1. EVIDENCIAS FOTOGRAFICAS Y
PROCEDIMIENTOS.
LABORATORIO ENZIMAS MITOCONDRIALES
IVY ALEXANDRA CASTILLO BORRERO
LINA SOFIA POVEDA SANCHEZ
LEIDY MORENO TORRES
HEIDY CABALLERO
UNIVERSIDAD COOPERATIVA. VILLAVICENCIO
FACULTAD DE MEDICINA
10/11/2013

2. PRACTICA DE ENZIMAS
MITOCONDRIALES.
MATERIALES.

5. PRACTICA DE ENZIMAS
MITOCONDRIALES.
PROCEDIMIENTOS.

6. 1. ESTRACCION Y PREPARACION DE LAS ENZIMAS Y COENZIMAS.
Tomamos 5 gr de hígado (libre de tejido y sangre)

7.  Se tomo de 2 a 3 gr de arena y se llevo a un mortero junto con los 5 gr
de hígado, se agrego de a 3 porciones de NaCl hasta completar 15 ml.

8. SE MACERO MUY BIEN HASTA
OBTENER UNA MASA SUAVE.

9.  Luego se transfirió la mezcla a un Erlenmeyer que posteriormente fue
llevado a un baño de hielo durante 15 min.

10.  Luego de los 15 min pasamos la mezcla a 2 tubos de centrifuga y se
puso a centrifugar a 1500 rpm por 10 min.

11.  Se tomaron 5 tubos de ensayo, se marcaron así: (B´, B´1, B´2, B´3, B´4)
y se adicionaron los siguientes componentes en cada tubo.
REACTIVO
BLANCO
1
2
3
4
NaCl
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
Succinato de
sodio. 1%
0.0
1.0
1.0
1.0
1.0
Azul de
metileno.
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Malonato de
sodio. 1%
0.0
0.0
0.0
0.0
1.0
37°C X 10 min
Extracto
enzimático.
1.0
0.5
1.0
1.5
1.0
Aceite
mineral.
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0

12.  Antes de agregar el extracto enzimático y el aceite mineral llevamos
cada mezcla al baño serológico

13.  Luego de 10 min en el baño serológico se agrego el extracto
enzimático, se agito y se agrego el aceite mineral sin sacar los tubos del
baño serológico.

15.  Se tomaron otros 4 tubos de ensayo y se les adiciono los siguientes
reactivos para hacer el seguimiento de la reacción catalizada por la
citocromo oxidasa.
REACTIVO
BLANCO
1
2
3
NaCl
1.0
1.0
1.0
1.0
Succinato de
sodio. 1%
0.0
0.0
0.0
1.0
Cianuro de
potasio 0.05 M
0.0
0.0
1.0
0.0
Agua destilada. 2.0
1.0
0.0
0.0
Extracto
enzimático.
1.0
1.0
1.0
1.0
pfenilendiamina
1%
0.0
1.0
1.0
1.0

16.  Luego de adicionar los reactivos en cada tubo se llevaron al baño
serológico siendo revisado cada 5 min.