experimento realizado por
OswaldAvery.
Su función principal es codificar las instrucciones esenciales para fabricar un ser vivo
idéntico a aquel del que proviene.
El ADN es la molécula de la herencia en todos los organismos vivos (procariontes y
eucariontes). Éste controla la vida de la célula y del organismo. Se encuentra principalmente
en el núcleo celular; y para ser extraído de la célula, se debe seguir una serie de
procedimientos, especificados en el este informe.
Por lo tanto, con el fin de conocer y analizar la morfología del ADN se propone realizar
la extracción de ésta estructura mediante la utilización de un vegetal, en este caso el plátano.

4. Descripción General de la Actividad. LAB 1/4
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El laboratorio ya realizado está relacionado con la imagen “Empaquetamiento de
ADN”, la cual muestra las características del ADN. La actividad consiste en extraer fibras de
ADN de un vegetal.
Materiales:
1 Plátano 1 Embudo
1 Colador Agua Destilada
1 pipeta de Pasteur 2 Vasos de Precipitado de 500ml.
1 Tenedor Sal de Mesa
1 Tubo de Ensayo Lavalozas (Liquido)
Alcohol de 96° Microscopio
1 Probeta Portaobjeto
1 Varilla de Vidrio Azul de Metileno
Desarrollo de la Actividad
En un tubo de ensayo vierte aproximadamente la mitad con alcohol desnaturalizado
de 96°, preferentemente lo más frio posible.
En un vidrio reloj vierte plátano y agua destilada y molerlo con el tenedor hasta formar
una especie de papilla.
En un vaso de precipitado mezclar una cuchara de lavalozas con una pizca de sal de
mesa y luego agregar 100ml de agua destilada.
Ahora agregar 3 cucharaditas de la papilla de plátano a la mezcla del vaso de
precipitado.
Revolver la mezcla por aproximadamente 10 minutos (sin formar espuma).
Filtrar la mezcla con ayuda de un colador.
Extraer parte del filtrado y guardarlo en el tubo de ensayo que contiene el alcohol frio.
Dejar reposar unos minutos.
Extraer un poco de la mezcla y depositarla en el porta objeto con un poco de azul de
metileno.
Lleva el portaobjeto con la mezcla teñida y observa en el microscopio.

5. Resultados LAB 1/5
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1. ¿Cuál es el papel del lavalozas en esta actividad?
R: El papel que juega el lavalozas en esta actividad es desestabilizar la membrana
celular, ya que es un solvente orgánico apolar, rompe los lípidos presentes en la
estructura de la membrana de la célula, permitiendo así entrar al núcleo, y extraer su
ADN.
2. ¿Por qué crees túque después se llegó solo a obtener el ADN y no la
combinación de otros polímeros?
R:Porque el alcohol hace que el ADN precipite y se desenrolle, separándose de la
mezcla.
3. ¿Con que técnicas moleculares podría marcar solo el material genético?
R:
Los Polimorfismos para la amplificación de regiones blanco, más conocidos
por su acrónimo inglés TRAP ("Target RegionAmplificationPolymorphism"), son un
tipo de marcador molecular que está basado en la amplificación del ADN genómico
mediante la reacción en cadena de la polimerasa.
El ensayo TRAP utiliza dos cebadores de 18 nucleótidos de longitud para generar
los marcadores. Uno de los cebadores, denominado «cebador fijo», se diseña
sobre una secuencia de ADNblanco o diana. El otro cebador, denominado
«cebador arbitrario», es una secuencia arbitraria de ADN con un núcleo rico en AT
o GC que se unen preferencialmente a exones o intrones, respectivamente. La
amplificación por PCR se realiza a través de cinco ciclos con una temperatura
de hibridación de 35°C, seguidos por 35 ciclos con una temperatura de hibridación
de 50°C. Para diferentes especies de plantas, cada reacción de PCR puede
generar hasta 50 fragmentos fácilmente observables con un tamaño que va desde
50 hasta 900 pares de bases
Polimorfismos en la longitud de los fragmentos de restricción que en biología
molecular, el término RFLP (del inglés RestrictionFragmentLengthPolymorphism)
se refiere a secuencias específicas de nucleótidos en el ADN que son reconocidas
y cortadas por las enzimas de restricción (también llamadas endonucleasas de
restricción) y que varían entre individuos. En un cromosoma humano, una enzima
de restricción puede producir un gran número de cortes en los lugares donde

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reconozca la secuencia específica para hacerlo. Las secuencias de restricción
presentan usualmente patrones de distancia, longitud y disposición diferentes en el
ADN de diferentes individuos de una población, por lo que se dice que la población
es polimórfica para estos fragmentos de restricción. Los RFLP son marcadores
genéticos del ADN y se pueden encontrar en regiones que codifican proteínas o
exones, en los intrones o en el ADN que separa un gen de otro. Lo único que se
necesita para que puedan ser marcadores genéticos es que sean polimórficos
teniendo más de un alelo. La técnica RFLP se usa como marcador para identificar
grupos particulares de personas con riesgo a contraer ciertas enfermedades
genéticas, en ciencia forense, en pruebas de paternidad y en otros campos, ya que
puede mostrar la relación genética entre individuos.
Los polimorfismos en la longitud de fragmentos amplificados, más conocidos
por su acrónimo inglés AFLP ("Amplifiedfragmentlengthpolymorphism"), son un tipo
de marcador molecular que está basado en la restricción del ADN genómico
mediante enzimas de restricción y en la subsecuente amplificación de algunos de
esos fragmentos mediante la reacción en cadena de la polimerasa. Son una
herramienta poderosa de análisis del genoma dado que poseen un alto poder de
detección de la variabilidad genética. El ensayo de AFLP combina la especificidad,
resolución y poder de muestreo de la digestión con enzimas de restricción con la
velocidad y practicidad de la detección de polimorfismos mediante PCR, sin
necesidad de disponer de información previa del genoma a estudiar. La técnica de
AFLP es propiedad de la empresa de biotecnología holandesa KeyGene
La amplificación aleatoria de ADN polimórfico, más conocida por el acrónimo
inglés RAPDs (Random Amplification of Polymorphic DNA), es un tipo
de marcador molecular basado en la reacción en cadena de la polimerasa. Los
fragmentos de ADN obtenidos por medio de esta técnica se amplifican en regiones
aleatorias del genoma ya que los iniciadores o cebadores de la reacción son
secuencias arbitrarias de ADN sintético. Es una de las técnicas más versátiles
desde que se desarrolló en el año 1990. 1 Es muy cómoda, rápida, requiere poco
ADN que además no necesita estar muy puro, no presupone conocimientos
previos sobre la secuencia, y se pueden distinguir rápida y simultáneamente
muchos organismos. Sus inconvenientes son que los fragmentos amplificados no
suelen corresponder a ADN ligado a algún carácter, sino redundante, y que no da
información sobre el número de copias que el ADN genómico contiene de la
secuencia amplificada. Esta tecnología ha sido utilizada para análisis de diversidad
genética,2 mejoramiento genético,3 y diferenciación de líneas clonales.

7. LAB 1/7
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La detección de los VNTR se puede realizar por hibridación del ADN o por técnicas
de PCR. En el primer caso, el ADN genómico es digerido con enzimas de
restricción que reconocen sitios adyacentes a la región repetida. Los fragmentos se
separan por electroforesis, se inmovilizan en una membrana y se detectan
mediante sondas al igual que los marcadores RFLPs.
En genética, los microsatélites (SSR o STR por sus acrónimos en inglés
para simple sequencerepeat y short tandemrepeat) son secuencias de ADN en las
que un fragmento (cuyo tamaño va desde dos hasta seis pares de bases) se repite
de manera consecutiva. La variación en el número de repeticiones crea
diferentes alelos.
Generalmente se encuentran en zonas no codificantes del ADN. Son neutros, co-
dominantes y poseen una alta tasa de mutación, lo que los hace muy polimórficos.
A pesar de esto, la variabilidad que presentan útil para su uso como marcadores
moleculares, es respecto al número de repeticiones, no de la secuencia repetida.
Son utilizados como marcadores moleculares en una gran variedad de
aplicaciones en el campo de la genética como parentescos y estudios
de poblaciones.
Un polimorfismo de un solo nucleótido o SNP (Single
NucleotidePolymorphism, pronunciado snip) es una variación en la secuencia
de ADN que afecta a una sola base (adenina (A), timina (T), citosina (C)
o guanina (G)) de una secuencia del genoma. Sin embargo, algunos autores
consideran que cambios de unos pocos nucleotidos, como también pequeñas
inserciones y deleciones (indels) pueden ser consideradas como SNP, donde el
término Polimorfismo de nucleótido simple es más adecuado. Una de estas
variaciones debe darse al menos en un 1% de la población para ser considerada
como un SNP. Si no se llega al 1% no se considera SNP y sí una mutación
puntual.

8. LAB 1/8
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4. ¿Cómo crees que es posible saber quiénes son los padres de alguna persona
que reclama paternidad?
R:Los métodos para determinar la paternidad de una persona existen variadas formas como
lo son la comparación de rasgos, Tipo de sangre ABO, análisis de proteínas y antígenos
HLA. Actualmente la prueba idónea es la prueba genética basándose en polimorfismo en
regiones STR.
La prueba de paternidad genética se basa en comparar el ADN nuclear de ambos. El ser
humano al tener reproducción sexual hereda un alelo de la madre y otro del padre. Un hijo
debe tener para cada locus un alelo que provenga del padre. Esta comparación se realiza
comparando entre 13-19 locus del genoma del hijo, del presunto padre y opcionalmente de la
madre, en regiones que son muy variables para cada individuo llamadas STR (Short
TandemRepeat).
Para determinar estadísticamente la exactitud de la prueba, se calcula el índice de
paternidad, el cual determina la probabilidad que no exista una persona con el mismo perfil
de alelos entre su raza. La cantidad de locus es determinada por la cantidad de marcadores
genéticos (que limitan los locus) utilizados, a mayor cantidad de marcadores mayor exactitud.
Con el uso de 15 marcadores se puede tener exactitudes de alrededor de 99,999%. Sin
embargo esta exactitud puede aumentar según la ocurrencia de alelos extraños en cada
individuo.
Cuando no se cuenta con muestras del presunto padre, se puede obtener un indice de
paternidad utilizando muestras de los padres paternos. También es posible obtener muestras
de prenatales mediante procedimiento de amniocentesis y Vellosidades coriónicas.

9. LAB 1/9
Conclusiones 2° VHS
Posteriormente a la extracción de ADN en células vegetales, se llega a concluir que el
material genético es un componente completamente esencial dentro de los seres vivos,
puesto que en su ausencia no se llega a concretar el control de las células y de los
organismos en sí. Además, mediante el experimento, se pueden observar que el lavalozas, al
ser un solvente orgánico apolar rompe los lípidos presentes en la estructura de la membrana
de la célula, permitiendo así entrar al núcleo, y extraer su ADN. También, al filtrar la mezcla
lo que queda sobre la gaza hidrófila son los restos de célula que fueron lisados. Es decir,
membrana plasmática, membrana nuclear, proteínas de gran tamaño y restos de organelos
que no puedan por el filtro.
Además, se ha observado la compleja morfología del ADN, y se ha comprobado que
cada uno de sus componentes es de vital importancia dentro de su funcionamiento, y que
cada una de sus estructuras es imprescindible e irreemplazable, las cuales, se espera
investigar en futuras investigaciones

10. LAB 1/10
Bibliografía 2° VHS
Larouse Diccionario Educativo Esencial estudiantil ilustrado, Primera Edición, de
Agosto de 2002, LAROUSSE.
Larouse Enciclopedia Educativa Esencial estudiantil ilustrado, Primera Edición – 9°
reimpresión, de Febrero de 2002, LAROUSSE.
Enciclopedia Autodidactica Quillet, 1960 Editorial Arístides Quillet S.A. México, Tomo
III, ARISTIDES QUILLET.
Linkografía
http://es.wikipedia.org/wiki/Marcador_gen%C3%A9tico
http://es.wikipedia.org/wiki/Polimorfismos_para_la_amplificaci%C3%B3n_de_reg
iones_blanco
http://es.wikipedia.org/wiki/TRAPs
http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Polimorfismos_de_Caracter%C3%ADsti
ca_%C3%9Anica)&action=edit&redlink=1
http://es.wikipedia.org/wiki/Polimorfismo_de_nucle%C3%B3tido_simple
http://es.wikipedia.org/wiki/Microsat%C3%A9lites
http://es.wikipedia.org/wiki/RAPD
http://es.wikipedia.org/wiki/AFLP
http://es.wikipedia.org/wiki/RFLP