1. PRACTICA # 7
ENZIMAS OXIDATIVAS.
EVIDENCIAS FOTOGRAFICAS Y
PROCEDIMIENTOS.
IVY ALEXANDRA CASTILLO BORRERO
LINA SOFIA POVEDA SANCHEZ
LEIDY MORENO TORRES
HEIDY CABALLERO.
UNIVERSIDAD COOPERATIVA. VILLAVICENCIO.
MEDICINA.

2. MATERIALES Y REACTIVOS.
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MUSLO DE POLLO FRESCO.
ARENA.
HIELO.
CLORURO DE SODIO.
NORITA (CARBON ACTIVADO).
AZUL DE METILENO 0.02 %
CIANURO DE POTACIO.
AGUA DESTILADA.
LACTATO 1%
ACEITE MINERAL.

5. BREVE INTRODUCCION.
• En esta practica los extractos enzimáticos y
algunas sustancias de importancia biológica se
preparan de los tejidos del animal. Debido a que
las enzimas se deterioran rápidamente después
de la muerte del animal, los órganos requeridos
deben ser extraídos lo mas pronto posible y los
extractos de cada uno, preparados en rápida
sucesión.
• Los siguientes tejidos son para ser usados como
se indica: Músculo: Coenzimas y enzimas
(deshidrogenasa)

6. PREPARACION PARA LA COENZIMA.

7. 1. SE TOMO 1 GRAMO DE MUSLO

8. 2. SE COLOCO EL GRAMO DE MUSLO EN 8 mL de agua caliente (para
activar las enzimas del muslo que pueden destruir la coenzima
después de la muerte). Caliente al baño maría por 4 a 5 min.

9. 3. LUEGO DE CALENTAR EL GRAMO DE MUSLO, SE COLOCO TODO EL
CONTENIDO EN UN MORTERO JUNTO CON 1 GRAMO DE ARENA Y SE
TRITURO HASTA FORMAR UNA PASTA FINA.

11. 4. SE PUSO LA MEZCLA EN UN TUBO PARA CENTRIFUGAR Y
LUEGO SE PUSO EL SOBRENADANTE CON LA COENZIMA EN UN
BAÑO DE HIELO HASTA QUE FUE USADO.

13. PREPARACION PARA LA ENZIMA.

14. 1. TOMAMOS 1 GRAMO DE MUSLO

15. 2. SE COLOCO EN UN MORTERO JUNTO CON 20 mL de NaCl 0.9% y 1 A 2
GRAMOS DE ARENA.

17. SE TRITURO HASTA FORMAR
UNA PASTA.

18. 3. SE COLOCO LA MEZCLA EN UN TUBO Y SE PUSO A CENTRIFUGAR Y
LUEGO SE TOMO EL SOBRENADANTE QUE CONTIENE LA ENZIMA
LACTICA.

20. 4. LUEGO SE AÑADIO ½ DE NORITA (CARBON ACTIVADO) PARA REMOVER CUALQUIER
RESTO DE LA COENZIMA DE LA PREPARACION ENZIMATICA, LUEGO SE VOLVIO A
CENTRIFUGAR, SE GUARDO LA SOLUCION DE ENZIMA PURA EN HIELO.

21. PARA DEMOSTRAR LA RELACIÓN DE ENZIMA, COENZIMA Y SUBSTRATO, SE
COLOCARON LAS SIGUIENTES MEZCLAS EN TUBOS DE ENSAYO ASÍ:
TUBO ENZIMA COENZIMA
KCN
LACTATO
AZUL DE
#
ml
ml
0.5% ml
1% ml
METILENO
0.2 % ml
H2O
ml
1
1
0
1
1
1
1
2
1
1
1
1
1
1
3
1
1
1
0
1
1
4
0
1
1
1
1
1

22. SE AGREGARON EN CADA TUBO DE ENSAYO LOS ANTERIORES
COMPONENTES, Y LUEGO ACEITE MINERAL (SIN HACER BURBUJAS), ESTE
PARA ESTABLECER CONDICIONES RELATIVAMENTE ANAEROBIAS.

23. YA LOS TUBOS CON CADA MEZCLA, FUERON LLEVADOS AL BAÑO
SEROLOGICO POR UNA HORA.

26. AL SALIR DEL BAÑO SEROLOGICO SE COLOCARON LOS TUBOS EN UNA
GRADILLA POR TRES HORAS.

27. EL CAMBIO FUE NOTORIO EN
EL TUBO # 2.

28. CONCLUSIONES.
• Obtuvimos que hubo un cambio notorio en la
mezcla del tubo #2, que el azul de metileno se
disipó por la presencia de la enzima había
suficiente flavoproteina para disipar el azul de
metileno, tenia coenzima que es necesaria para el
trabajo en conjunto con la enzima para las
reacciones.
• El que menos disipo el azul de metileno fue el
tubo #4 por falta de la enzima.