Este documento presenta los resultados de un estudio que buscaba identificar perfiles de expresión de proteínas de membrana en carcinomas de célula escamosa de pulmón. Los investigadores recolectaron muestras de tejido de pacientes y extrajeron proteínas de membrana. Utilizaron técnicas como SDS-PAGE, electroforesis bidimensional, tinción con plata, MALDI-TOF MS, PCR con transcriptasa inversa y Western blot para analizar las proteínas. Sus hallazgos incluyen diferencias en la abundancia de proteínas entre te

1. Burong Li, Jiantong Chang, Yonglie Chu, Huafeng Kang,
Jun Yang, Jiantao Jiang, Hongbin Ma
Juan Mario Tobón Arango
Alejandra Uribe Ocampo
Molecular Biology
2012
Taken from: http://www.vidaysalud.com/daily/cancer/el-cancer-del-pulmon-no-es-el-
mismo-en-los-fumadores-que-en-los-no-fumadores/

3. Taken from: http://depsicologia.com/wp-
content/uploads/depsicologia15092009.png

4. Cancer
Classification
– Carcinoma:
• Epithelim: Squamous cell
carcinoma
• Glandular Tissue: Breast cancer
and prostate cancer
– Lymphoma and leukemia:
• Immune system: Bone marrow
and lymph nodes
– Sarcoma:
• Connective Tissue: Bone,
cartilage, nerve, muscle and
adipose tissue Taken from:
http://www.edicionesmedicas.com.ar/var/edicionesmedicas_com_ar/storag
e/images/actualidad/ultimas_noticias/una_posible_via_de_tratamiento_para
_el_linfoma/linfoma_difuso_cel._b_grandes._foto_anatpat.unicamp.br/7480
6-1-esl-AR/linfoma_difuso_cel._B_grandes._Foto_anatpat.unicamp.br.jpg

5. Cancer
 Stadistic:
– Cancer: Leading cause of death worldwide
• 7.6 million deaths (2008) (13%)
• Lung cancer: The most deadly (1.3 million deaths)
(2004) (2.3%)
 Management:
– Surgery
– Chemotherapy
– Ionizing radiation
Taken from: http://blogdefarmacia.com/wp-content/uploads/nauseas-vomitos-quimioterapia.jpg

6. Squamous cell carcinoma
• Non-small cell lung
• Cylindrical epithelium  Squamous epithelium (loss of cilia)
• Microscopically: squamous cell with keratin production
• Localization:
– Hilum (75%)
– Periphery (25%)
Taken from: http://trialx.com/curetalk/wp-
content/blogs.dir/7/files/2011/05/diseases/Carcinoma_Basal_Cell-3.jpg

7. Taken from: http://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADna

9. Objective
The aim of this work is to
screen and identify the
membrane protein expression
profiles of squamous cell lung
carcinomas
Taken from:
http://blogue.edithluc.com/what-constitutes-a-mobilized-team-a-team-where-you-want-to-find-yourself-in-every-day/?lang=en
http://www.thegeminigeek.com/what-causes-lung-cancer/
http://elprofedebiolo.blogspot.com/2010/01/estructura-y-composicion-de-la-membrana.html

11. Pacientes
Tomado de: http://elproyectomatriz.wordpress.com/2010/10/11/pueblos-
en-transicion/

12. Recolección de muestras
Los tejidos obtenidos
fueron confirmados por un
diagnóstico patológico
Tomado de:
http://topnews.us/content/230613-australian-docs-claim-breakthrough-lung-cancer-cure.
http://www.ispub.com/journal/the-internet-journal-of-pulmonary-medicine/volume-11-
number-2/image-in-medicine-squamous-cell-granulomas-in-completely-regressed-stage-
iiib-lung-cancer-after-chemoradiation-therapy.html.
http://www.cap.org/apps/docs/reference/myBiopsy/undifferentiated_carcinoma.html

13. Extracción de proteínas de membrana
La técnica consiste en:
•Importante para la preparación de
muestras y posterior análisis
Tomado de: http://elprofedebiolo.blogspot.com/2010/01/estructura-y-
composicion-de-la-membrana.html

14. SDS-PAGE
Técnica para separar las proteínas de acuerdo a su movilidad en
campos eléctricos, movilidad depende de:
• Peso
• Carga
• Tamaño  longitud de la cadena tamaño
• Forma
Tomado de: http://en.wikipedia.org/wiki/Western_blot

15. SDS-PAGE
SDS (Sodio Duodecil Sulfato)
•Desnaturaliza proteínas
•Da carga negativa a las proteínas
PAGE (Electroforesis en gel de poliacrilamida)
•Semisólido  separación
•Tamaño del poro es variable
•Poro determina el movimiento de la proteína
Tomado de: http://www.imb-jena.de/~rake/Bioinformatics_WEB/proteins_purification.html

16. Electroforesis Bidimensional
2-DE
Técnica que permite la separación de mezclas complejas de
proteínas en un único gel
La separación se hace en dos etapas consecutivas

17. Electroforesis Bidimensional
2-DE
Estudios comparativos de patrones
proteicos de diferentes individuos
Pueden compararse los patrones de
proteínas de:
• Un individuo sano frente a un
individuo enfermo
• Un mismo individuo expuesto
a diversas situaciones
Tomado de:
http://unoentrecienmil.blogspot.com/2010/11/uno-entre-cien-mil.
htmlhttp://www.pediatria24.com/pediatria/enfermedades/infecciones/escarlatina.html

18. Tinción con plata
Silver-staining
• Técnica de tinción de geles de
poliacrilamida
• Sensible para detectar proteínas y
ADN en geles
• Generada por una reducción
selectiva de los iones plata a plata
metálica
• Tiene la característica de producir
generalmente coloraciones de
amarillo a marrón oscuro
Tomado de: http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Silver-stained_SDS-
PAGE_gels_before_and_after_storage.jpg

19. MALDI-TOF MS
Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization
Time-Of-Flight
Técnica de ionización suave utilizada
en espectrometría de masas
Análisis de biomoléculas que
tienden a hacerse frágiles y
fragmentarse cuando son ionizadas
por métodos más convencionales
 Instrumento muy utilizado
en proteómica para la identificación Tomado de: http://www.biounalm.com/2011/05/la-citometria-de-masas-una-
de proteínas, en particular, en la novedosa.html
identificación por huella peptídica

20. PCR
(Reacción en cadena de la polimerasa)
Tomado de: http://noticiasdeabajo.wordpress.com/2012/01/28/resuelto-el-misterio-
de-la-heredabilidad-faltante/

21. PCR con transcriptasa inversa
RT-PCR
• Variante de la PCR
• ARN como molde inicial en vez de ADN
• Se emplea una transcriptasa inversa para la síntesis de un ADN
complementario al ARN (ADNc)
Pasos
Replicación un
fragmento de
ADN Tomado de: http://www.rt-pcr.info/

22. PCR con transcriptasa inversa
RT-PCR
Tomado de:
http://www.sciencedaily.com/releases/2011/0
2/110204205507.htm

23. Western Blot
Técnica analítica usada para detectar proteínas específicas en
una muestra determinada
Tomado de: http://www.biounalm.com/2011_05_01_archive.html
http://proyectofinalcs.blogspot.com/2008_06_01_archive.html
http://asidesimpleasidenatural.blogspot.com/2008/11/lab-basics-7-clichando-biomolculas-ii.html

24. Western Blot
• Identificar proteínas como
biomarcadores algunas
enfermedades
• Prueba diagnóstico de VIH
Tomado de: http://www.cytos.com/?id=190

26. Figura 1
Proteínas de membrana VS Proteínas
plasmáticas (WB)

27. Figura 2
Proteoma de células cancerígenas
VS Proteoma de células Normales
(SDS-PAGE)

28. Figura 4

29. Figura 6
Relativa abundancia de CTSD y HSP60 en tejidos
cancerosos y tejidos normales (PCR-TI)

30. Figura 7
Tejidos normales VS tejidos cancerosos. Expresión de
CSTD y HSP60 (WB)

32. Discussion
Taken from: http://www.cytos.com/?id=190.
http://www.vmworld.com/community/discussion-document

33. Discussion
Taken from: http://atlantykron.org/discussion.htm
http://www.visualphotos.com/image/2x4761296/asian_male_scientist_comparing_vials

35. Conclusions

36. Conclusions

40. Thanks!