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Indice
Resumen
Introducción
Metodología
Resultados y Discusión
Conclusiones
Resumen
❖ El objetivo de la investigación fue estudiar la
biodegradación de petróleo por microorganismos
autóctonos en suelos contaminados provenientes
de la bahía de Amuay del Estado Falcón.
❖ Se tomaron muestras en un área contaminada por
un derrame de crudo y se colocaron en
biorreactores con aporte de los nutrientes
necesarios para el desarrollo de los
microorganismos.
❖ En los suelos contaminados se aislaron e
identificaron tres especies autóctonas de hongos
del género Aspergillus, como lo son: Aspergillus
Níger, Aspergillus Flavus, Aspergillus Terreus.
❖ La concentración de hidrocarburos totales de
petróleo (HTP) se determinó por gravimetría, y
para un tiempo de 30 días de tratamiento ex situ
se obtuvo un valor de remoción de un 85 %.
Introducción
● Los hidrocarburos son uno de los grupos de sustancias potencialmente
contaminantes más importantes, por su abundancia, por su distribución espacial
en entornos urbanos y por su persistencia en distintos sectores ambientales.
● Se considera que son los compuestos dominantes del crudo (petróleo)
representando entre el 50 y el 98 % en peso del contenido total. Estos son
mezclas complejas de diferentes moléculas, que pueden agruparse en distintas
fracciones de hidrocarburos.
● La fracción de hidrocarburos alifáticos y los hidrocarburos polares, conformados
por asfaltenos altamente condensados y resinas, en donde cada uno difiere
significativamente respecto a su susceptibilidad frente a posibles procesos de
biodegradación.
● Para su mineralización, estos compuestos requieren la acción de más de una
especie microbiana, debido a que cada microorganismo tiene una capacidad
limitada para degradar las diferentes moléculas que los conforman; mientras
que, los consorcios microbianos, al estar compuestos por varias cepas de
diferentes géneros, poseen la capacidad enzimática necesaria para transformar
las diferentes moléculas constitutivas de los hidrocarburos, transformando las
moléculas con características de peligrosidad (inflamabilidad, toxicidad,
ecotoxicidad, volatilidad) en subproductos y metabolitos que pueden ser
reincorporados a los ciclos biogeoquímicos naturales, generando un menor
impacto al ambiente y a la salud humana.
● La bioestimulación es una técnica que
consiste en la provisión activa de
cantidades suficientes de oxígeno y
nutrientes para mantener a los
microorganismos responsables de la
degradación de forma que estos puedan
continuar proliferando y desarrollando el
proceso de biodegradación. Es el
método de biorremediación más
estudiado, y actualmente se presenta
como el de mas factible aplicación para
la mayorıa de los suelos contaminados
con hidrocarburos.
● El éxito de esta tecnología depende de la existencia, en el lugar contaminado, de microorganismos con la capacidad
metabólica apropiada para transformar los compuestos xenobióticos, en compuestos que puedan ser reincorporados a
los ciclos biogeoquımicos. Por este motivo es importante caracterizar el suelo sobre el cual se trabaja. Dependiendo de
las caracterısticas del suelo y del contenido de materia orgánica, los hidrocarburos de mayor peso molecular y menor
solubilidad pueden adsorberse en los microporos de las partıculas del suelo, resultando con esto ser inaccesibles como
fuentes de carbono y energía para los microorganismos. Ante este escenario los surfactantes actúan logrando
incrementar la biodisponibilidad mediante la acción paralela de la desorción y solubilización del contaminante. Sin
embargo la toxicidad e inhibición puede reducir el potencial de las aplicaciones en la biorremediación.
Metodología
Metodología
Bahía Amuay- Venezuela
Area de de estudio 480m2.
Lugar
Para obtener una muesta
representativa del suelo,
se mezclaron dos grupos
de nueves submuestras y
se formaron dos
muestras compuestas.
(Cuarteo 2Kg)
.
Mezclas de muestra
Marzo a Septiembre 2011.
Muestreo :9 puntos aleatorios, un
total de dieciocho
submuestras a una profundidad de
30 cm.
Tiempo de estudio
Fisicoquimico: nitrógeno
total( método de Kjeldahl)
el fosforo (método
colorimétrico azul de
molibdeno),, Ph,
Conductividad electrica,
textura del suelo y
contenido de hidrocarburos
totales (HTP)
Microbiana: Método de
aislamiento para
seleccionar la especie de
mayor capacidad en el
suelo.
,
CARACTERIZACION DE
SUELO
Caracterización de
microscopía
Determinación del hongo
presente en las muestras
de suelo.
Extraer especies fúngicas
(M. flotacion)
Inoculacion (cultivo
Sabouraud Agar)
Revisión de hongos,
bacterias y levadura
Purificacion de cada
hongo
Purificación
inoculo con
Sabouraud Agar
transcurrido de 14
dias de incubacion
Analisis
Macrosópico
identificacion
microscopica
Para evaluar los
microorganismos autóctonos
se aislaron los hongos de las
muestras de suelo contaminado
con hidrocarburos procedentes
de las playas de la Bahía de
Amuay. Se evaluó el efecto de
la concentraci´on de los
hidrocarburos en la velocidad
de crecimiento de los hongos,
en un medio que contenía un
2% m/m de HTP.
Para obtener los cultivos puros de
los hongos, se aislaron en etapa de
reproducción
Los Hongos fueron sembradas en
medio de cultivo Czapeck Dox; sin
sacarosa y contaminado con los
hidrocarburos extraídos de los
suelos de la Bahía de Amuay,
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Biodegradación de petróleo por hongos autóctonos

  • 3. ❖ El objetivo de la investigación fue estudiar la biodegradación de petróleo por microorganismos autóctonos en suelos contaminados provenientes de la bahía de Amuay del Estado Falcón. ❖ Se tomaron muestras en un área contaminada por un derrame de crudo y se colocaron en biorreactores con aporte de los nutrientes necesarios para el desarrollo de los microorganismos. ❖ En los suelos contaminados se aislaron e identificaron tres especies autóctonas de hongos del género Aspergillus, como lo son: Aspergillus Níger, Aspergillus Flavus, Aspergillus Terreus. ❖ La concentración de hidrocarburos totales de petróleo (HTP) se determinó por gravimetría, y para un tiempo de 30 días de tratamiento ex situ se obtuvo un valor de remoción de un 85 %.
  • 5. ● Los hidrocarburos son uno de los grupos de sustancias potencialmente contaminantes más importantes, por su abundancia, por su distribución espacial en entornos urbanos y por su persistencia en distintos sectores ambientales. ● Se considera que son los compuestos dominantes del crudo (petróleo) representando entre el 50 y el 98 % en peso del contenido total. Estos son mezclas complejas de diferentes moléculas, que pueden agruparse en distintas fracciones de hidrocarburos. ● La fracción de hidrocarburos alifáticos y los hidrocarburos polares, conformados por asfaltenos altamente condensados y resinas, en donde cada uno difiere significativamente respecto a su susceptibilidad frente a posibles procesos de biodegradación. ● Para su mineralización, estos compuestos requieren la acción de más de una especie microbiana, debido a que cada microorganismo tiene una capacidad limitada para degradar las diferentes moléculas que los conforman; mientras que, los consorcios microbianos, al estar compuestos por varias cepas de diferentes géneros, poseen la capacidad enzimática necesaria para transformar las diferentes moléculas constitutivas de los hidrocarburos, transformando las moléculas con características de peligrosidad (inflamabilidad, toxicidad, ecotoxicidad, volatilidad) en subproductos y metabolitos que pueden ser reincorporados a los ciclos biogeoquímicos naturales, generando un menor impacto al ambiente y a la salud humana.
  • 6. ● La bioestimulación es una técnica que consiste en la provisión activa de cantidades suficientes de oxígeno y nutrientes para mantener a los microorganismos responsables de la degradación de forma que estos puedan continuar proliferando y desarrollando el proceso de biodegradación. Es el método de biorremediación más estudiado, y actualmente se presenta como el de mas factible aplicación para la mayorıa de los suelos contaminados con hidrocarburos. ● El éxito de esta tecnología depende de la existencia, en el lugar contaminado, de microorganismos con la capacidad metabólica apropiada para transformar los compuestos xenobióticos, en compuestos que puedan ser reincorporados a los ciclos biogeoquımicos. Por este motivo es importante caracterizar el suelo sobre el cual se trabaja. Dependiendo de las caracterısticas del suelo y del contenido de materia orgánica, los hidrocarburos de mayor peso molecular y menor solubilidad pueden adsorberse en los microporos de las partıculas del suelo, resultando con esto ser inaccesibles como fuentes de carbono y energía para los microorganismos. Ante este escenario los surfactantes actúan logrando incrementar la biodisponibilidad mediante la acción paralela de la desorción y solubilización del contaminante. Sin embargo la toxicidad e inhibición puede reducir el potencial de las aplicaciones en la biorremediación.
  • 8. Metodología Bahía Amuay- Venezuela Area de de estudio 480m2. Lugar Para obtener una muesta representativa del suelo, se mezclaron dos grupos de nueves submuestras y se formaron dos muestras compuestas. (Cuarteo 2Kg) . Mezclas de muestra Marzo a Septiembre 2011. Muestreo :9 puntos aleatorios, un total de dieciocho submuestras a una profundidad de 30 cm. Tiempo de estudio Fisicoquimico: nitrógeno total( método de Kjeldahl) el fosforo (método colorimétrico azul de molibdeno),, Ph, Conductividad electrica, textura del suelo y contenido de hidrocarburos totales (HTP) Microbiana: Método de aislamiento para seleccionar la especie de mayor capacidad en el suelo. , CARACTERIZACION DE SUELO
  • 9. Caracterización de microscopía Determinación del hongo presente en las muestras de suelo. Extraer especies fúngicas (M. flotacion) Inoculacion (cultivo Sabouraud Agar) Revisión de hongos, bacterias y levadura Purificacion de cada hongo Purificación inoculo con Sabouraud Agar transcurrido de 14 dias de incubacion Analisis Macrosópico identificacion microscopica Para evaluar los microorganismos autóctonos se aislaron los hongos de las muestras de suelo contaminado con hidrocarburos procedentes de las playas de la Bahía de Amuay. Se evaluó el efecto de la concentraci´on de los hidrocarburos en la velocidad de crecimiento de los hongos, en un medio que contenía un 2% m/m de HTP.
  • 10. Para obtener los cultivos puros de los hongos, se aislaron en etapa de reproducción Los Hongos fueron sembradas en medio de cultivo Czapeck Dox; sin sacarosa y contaminado con los hidrocarburos extraídos de los suelos de la Bahía de Amuay, BIOREMEDIACIÓN POR BIOESTIMULACIÓN B