Practica casera de extracción ADN de una célula vegetal (tomate)

1. UNIVERSIDAD DE CUENCA
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
ESCUELA DE VETERINARIA
TEMA:
Extracción de ADN de un tomate
ASIGNATURA:
Biología
INTEGRANTES:
Elizabeth Carchi
Jhon Guerrero
Pamela Ortiz
Raúl Tigre
PROFESOR:
Dra. Malena Herrera
AULA:
Grupo 1 Veterinaria

2. INDICE
Introducción ......................................................................... 3
Planteamiento del problema................................................. 4
Hipótesis............................................................................... 4
Objetivo ................................................................................ 4
Objetivos específicos...............................................................................4
Marco teórico........................................................................ 5
Extraccion de acidos nucleicos..................................................... 5
Métodos de extracción............................................................................6
Parte experimental ............................................................... 7
Materiales ...............................................................................................7
Procedimiento........................................................................................ 8
Resultados y análisis............................................................ 11
Conclusiones........................................................................ 11
Bibliografía..........................................................................12

3. INTRODUCCIÓN
El ADN es una molécula de gran tamaño que guarda y transmite de generación en
generación toda la información necesaria para el desarrollo de todas las funciones
biológicas de un organismo, está formado por la unión paralela de dos cadenas,
cada cadena se encuentra conformada por 4 diferentes nucleótidos. Lo que hace
que el ADN sea tan variado (por ejemplo de peces, plantas, bichos, humanos etc.)
Los ácidos desoxirribonucleico (ADN) y ribonucleico (ARN) son polímeros de
nucleótidos formados por un azúcar de cinco carbonos (desoxirribosa en el ADN y
ribosa en el ARN), una base nitrogenada (que puede ser adenina, timina, citosina,
guanina o uracilo) y una molécula de fosfato.
La expresión de los genes es la base del metabolismo celular, y por ésta se entiende
que el ADN se transcribe en ARN, que a su vez se traduce en proteínas. Esta
secuencia ADN-ARN-proteínas constituye el dogma central de la biología
molecular.
La molécula de ADN está constituida por dos largas cadenas de nucleótidos unidas
entre sí formando una doble hélice. Las dos cadenas de nucleótidos que constituyen
una molécula de ADN, se mantienen unidas entre sí porque se forman enlaces
entre las bases nitrogenadas de ambas cadenas que quedan enfrentadas.
Si pudiésemos tomar una cadena de ADN humano y la estiráramos de forma lineal
nos daríamos cuenta que el ADN humano tiene una longitud de extremo a extremo
de 2 metros, el ADN se enrolla sobre proteínas y se compacta formando los
cromosomas.
El ADN de manera global dirige la síntesis de todas las proteínas, se podría decir en
términos más sencillos que el ADN es una acumulación de genes (fragmentos de
ADN) y cada gen es la clave para la producción de una proteína.
En la extracción de los ácidos nucleicos, existen diferentes métodos que permiten
su obtención partiendo de diferentes fuentes por ejemplo; plantas plásmidos, gotas
de sangre, cabellos, células bacterianas, o eucariotas, etc.

4. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
¿Cómo extraer el ADN de un tomate?
HIPÓTESIS
 Los jabones líquidos utilizados como lavavajillas emulsionan los lípidos de
las membranas celulares y las rompen.
 La sal evita la unión de las proteínas.
 El alcohol separa el ADN de otros componentes celulares.
OBJETIVO
Utilizar técnicas sencillas para extraer el ADN del tomate observando su estructura
y cómo estas técnicas ocasionan cambios en las células haciendo que se pueda
llevar a cabo este proceso que es de gran importancia para el estudio del ADN.
Objetivos específicos
 Extraer el ADN del tomate
 Observar el ADN extraído

5. MARCO TEÓRICO
ADN: el ADN es la sustancia química donde se almacenan las instrucciones que
dirigen el desarrollo de un huevo hasta formar un organismo adulto, que
mantienen su funcionamiento y que permite la herencia. Es una molécula de
longitud gigantesca, que está formada por agregación de tres tipos de sustancias:
azúcares, llamados desoxirribosas, el ácido fosfórico, y bases nitrogenadas de
cuatro tipos, la adenina, la guanina, la timina y la citosina.
EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS
La extracción y purificación de ácidos nucleicos constituyen la primera etapa de la
mayoría de los estudios de biología molecular y de todas las técnicas de
recombinación de ADN. En este caso, los métodos de extracción permiten obtener
ácidos nucleicos los ácidos nucleicos purificados a partir de diversas fuentes para
después realizar análisis específicos de modificaciones genéticas mediante la
reacción en cadena de la polimerasa.
Dada la gran variedad de métodos de extracción y purificación de ácidos nucleicos
existentes, la elección de la técnica más adecuada suele efectuarse conforme a los
criterios siguientes:
 Ácidos nucleicos
 Organismo fuente
 Material inicial (tejido, hoja, semilla, material transformado, etc.)
 Resultados deseados (rendimiento, pureza, tiempo que requiere la
purificación)
 Uso posterior (PCR, clonación, etiquetado, transferencia, RT-PCR, síntesis
de ADN, etc.)

6. Dentro de algunos conceptos que pueden ser reforzados mediante la realización de
Este laboratorio, tenemos:
 El hecho de que el ADN se encuentra localizado en el núcleo de las
células eucarióticas y por lo tanto solo puede ser obtenido de células
nucleadas.
 Las células de un organismo eucariótico multicelular no presentan
diferencias de tamaño ni secuencia de su ADN, las diferencias se
presentan es a nivel de expresión genética, por lo tanto, si se quiere
conocer o estudiar el ADN de un individuo lo podemos hacer a partir
de cualquiera de sus células nucleadas.
 Debido a la expresión genética diferencial en los diferentes tipos de
células, estas presentan diferencias en su estructura, propiedades
biológicas y propiedades físicas y químicas, con base en esto, se sabe
que las células sanguíneas presentan diferencias de densidad y
características de membrana y que estas diferencias se pueden
utilizar para separarlas mediante técnicas de centrifugación y hacer
lisis diferencial de dichas células.
 Conocer los componentes de las macromoléculas que constituyen las
células.
Métodos de extracción
Para extraer los ácidos nucleicos del material biológico es preciso provocar una lisis
celular, inactivar las nucleasas celulares y separar los ácidos nucleicos de los restos
de células. El procedimiento de lisis idóneo suele consistir en un equilibrio de
técnicas y ha de ser suficientemente fuerte para romper el material inicial complejo
(un tejido, por ejemplo), pero suficientemente suave para preservar el ácido
nucleico.

7. PARTE EXPERIMENTAL
MATERIALES:
Zumo de tomate
Licuadora
Sal y Varilla Cuchara
Jabón líquido de
lavavajilla
Colador
Embudo
Jeringuilla
Agua
Tubo de ensayo

8. Alcohol antiséptico
Recipiente (vasos)
PROCEDIMIENTO
1. Preparar los materiales.
2. Licuar el tomate durante 15 segundos para
romper las células y luego colocar en un recipiente.

9. 3. Poner una cucharada de sal puesto que proporciona
al ADN un ambiente favorable y a su vez este permite
separar sus proteínas y contribuye con átomos
cargados positivamente que neutralizan la carga
negativa normal del ADN.
4. Agregar una cucharada de jabón líquido en el zumo
de tomate y mezclamos suavemente. El jabón se añade
porque cada célula está rodeada por la membrana celular, el
ADN se encuentra dentro del núcleo y para verlo hay que
romper las dos membranas Cuando este entra en contacto
con la célula, captura los lípidos y las proteínas.
5. Agregar 15 ml de agua para hacer la mezcla un poco
más liquida.

10. 6. Proceder a filtrar la mezcla del tomate usando
el colador, el embudo y el tubo de ensayo; dejar
reposar durante un minuto.
7. Verter por las paredes del tubo de ensayo 5 ml
alcohol etílico para que suceda la separación
del ADN, este cuando se encuentra en alcohol
se desenrolla y precipita en la interface entre el
alcohol y el agua
8. Esperar para ver los resultados de 1 a 3 minutos.

11. RESULTADOS Y ANÁLISIS
El resultado obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con
él, hay fragmentos de ARN.
Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la célula.
El alcohol además de permitirnos ver el ADN, este separa el ADN de otros
componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa y así el ADN se
precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto.
CONCLUSIONES
 Las membranas celulares son rotas por el detergente debido a que los
detergentes rompen la barrera lipídica solubilizando las proteínas e
interrumpiendo la interacción lípido-lípido, lípido-proteína y proteína-
proteína. Los detergentes, al igual que los lípidos, se asocian entre ellos y se
unen a superficies hidrofóbicas. Se componen de una cabeza polar
hidrofílica y una cola no polar hidrofóbica.
 La sal ayuda para que el filamento de células se unan; es decir evita la unión
de las proteínas del ADN.
 Es indispensable el alcohol etílico ya que el alcohol debe ser de una
concentración establecida sino podría romper moléculas de las células y
entonces no se podría observar el ADN. El alcohol precipita (solidifica) el
ADN fuera de la solución y separa así los componentes de las células. El
ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y
precipita en la interface entre el alcohol y el agua. El alcohol forzó al ADN a
agruparse en hebras las cuales subieron a la parte superior del tubo de
ensayo.

12. BIBLIOGRAFÍA
VINDEL RODRIGUEZ, Glexi; 2013; Slideshare; Extracción de ácidos nucleicos lab.
Genética UNAH; http://www.slideshare.net/glexirodriguez/extraccion-de-acidos-
nucleicos-lab-genetica-unah-27425914
ÁLVAREZ SÁNCHEZ; Nicole; 2010; Slideshare; Experimento extracción ADN;
http://www.slideshare.net/NicoleAlvarezSanchez/experimento-extraccion-
adnfinalnicolealvarez
MARTINEZ Stella Maris; 2009; Blogger; Alcohol como desinfectante;
http://quimicamente.blogspot.com/2009/07/alcohol-como-desinfectante.html
SYNGENTA MEXICO 2013; Biotecnología; ¿Qué es ADN?;
http://www.syngenta.com.mx/que-es-adn.aspx