Club de Inmunohistoquímica y
Biología Molecular
Mª Dolores Lozano Escario
Clínica Universidad de Navarra.
Pamplona.
“Cuando me invitan a dar charlas un poco filosóficas pienso
que mi vida profesional está acabada “
Dr. JR Valentí.
Especialista en Traumatología y Cirugía Ortopédica.
Clínica Universidad de Navarra.
Marzo 1993- Abril 1995
Abril-Mayo 1995
Junio 1995………………………………………….
Departamento de Anatomía Patológica
Clínica universidad de Navarra. Pamplona.
HPV en citología ginecológica…….
Desarrollo de la PAAF
Técnicas de punción con TAC, ecoendoscopia, broncoscopia, EBUS
Bloques celulares, biopsias pequeñas.
Rudolf Virchow (1821-1902)
Teoría general de la enfermedad basada en tres principios:
•Principio de la localización: no hay "enfermedades generales", todo proceso
morboso se halla anatómicamente localizado.
•Principio de la lesión celular: si se quiere conocer lo que en la enfermedad es
verdaderamente fundamental hay que recurrir al estudio de la célula.
•Principio del peligro: La vida de la célula enferma lleva en sí una cierta idea de
"peligro", y esto es lo que básicamente distingue a la enfermedad de la salud en
cuanto modos de vida.
Teoría celular:la célula es la unidad elemental de
la estructura y formación de todos los seres vivos.
Toda célula procede de otra célula
La Anatomía Patológica Humana (AP) es la rama de la Medicina que se ocupa
del estudio, por medio de técnicas morfológicas, de las causas, desarrollo y
consecuencias de las enfermedades.
El fin último es el diagnóstico correcto de biopsias,
piezas quirúrgicas, citologías y autopsias.
La Anatomía Patológica es una especialidad médica que
posee un cuerpo doctrinal de carácter básico que hace
que sea, por una parte, una disciplina académica
autónoma y, por otra, una unidad funcional en la
asistencia médica.
Completo, de calidad y reproducible
Patología: Estudio (logos) del sufrimiento (pathos)
Ciencia Básica Práctica Clínica
Estudio de cambios estructurales y funcionales en células, tejidos
y órganos que subyacen la enfermedad
Técnicas: morfológicas
inmunológicas
microbiológicas
moleculares
Dimensión Asistencial
Investigación Aplicada
11 mm
Desarrollo
de lineas
celulares
Inmunocitoquímica
FISH
Técnicas complementarias en patología
Estudios moleculares
INTRODUCCIÓN
Tumores morfológicamente iguales
Alteraciones moleculares “diana” diferentes
Necesidad de información molecular
•Desarrollo de técnicas reproducibles para
estandarizar las guías terapeúticas
•Diagnóstico AP completo
•Calidad de las muestras diagnósticas
ALK fusion
54-yr-old male
never-smoker,
adenoca
Interpatient Heterogeneity in the Molecular
Characteristics of NSCLC
Patients With the Same Diagnosis and Clinical Features
(Stage IV NSCLC)
In 2012:
 Most oncologists would agree that these patients have very different malignancies
 Most oncologists would agree that these patients should receive different therapy
39-yr-old
female
never-smoker,
adenoca
EGFR Mt
65-yr-old male
smoker,
squamous
KRAS Mt
Demanda de diagnósticos
“precoces”, certeros, rápidos
y mediante métodos
mínimamente invasivos
Biopsias
PAAF
Pacientes
metastásicos
Desarrollo de las
técnicas de imagen
• provide accurate diagnosis
• manage the tissue in a way that immunohistochemical
and/or molecular studies can be performed
•use and integration of immunohistochemical (i.e. TTF-
1/p63), histochemical (i.e. mucin stain), and molecular
studies
Enero 2008- Enero 2012. CUN-Departamento de Anatomía Patológica
590 CPNM
441 citología (PAAF); 36 con Bx
149 biopsia / resección; 32 con PAAF previa
Líneas
celulares
Immunocitoquímica
FISH
Técnicas complementarias en muestras citológicas y biopsias pequeñas
Estudio mutacional
Estudio Molecular
Citometría
de flujo
CD20
Immunocitoquímica
BCL-2
SAMPLE
PROCUREMENT IN
PATIENTS WITH
SUSPECTED METASTATIC
MELANOMA
•FINE NEEDLE ASPIRATION
•Direct FNA
•EUS guided FNA
•Bronchoscopy guided
FNA
•SURGICAL SPECIMEN
IMPRINTS
•EYE IMPRINTS
CYTOLOGICAL
DIAGNOSIS BY
PATHOLOGIST
• ACCURATE
DIAGNOSIS
• IHQ (Melan A,
S100, HMB45)
•Select smear for
molecular testing
containing more
than 40% tumour
cells.
DNA EXTRACTION
PCR AMPLIFICATION DIRECT
SEQUENCING
•Exon 15 of BRAF gene
•Exons 9,11,13 and 17 of c-Kit
gene
S-100
Melan A
FINAL REPORT
V600E mutation in BRAF gene L576P mutation in c-Kit gene
Varon 76 años, fumador 80 paq/año
Citologia esputo “positiva para ca. Escamoso”
Masas pulmonares bilaterales, adenopatías mediastínicas
Mts. Hepáticas, óseas, pleurales y cerebrales
PAAF con broncoscopio de adenopatías hiliares
2011C1865
2011C1865
TTF-1
p63
Del E746-S752 Exón 19
Del E746-S752 Exón 19
Respuesta parcial a los 6 meses del incio de TKIs
•Mujer 72 años, no fumadora
•Enfermedad diseminada
(origen desconocido)
•Metástasis cerebrales
•Se le había ofrecido
únicamente tratamiento
paliativo
TTF-1
CK-7
PAAF directa de un nódulo supraclavicular
Ac metastásico de probable origen pulmonar
del L747-E749, A750P Exon 19
Tratamiento con TKI (Tarceva)
“...los nuevos test moleculares no son una amenaza para los
patólogos, sino una oportunidad para incorporar las nuevas
tecnologías y desarrollarlas. Los citopatólogos juegan un papel
primordial puesto que se les pide hacer más con menos
muestra.....”
Naylor and Ramzy, 2003
a todos !
gracias
Muchas
02_Lozano.pdf

02_Lozano.pdf

  • 1.
    Club de Inmunohistoquímicay Biología Molecular Mª Dolores Lozano Escario Clínica Universidad de Navarra. Pamplona.
  • 2.
    “Cuando me invitana dar charlas un poco filosóficas pienso que mi vida profesional está acabada “ Dr. JR Valentí. Especialista en Traumatología y Cirugía Ortopédica. Clínica Universidad de Navarra.
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    Junio 1995…………………………………………. Departamento deAnatomía Patológica Clínica universidad de Navarra. Pamplona.
  • 13.
    HPV en citologíaginecológica…….
  • 14.
    Desarrollo de laPAAF Técnicas de punción con TAC, ecoendoscopia, broncoscopia, EBUS Bloques celulares, biopsias pequeñas.
  • 16.
    Rudolf Virchow (1821-1902) Teoríageneral de la enfermedad basada en tres principios: •Principio de la localización: no hay "enfermedades generales", todo proceso morboso se halla anatómicamente localizado. •Principio de la lesión celular: si se quiere conocer lo que en la enfermedad es verdaderamente fundamental hay que recurrir al estudio de la célula. •Principio del peligro: La vida de la célula enferma lleva en sí una cierta idea de "peligro", y esto es lo que básicamente distingue a la enfermedad de la salud en cuanto modos de vida. Teoría celular:la célula es la unidad elemental de la estructura y formación de todos los seres vivos. Toda célula procede de otra célula
  • 17.
    La Anatomía PatológicaHumana (AP) es la rama de la Medicina que se ocupa del estudio, por medio de técnicas morfológicas, de las causas, desarrollo y consecuencias de las enfermedades. El fin último es el diagnóstico correcto de biopsias, piezas quirúrgicas, citologías y autopsias. La Anatomía Patológica es una especialidad médica que posee un cuerpo doctrinal de carácter básico que hace que sea, por una parte, una disciplina académica autónoma y, por otra, una unidad funcional en la asistencia médica. Completo, de calidad y reproducible
  • 18.
    Patología: Estudio (logos)del sufrimiento (pathos) Ciencia Básica Práctica Clínica Estudio de cambios estructurales y funcionales en células, tejidos y órganos que subyacen la enfermedad Técnicas: morfológicas inmunológicas microbiológicas moleculares Dimensión Asistencial Investigación Aplicada
  • 22.
    11 mm Desarrollo de lineas celulares Inmunocitoquímica FISH Técnicascomplementarias en patología Estudios moleculares
  • 26.
  • 27.
    Tumores morfológicamente iguales Alteracionesmoleculares “diana” diferentes Necesidad de información molecular •Desarrollo de técnicas reproducibles para estandarizar las guías terapeúticas •Diagnóstico AP completo •Calidad de las muestras diagnósticas
  • 28.
    ALK fusion 54-yr-old male never-smoker, adenoca InterpatientHeterogeneity in the Molecular Characteristics of NSCLC Patients With the Same Diagnosis and Clinical Features (Stage IV NSCLC) In 2012:  Most oncologists would agree that these patients have very different malignancies  Most oncologists would agree that these patients should receive different therapy 39-yr-old female never-smoker, adenoca EGFR Mt 65-yr-old male smoker, squamous KRAS Mt
  • 29.
    Demanda de diagnósticos “precoces”,certeros, rápidos y mediante métodos mínimamente invasivos Biopsias PAAF Pacientes metastásicos Desarrollo de las técnicas de imagen
  • 30.
    • provide accuratediagnosis • manage the tissue in a way that immunohistochemical and/or molecular studies can be performed •use and integration of immunohistochemical (i.e. TTF- 1/p63), histochemical (i.e. mucin stain), and molecular studies Enero 2008- Enero 2012. CUN-Departamento de Anatomía Patológica 590 CPNM 441 citología (PAAF); 36 con Bx 149 biopsia / resección; 32 con PAAF previa
  • 31.
    Líneas celulares Immunocitoquímica FISH Técnicas complementarias enmuestras citológicas y biopsias pequeñas Estudio mutacional
  • 32.
  • 33.
    SAMPLE PROCUREMENT IN PATIENTS WITH SUSPECTEDMETASTATIC MELANOMA •FINE NEEDLE ASPIRATION •Direct FNA •EUS guided FNA •Bronchoscopy guided FNA •SURGICAL SPECIMEN IMPRINTS •EYE IMPRINTS CYTOLOGICAL DIAGNOSIS BY PATHOLOGIST • ACCURATE DIAGNOSIS • IHQ (Melan A, S100, HMB45) •Select smear for molecular testing containing more than 40% tumour cells. DNA EXTRACTION PCR AMPLIFICATION DIRECT SEQUENCING •Exon 15 of BRAF gene •Exons 9,11,13 and 17 of c-Kit gene S-100 Melan A FINAL REPORT V600E mutation in BRAF gene L576P mutation in c-Kit gene
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    Varon 76 años,fumador 80 paq/año Citologia esputo “positiva para ca. Escamoso” Masas pulmonares bilaterales, adenopatías mediastínicas Mts. Hepáticas, óseas, pleurales y cerebrales PAAF con broncoscopio de adenopatías hiliares
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    Del E746-S752 Exón19 Respuesta parcial a los 6 meses del incio de TKIs
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    •Mujer 72 años,no fumadora •Enfermedad diseminada (origen desconocido) •Metástasis cerebrales •Se le había ofrecido únicamente tratamiento paliativo
  • 40.
    TTF-1 CK-7 PAAF directa deun nódulo supraclavicular Ac metastásico de probable origen pulmonar del L747-E749, A750P Exon 19
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    “...los nuevos testmoleculares no son una amenaza para los patólogos, sino una oportunidad para incorporar las nuevas tecnologías y desarrollarlas. Los citopatólogos juegan un papel primordial puesto que se les pide hacer más con menos muestra.....” Naylor and Ramzy, 2003
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