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INFORME




Mejora de la calidad nutricional de la grasa de leche caprina,
  mediante la suplementación de la dieta del animal con el
          suplemento alimenticio LODYN MILK.
                PRUEBA TOXICOLOGICA.




Empresa       : LODYN SL. Juan Carlos Rodríguez, A. García.
Colaboradores: CSIC. Instituto de Ciencia, Tecnología de a
               Alimentos y Nutrición.
               Facultad Veterinaria Universidad Complutense
                Madrid.
Investigador : Arturo Anadon.
                Miguel Ángel de la Fuente. (CSIC).



                                                                 1
EXPERIENCIA         LECHE DE CABRA


                      Para el desarrollo del presente estudio se contó con la
         participación de una granja de ganadería caprina de raza Murciana sita en
         el Municipio de Malagón (Ciudad Real). El rebaño de esta granja se dividió
         en dos grupos. El primero se alimentó con una dieta normal, a base de
         forraje (alfalfa, heno, ensilado) y pienso comercial; mientras que en el
         segundo grupo de animales se suplementó la ración previamente
         balanceada con el suplemento LODYN MILK (el tipo de forraje en ambas
         raciones fue igual).

                      A los tres meses desde el comienzo de la alimentación con
         ambas dietas o raciones, se recogió leche de gran mezcla de los dos grupos
         de animales y se extrajo, mediante desnatado a gran escala en la Escuela
         Universitaria de Ingenieros Técnicos Agrícolas de Madrid, grasa de cada
         una de ellos. Mediante distintas técnicas cromatográficas (ver Anexo 1) se
         determinó detalladamente el perfil de ácidos grasos de ambas muestras
         (Tabla 1).

         TABLA 1. Perfil de ácidos graos (g/lOOg de ésteres metílicos totales) de grasa de
         leche de cabras alimentadas con una dieta normal (leche estándar) y grasa de leche
         de cabras suplementadas con el suplemento LODYN MILK (leche LODYN
         MILK). SFA: ácidos grasos saturados; MUFA: ácidos grasos monoinsaturados;
         PUF A: ácidos grasos poliinsaturados; CLA: ácido linoléico conjugado.

          TABLA 1                       GRASA LACTEA

                            2,82
                            0,05
                            0,02
                            2,69
                            0,03
                            0,56
                            0,12
                            0,21
                            5,81
                            2,47
                            7,26
                            2,76       MILK              0,02
                                                         0,01
                                                         0,07
                                                         3,34
                                                         0,04
                                                         3,15
                                                         2,85
                                                         0,64
                                                         0,17
                                                         7,83
                                                         3,69
                                                         9,73
                                                         0,27   LECHE LODYN
ÁN DAR    C4:0




                                                                                          2
~-   -   m

C16:0 ¡so          0,34 11
                    0,39
                    0,24
                    0,26
                    0,02
                      24,1
                 0,93 21,2
                    0,19
                    53,96
                    0,01
                    0,04
                    16,68
                    0,03
                    0,05
                    0,13
                    0,08
                    0,15
                    0,41
                    0,18
                    0,07
                    0,12
                    0,06
                    0,42
                      0,1
                    0,46      0,33
                              0,03
                              0,45
                             23,59
                              0,21
                             13,13
                              0,28
                              0,08
                              0,27
                             70,35
                              0,09
                              0,02
                             20,16
                              0,01
                             17,64
                              0,05
                              0,14
                              0,162
                                0,3
                              0,13
                              0,49
                              0,07
                              0,03
                              0,12
                              0,04
                              0,061
                              0,031
                              0,051
MUFA
C16:1
C20:1
C18:1 +C16:1 iso
trans-5 C12:0
C10:1                         0,051

            3
trans-13 C16:1           5,1
                         0,72
                         0,74
                         0,56
                         1,5
                         0,017
                         0,045
                    0,01 0,04
                         0,003
                         0,024
                         0,108
                         0,006
                         1,915
                         0,013
                         1,538
                         0,03
                         4,37
                         0,001
                         0,02
                         0,09
                         0,04
                         0,07
                           1,3
                   0,003 2,1
                    0,07 0,4
                       0,26
                       13,55
                         0,01
                         0,11
                         0,22
                         0,58
                         0,005
                       0,109
                         0,28
                         1,69
                         0,78
                         1,03     0,32
                                  0,02
                                  0,42
                                  0,49
                                  0,28
                                  0,01
                                    0,4
                                    1,5
                                  0,03
                                  0,06
                                  0,14
                                  0,36
                                  5,25
                                    0,1
                                 0,006
                                 0,004
                                 0,001
                                 0,003
                                 0,424
                                 0,002
                                  2,81
                                  0,07
                                  2,08
                                  0,08
                                  0,77
                                  0,29
                                 0,005
                                 0,525
                                 0,011
                                  0,55
                                  0,09
                                  0,02
                                  0,21
                                  0,03O
PUFA
C18:3
cis)
trans-13
trans-11 trans-15C 18: 3
cis-6cis-9cis-12




                                          4
C20A n-6                                     0,14             0,05
C22:2 n-6                                    0,01             0,02
C20:5 n-3                                    0,02             0,07
C22:5 n-3                                    0,05             0,09
C22:6 n-3                                    0,05             0,05
SUMA n-6                                      2,3             1,41
SUMA n-3                                     0,35             1,59
n-6/n-3                                      6,55             0,89
SUMA Otros PUF A                             0,57               12


       La grasa de la leche estándar tenía una composición similar a una
grasa de leche de cabra convencional con un contenido en ácidos grasos
saturados (SFA) del 70%. En comparación, la grasa de la leche de
animales suplementados con el suplemento LODYN MILK contenía un
55%    de SFA. El contenido de trans-ll C 18:1 (ácido vacénico) y cis-9
trans-ll C18:2 (ácido ruménico, RA) se multiplicó por más de tres
mientras que el porcentaje de ácido alfa-linolénico lo hizo por más de 5.
Además la concentración de ácido oleico en leche derivada del uso del
suplemento LODYN MILK se incrementó en más de una 15%.
        Desde el punto de vista nutricional la leche procedente de animales
alimentados con dietas suplementadas con LODYN MILK, tenía
potencialmente un perfil más saludable. El Índice de Aterogenicidad fue la
mitad y la relación omega6/omega3 siete veces más baja que la de una
 leche estándar.



                   EVALUCACION TOXICOLOGICA


             La evaluación toxicológica de estas dos grasas se desarrolló en
la Facultad de Veterinaria de la Universidad Complutense de Madrid,
empleando 72 ratas de experimentación distribuidas en tres tratamientos.
En dicho ensayo, y durante un periodo de veintiocho días, se compararon
los efectos de la administración diaria de 2000 mg/kg (de peso vivo) de
ambas muestras de grasa sobre distintos parámetros clínicos y de anatomía
patológica. Se estableció además relación con un tercer grupo de ratas
(control) a las que no se administró grasa alguna durante los 28 días del
periodo experimental.

 Seguimiento de Grupos de ratas satélites: Consistió en 3 grupos de ratas
 sometidos a idénticos tratamientos a los descritos anteriormente durante
 idéntico periodo. Al final de los 28 días, los animales no se sacrificaron y
 aquellos (estándar y leche LODYN MILK) a los que se administraba grasa

                                                                            5
se les privo de la misma. Estos animales fueron sacrificados 14 días más
tarde llevándose a cabo una evaluación de todos los parámetros a los que se
hace referencia en las tablas 2, 3 Y 4.

       Los resultados del estudio toxicológico     pueden resumirse de la
siguiente manera:

   1) Mortalidad   V   Apariencia General.

No se produjo mortalidad animal durante ninguno de los tres tratamientos
ensayados. Tampoco se observaron cambios en la condición general y en la
apariencia externa de los machos y hembras de rata con ninguna de las dos
grasas administradas. El desarrollo vital de los animales durante el período
experimental correspondió en todos los casos al característico de su edad y
espeCie.

   2) Peso corporal v consumo de alimento.

No hubo diferencias significativas en el peso corporal ni ganancia del
mismo entre los grupos de animales tratados. El consumo de alimento y
agua fue similar en ratas Control, ratas con grasa estándar y ratas con grasa
LODYN MILK.

   3) Anatomía Patolóeica.

La necropsia llevada a cabo el día 29 después de la administración de la
última dosis de grasa láctea no reveló cambios patológicos o ninguna
diferencia entre tratamientos ni en el peso de los distintos órganos, ni en la
relación peso corporaVpeso del órgano (tabla 4). Después de cuatro
semanas tampoco se observaron modificaciones histopatológicas en
ninguno de los órganos examinados.

    4) PatoloeÍa Clínica.

 Todos los datos hematológicos estuvieron dentro de los intervalos
 normales, no observándose diferencias entre grupos (tabla 2). La mayoría
 de los datos de Química Clínica (tabla 3) mostraron ausencia de
 alteraciones al final del período del estudio y fueron similares para los tres
 tratamientos. Es de destacar, que tanto el contenido de colesterol total como
 de sus fracciones (HDL y LDL) no se vio afectado por la administración de
 ninguna de las dos grasas lácteas.
 Las concentraciones de triglicéridos en plasma si fueron sin embargo
 estadística mente distintas para los tres tratamientos. El contenido más


                                                                              6
alto se detectó en el grupo de leche estándar, seguido de Control y
finalmente del grupo de leche LODYN MILK. Este comportamiento
fue idéntico para machos que para hembras. Estos resultados
denotarían que la 2rasa rica en VA. RA v alfa-Iinolénico procedente de
la leche LODYN MILK. tendría un potencial antitrildicerodémico del
que carecería la 2rasa láctea estándar. Estas diferencias entre
tratamientos no fueron observadas durante el se2uimiento de 2rupos
de rata satélite lo que indicaría que son dependientes de la
administración de 2rasa de leche LODYN MILK.




                                                                     7
Tabla 2. Parámetros hematológicos en ratas tras la administración oral diaria de 2000 mg/Kg (en peso vivo) durante 4 semanas de
          grasa láctea standard (SOF) y grasa láctea enriquecida naturalmente (EOF) en ácidos vacénico, ruménico y a-linolénico a. Los
          grupos satélites corresponden a ratas a las que se mantuvo tras el primer período de 4 semanas, 14 días más sin administración de
          grasa alguna.
              895.00±0.00 ControlSDFSatélite
               2.62 ±0.]935.37 32.97 ± 0.01
               49.6] ±±0.31
               46.07 0.71
               15.83 0.01
               15.52 0.55
               44.92 0.02
               50.80 0.08
               48.28 0.00
               16.28 0.23
               18.27 0.31
               47.65 0.64
               52.67 0.80
               15.85 0.40
               46.10 0.28
               48.20 0.37
               18.43 0.41
               5.37± 0.99
                930.83 0.96
              762.67±±±0.23
              900.83±±0.28
               8.48 0.00
               10.02 0.68
               53.23 0.20
               18.32 ±0.27
               761.33 0.09
               0.08 0.19
               0.10 0.67
               0.03 0.15
               0.07 0.37
               6.78 0.18
               19.58 0.05
               2.90 007
               2.81 0.01
               54.92 0.48
               50.43 0.16
               16.77 0.13
               0.06
               0.11
               951.83 0.57
               2.47
               2.59
               4.72
               5.88
               2.04
               0.00
               18.50 ±46.77 5.45 0.3]
               0.07
               0.15±0.0635.88 3.53 0.08
               0.08
               1.81
               0.10±0.00
                3.54
                1.62
                1.87
               9.62 0.64
               8.87
               33.18 0.15
               33.52 0.21
               9.22
               15.67± 0.24
               34.60 0.50
               33.83 0.44
               8.96
               8.50
               8.55
               15.48 0.30
               9.88 1.06
               54.47 0.28
               Machos1.01 8.57 0.24
               18.37 0.14
               18.65 0.03
               887.00 0.54
               8.80
               19.25 0.33
               8.34
               5.54
               55.10 0.34
               17.83 0.19
               53.53 0.51
               54.15 0.38
               18.62 0.32
               16.60 0.53
               18.42 0.16
               7.83
               7.58
               18.03 0.21
               8.28
               34.38 0.85
               17.13 0.48
               8.23± 0.54
               17.30 0.76
               8.47
               Hembras
                Hembras
               48.30 0.88
               3.12 0.07
               55.43 0.27
               0.00 0.08
               0.]4
               52.63 0.04
               18.92 0.03
               9.32 0.44
               5.89
               0.17
               0.12
               0.15
               0.03
               3.77
               0.10
               6.91
                0.04±0.01
               34.43 1.06
               33.95 0.91
               8.85
               7.40 0.24
               16.75 0.59
               8.20 0.72
               7.93
               8.72
               8.62
               8.40
               1802±0.17
               6.75      0.43
                         1.09
                         1.17
                         1.52
                868.33 0.27
                         27.94 7.43EDF 0.85
               46.95± ±0.0224.27 770.17±±0.22
               3.39 ±O.II17.52 15.73±0.20Satélite
               Macho±1.43 18.42±O.194
               52.87 0.06
               O.1]±O.OI16.13 18.45 0.0]
               4.27 0.28
               739.50 0.50
               33.57 0.30
               33.74±0.1750.89 0.07 0.00
               17.92±0.]851.76 0.00 0.12
               17.60 0.41
               18.88 0.20
               9.36 0.22
               2.35 0.25
               19.I2 0.12
               6.67± 0.16
               17.03 0.1438.43 1.75 0.85
               8.75±0.111.08
                843.00 0.56
                 783.17 0.35
               16.62 0.03
               Machos1.03 55.93 ± 0.14
               18.52 0.77
               52.10 0.13
               18.10 0.34
               32.95 0.39
               34.20 0.10
               5.15 0.17
               7.68 0.13
               5.49
                8.37
               Hembras36.13 47.68 Satélite
                         0.32
                         0.26      EDF 0.20 2
                                   Grupo 30.27
                                   Grupo 3  6
                                     Control5
                                         Grupo 1




°Los datos se expresan como Media ± desviación del error medio (n =6) para cada grupo y género. Las diferencias entre tratamientos así como entre tratamientos y grupo
control no fueron significativas.
bRBC, Glóbulos rojos; MCV, Volumen corpuscular medio; MCH, Hemoglobina corpuscular media; MCHC, Concentración de hemoglobina corpuscular media; RDW,
lndice de distribución de glóbulos rojos; WBC, Glóbulos blancos; MPV, volumen plaquetario medio.
Tabla 3. Parámetros de Química Clínica en ratas tras la administración oral diaria de 2000 mg/Kg (en peso vivo) durante 4 semanas de
grasa láctea standard (SOF) y grasa láctea enriquecida naturalmente (EOF) en ácidos vacénico, ruménico y a-linolénicoB Los grupos
- -- --'Iites± 6.66
       190.00
       <2
                corresDonden a ratas a las Que se mantuvo tras el crimer Deríodo de 4 semanas.14 días más sin administración de crasa al
     43.17±JA523.24 EDFControl± ±0.14
     16533±±0.13Control Satélite <20.09
     25.7017±4.08
     38233 ±0.50
     24.77 0.58
     25.68 ±1.89
     397.83 0.94
     28.10 1.19
     23.43 1.54
     164.50 2.28
     25.67 6.56
      42.88 0.70
      357.00 2.19
      24.50 1.05
      22.50 3.07
      74.33 1.65
      74.00 0.83
      23.33 IA5
      2205
      19AO
    177.50±11.12
    133.17(ii)***1
     44.3317±8.09
     37.83 0.22
     41.17±2A618.02 Grupo222.00 ±0.12
     <2
     6833 0.18
     73.33 0.06
     108.83 0.03
     103.17±3.53
     98.00±2.806.89
     113.67±3.06.66
     123.
     26A7 4A8
     10.75 4.03
     25.38 0.05
     43.00 1A3
     38.00 OA7
     256.83 2.23
     39.50 0.54
     68.00 0.22
     78.17 0.29
     73.00 030
     157.67 3.81
     142.67 1.02
     106.83±3.63
     88.83±L6210Al
     107.
     39.07 2.52
     164.33 3.99
     166.83 6.22
     J96.00±3.56
     20.80 2A9
     24.12 4.99
     21.23 0.55
      46.68 0.65
      53.63 0.72
      3933
      14.72 1.67
      80.00 JA8
      15.50 4.07
      167.33 0.21
      41.83 0.25
      454.17± 0.29
      <2
      75.83 2.77
      61.67± 1.02
      88.67±2.265.24
      24.63 1.51
      10.58 1.25
      127.83 3.41
      182.67 10.62
      25A8
      23.88
      21.17±03320.35
      16533 4.56
       101.00 7.03
       (ii)*** 1338
(i)**6.83 17±0.70
    15LOO±IL64
    163.00 ±±±1.84
     33433 ±0.10
     0.65 ± ±2.86
     6.92 0.27
     219.67±24A9
     44.50 0.06
     4.18 0.05
     3.60 0.09
     448.50 0.02
     41.96 0.08
     6AO 0.21
     6.70 0.03
     7.42 o.3.31
     373
     (i)** 0.24
     632
     43.82 0.16
     15AO 0.33
     26233 0.35
     39.17± 0.23
     51.33 0.25
     94.00±2.8516.23
     144.67±L05
     144.83±L01
     142. 0.02
     14433±1.28
     15.05 0.04
     146.50±0.96
     3.95 0.09
     3.55 0.07
     47.50 ±3.93
     66.67 0.08
     6.22
     49.70 031
     24.97 0.12
     O.17± 2.80
     0.23
     4.22
     0.57
     Hembras9.65
     6.65
     10.39 0.69
     0.17±0.021.05
     0.27
     0.25
     10.96 0.10
     10.82 1.31
     0.58
     10.58 0.51
     43.50 4.76
     8.17
     34.67± 0.95
     1437
     15.08 0.77
     7.65
     41.17±1.568
     4578
     43.08 2.57
     14.23 239
     7.52
     7.28
     6A5
     15.67 1.23
     141.50±2.25
     1537
     144.00±1.77
     4.25
     94.83±3.136.73
     5.98
     144.33±0.95
     7J2±0.171.08
     4.03
     161.83 0.78
     10.81 4.52
     0.63
     Machos1.58
     10A5
     0.65
     0.67
      4433
      53.75 1.55
      15.92 1.12
      3783
      46.50 2.55
      6.67
      143.67±OA2
      143.00±L48
      6A8
      8.17±0.1621.56
      3.63
      6.60
      0.22
      3.72
      10.85±0.18
      10A6±0.18
      0.23
      48.55 10.55
      170.50 ]13.55
      155.83 28.60
      3.78     1235
      148.67 93111.63
                11.17
       140.00 29.99
       139.17 20.22
               836
                25A5
    130.83 ± 10.67 Grupo Satélite0.61
     Machos2.60
      Hembras         SDFSatélite± 0.02
      23.27
     146.50±0.67
      635±0.271.64
      15.55
       1.06
       (i)*    20.66
                14.68       26.53 ±±0.06
                            140.67 0.84
                            45.67 0.85
                            43.17 4.66
                            77.83 2.27
                             52.10 OA8
                             143.67±1.28
                             10.53 830
                             14J2
                             030
                             7.93
                             4.03
                             0.68    14.83
                                     830
                            131.17±4A1
                            117.50±8.04
                            5
                            6
                            4
                            325A5
                             27.02
                           Grupo 1   1.56
Fibrinógeno (rng/dl)

             a Los datos se expresan como Media ± desviación del error medio (n =6) para cada grupo y género
             (i) Diferencias significativas respecto al grupo control, * P<O.05; ** P<O.Ol; *** P<O.OOl
             (ii) Diferencias significativas respecto a la grasa SDF, *** P<O.OOl
             b ASAT, aspartato   amino transferasa; ALA T, alanina amino transferasa

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  • 1. INFORME Mejora de la calidad nutricional de la grasa de leche caprina, mediante la suplementación de la dieta del animal con el suplemento alimenticio LODYN MILK. PRUEBA TOXICOLOGICA. Empresa : LODYN SL. Juan Carlos Rodríguez, A. García. Colaboradores: CSIC. Instituto de Ciencia, Tecnología de a Alimentos y Nutrición. Facultad Veterinaria Universidad Complutense Madrid. Investigador : Arturo Anadon. Miguel Ángel de la Fuente. (CSIC). 1
  • 2. EXPERIENCIA LECHE DE CABRA Para el desarrollo del presente estudio se contó con la participación de una granja de ganadería caprina de raza Murciana sita en el Municipio de Malagón (Ciudad Real). El rebaño de esta granja se dividió en dos grupos. El primero se alimentó con una dieta normal, a base de forraje (alfalfa, heno, ensilado) y pienso comercial; mientras que en el segundo grupo de animales se suplementó la ración previamente balanceada con el suplemento LODYN MILK (el tipo de forraje en ambas raciones fue igual). A los tres meses desde el comienzo de la alimentación con ambas dietas o raciones, se recogió leche de gran mezcla de los dos grupos de animales y se extrajo, mediante desnatado a gran escala en la Escuela Universitaria de Ingenieros Técnicos Agrícolas de Madrid, grasa de cada una de ellos. Mediante distintas técnicas cromatográficas (ver Anexo 1) se determinó detalladamente el perfil de ácidos grasos de ambas muestras (Tabla 1). TABLA 1. Perfil de ácidos graos (g/lOOg de ésteres metílicos totales) de grasa de leche de cabras alimentadas con una dieta normal (leche estándar) y grasa de leche de cabras suplementadas con el suplemento LODYN MILK (leche LODYN MILK). SFA: ácidos grasos saturados; MUFA: ácidos grasos monoinsaturados; PUF A: ácidos grasos poliinsaturados; CLA: ácido linoléico conjugado. TABLA 1 GRASA LACTEA 2,82 0,05 0,02 2,69 0,03 0,56 0,12 0,21 5,81 2,47 7,26 2,76 MILK 0,02 0,01 0,07 3,34 0,04 3,15 2,85 0,64 0,17 7,83 3,69 9,73 0,27 LECHE LODYN ÁN DAR C4:0 2
  • 3. ~- - m C16:0 ¡so 0,34 11 0,39 0,24 0,26 0,02 24,1 0,93 21,2 0,19 53,96 0,01 0,04 16,68 0,03 0,05 0,13 0,08 0,15 0,41 0,18 0,07 0,12 0,06 0,42 0,1 0,46 0,33 0,03 0,45 23,59 0,21 13,13 0,28 0,08 0,27 70,35 0,09 0,02 20,16 0,01 17,64 0,05 0,14 0,162 0,3 0,13 0,49 0,07 0,03 0,12 0,04 0,061 0,031 0,051 MUFA C16:1 C20:1 C18:1 +C16:1 iso trans-5 C12:0 C10:1 0,051 3
  • 4. trans-13 C16:1 5,1 0,72 0,74 0,56 1,5 0,017 0,045 0,01 0,04 0,003 0,024 0,108 0,006 1,915 0,013 1,538 0,03 4,37 0,001 0,02 0,09 0,04 0,07 1,3 0,003 2,1 0,07 0,4 0,26 13,55 0,01 0,11 0,22 0,58 0,005 0,109 0,28 1,69 0,78 1,03 0,32 0,02 0,42 0,49 0,28 0,01 0,4 1,5 0,03 0,06 0,14 0,36 5,25 0,1 0,006 0,004 0,001 0,003 0,424 0,002 2,81 0,07 2,08 0,08 0,77 0,29 0,005 0,525 0,011 0,55 0,09 0,02 0,21 0,03O PUFA C18:3 cis) trans-13 trans-11 trans-15C 18: 3 cis-6cis-9cis-12 4
  • 5. C20A n-6 0,14 0,05 C22:2 n-6 0,01 0,02 C20:5 n-3 0,02 0,07 C22:5 n-3 0,05 0,09 C22:6 n-3 0,05 0,05 SUMA n-6 2,3 1,41 SUMA n-3 0,35 1,59 n-6/n-3 6,55 0,89 SUMA Otros PUF A 0,57 12 La grasa de la leche estándar tenía una composición similar a una grasa de leche de cabra convencional con un contenido en ácidos grasos saturados (SFA) del 70%. En comparación, la grasa de la leche de animales suplementados con el suplemento LODYN MILK contenía un 55% de SFA. El contenido de trans-ll C 18:1 (ácido vacénico) y cis-9 trans-ll C18:2 (ácido ruménico, RA) se multiplicó por más de tres mientras que el porcentaje de ácido alfa-linolénico lo hizo por más de 5. Además la concentración de ácido oleico en leche derivada del uso del suplemento LODYN MILK se incrementó en más de una 15%. Desde el punto de vista nutricional la leche procedente de animales alimentados con dietas suplementadas con LODYN MILK, tenía potencialmente un perfil más saludable. El Índice de Aterogenicidad fue la mitad y la relación omega6/omega3 siete veces más baja que la de una leche estándar. EVALUCACION TOXICOLOGICA La evaluación toxicológica de estas dos grasas se desarrolló en la Facultad de Veterinaria de la Universidad Complutense de Madrid, empleando 72 ratas de experimentación distribuidas en tres tratamientos. En dicho ensayo, y durante un periodo de veintiocho días, se compararon los efectos de la administración diaria de 2000 mg/kg (de peso vivo) de ambas muestras de grasa sobre distintos parámetros clínicos y de anatomía patológica. Se estableció además relación con un tercer grupo de ratas (control) a las que no se administró grasa alguna durante los 28 días del periodo experimental. Seguimiento de Grupos de ratas satélites: Consistió en 3 grupos de ratas sometidos a idénticos tratamientos a los descritos anteriormente durante idéntico periodo. Al final de los 28 días, los animales no se sacrificaron y aquellos (estándar y leche LODYN MILK) a los que se administraba grasa 5
  • 6. se les privo de la misma. Estos animales fueron sacrificados 14 días más tarde llevándose a cabo una evaluación de todos los parámetros a los que se hace referencia en las tablas 2, 3 Y 4. Los resultados del estudio toxicológico pueden resumirse de la siguiente manera: 1) Mortalidad V Apariencia General. No se produjo mortalidad animal durante ninguno de los tres tratamientos ensayados. Tampoco se observaron cambios en la condición general y en la apariencia externa de los machos y hembras de rata con ninguna de las dos grasas administradas. El desarrollo vital de los animales durante el período experimental correspondió en todos los casos al característico de su edad y espeCie. 2) Peso corporal v consumo de alimento. No hubo diferencias significativas en el peso corporal ni ganancia del mismo entre los grupos de animales tratados. El consumo de alimento y agua fue similar en ratas Control, ratas con grasa estándar y ratas con grasa LODYN MILK. 3) Anatomía Patolóeica. La necropsia llevada a cabo el día 29 después de la administración de la última dosis de grasa láctea no reveló cambios patológicos o ninguna diferencia entre tratamientos ni en el peso de los distintos órganos, ni en la relación peso corporaVpeso del órgano (tabla 4). Después de cuatro semanas tampoco se observaron modificaciones histopatológicas en ninguno de los órganos examinados. 4) PatoloeÍa Clínica. Todos los datos hematológicos estuvieron dentro de los intervalos normales, no observándose diferencias entre grupos (tabla 2). La mayoría de los datos de Química Clínica (tabla 3) mostraron ausencia de alteraciones al final del período del estudio y fueron similares para los tres tratamientos. Es de destacar, que tanto el contenido de colesterol total como de sus fracciones (HDL y LDL) no se vio afectado por la administración de ninguna de las dos grasas lácteas. Las concentraciones de triglicéridos en plasma si fueron sin embargo estadística mente distintas para los tres tratamientos. El contenido más 6
  • 7. alto se detectó en el grupo de leche estándar, seguido de Control y finalmente del grupo de leche LODYN MILK. Este comportamiento fue idéntico para machos que para hembras. Estos resultados denotarían que la 2rasa rica en VA. RA v alfa-Iinolénico procedente de la leche LODYN MILK. tendría un potencial antitrildicerodémico del que carecería la 2rasa láctea estándar. Estas diferencias entre tratamientos no fueron observadas durante el se2uimiento de 2rupos de rata satélite lo que indicaría que son dependientes de la administración de 2rasa de leche LODYN MILK. 7
  • 8. Tabla 2. Parámetros hematológicos en ratas tras la administración oral diaria de 2000 mg/Kg (en peso vivo) durante 4 semanas de grasa láctea standard (SOF) y grasa láctea enriquecida naturalmente (EOF) en ácidos vacénico, ruménico y a-linolénico a. Los grupos satélites corresponden a ratas a las que se mantuvo tras el primer período de 4 semanas, 14 días más sin administración de grasa alguna. 895.00±0.00 ControlSDFSatélite 2.62 ±0.]935.37 32.97 ± 0.01 49.6] ±±0.31 46.07 0.71 15.83 0.01 15.52 0.55 44.92 0.02 50.80 0.08 48.28 0.00 16.28 0.23 18.27 0.31 47.65 0.64 52.67 0.80 15.85 0.40 46.10 0.28 48.20 0.37 18.43 0.41 5.37± 0.99 930.83 0.96 762.67±±±0.23 900.83±±0.28 8.48 0.00 10.02 0.68 53.23 0.20 18.32 ±0.27 761.33 0.09 0.08 0.19 0.10 0.67 0.03 0.15 0.07 0.37 6.78 0.18 19.58 0.05 2.90 007 2.81 0.01 54.92 0.48 50.43 0.16 16.77 0.13 0.06 0.11 951.83 0.57 2.47 2.59 4.72 5.88 2.04 0.00 18.50 ±46.77 5.45 0.3] 0.07 0.15±0.0635.88 3.53 0.08 0.08 1.81 0.10±0.00 3.54 1.62 1.87 9.62 0.64 8.87 33.18 0.15 33.52 0.21 9.22 15.67± 0.24 34.60 0.50 33.83 0.44 8.96 8.50 8.55 15.48 0.30 9.88 1.06 54.47 0.28 Machos1.01 8.57 0.24 18.37 0.14 18.65 0.03 887.00 0.54 8.80 19.25 0.33 8.34 5.54 55.10 0.34 17.83 0.19 53.53 0.51 54.15 0.38 18.62 0.32 16.60 0.53 18.42 0.16 7.83 7.58 18.03 0.21 8.28 34.38 0.85 17.13 0.48 8.23± 0.54 17.30 0.76 8.47 Hembras Hembras 48.30 0.88 3.12 0.07 55.43 0.27 0.00 0.08 0.]4 52.63 0.04 18.92 0.03 9.32 0.44 5.89 0.17 0.12 0.15 0.03 3.77 0.10 6.91 0.04±0.01 34.43 1.06 33.95 0.91 8.85 7.40 0.24 16.75 0.59 8.20 0.72 7.93 8.72 8.62 8.40 1802±0.17 6.75 0.43 1.09 1.17 1.52 868.33 0.27 27.94 7.43EDF 0.85 46.95± ±0.0224.27 770.17±±0.22 3.39 ±O.II17.52 15.73±0.20Satélite Macho±1.43 18.42±O.194 52.87 0.06 O.1]±O.OI16.13 18.45 0.0] 4.27 0.28 739.50 0.50 33.57 0.30 33.74±0.1750.89 0.07 0.00 17.92±0.]851.76 0.00 0.12 17.60 0.41 18.88 0.20 9.36 0.22 2.35 0.25 19.I2 0.12 6.67± 0.16 17.03 0.1438.43 1.75 0.85 8.75±0.111.08 843.00 0.56 783.17 0.35 16.62 0.03 Machos1.03 55.93 ± 0.14 18.52 0.77 52.10 0.13 18.10 0.34 32.95 0.39 34.20 0.10 5.15 0.17 7.68 0.13 5.49 8.37 Hembras36.13 47.68 Satélite 0.32 0.26 EDF 0.20 2 Grupo 30.27 Grupo 3 6 Control5 Grupo 1 °Los datos se expresan como Media ± desviación del error medio (n =6) para cada grupo y género. Las diferencias entre tratamientos así como entre tratamientos y grupo control no fueron significativas. bRBC, Glóbulos rojos; MCV, Volumen corpuscular medio; MCH, Hemoglobina corpuscular media; MCHC, Concentración de hemoglobina corpuscular media; RDW, lndice de distribución de glóbulos rojos; WBC, Glóbulos blancos; MPV, volumen plaquetario medio.
  • 9. Tabla 3. Parámetros de Química Clínica en ratas tras la administración oral diaria de 2000 mg/Kg (en peso vivo) durante 4 semanas de grasa láctea standard (SOF) y grasa láctea enriquecida naturalmente (EOF) en ácidos vacénico, ruménico y a-linolénicoB Los grupos - -- --'Iites± 6.66 190.00 <2 corresDonden a ratas a las Que se mantuvo tras el crimer Deríodo de 4 semanas.14 días más sin administración de crasa al 43.17±JA523.24 EDFControl± ±0.14 16533±±0.13Control Satélite <20.09 25.7017±4.08 38233 ±0.50 24.77 0.58 25.68 ±1.89 397.83 0.94 28.10 1.19 23.43 1.54 164.50 2.28 25.67 6.56 42.88 0.70 357.00 2.19 24.50 1.05 22.50 3.07 74.33 1.65 74.00 0.83 23.33 IA5 2205 19AO 177.50±11.12 133.17(ii)***1 44.3317±8.09 37.83 0.22 41.17±2A618.02 Grupo222.00 ±0.12 <2 6833 0.18 73.33 0.06 108.83 0.03 103.17±3.53 98.00±2.806.89 113.67±3.06.66 123. 26A7 4A8 10.75 4.03 25.38 0.05 43.00 1A3 38.00 OA7 256.83 2.23 39.50 0.54 68.00 0.22 78.17 0.29 73.00 030 157.67 3.81 142.67 1.02 106.83±3.63 88.83±L6210Al 107. 39.07 2.52 164.33 3.99 166.83 6.22 J96.00±3.56 20.80 2A9 24.12 4.99 21.23 0.55 46.68 0.65 53.63 0.72 3933 14.72 1.67 80.00 JA8 15.50 4.07 167.33 0.21 41.83 0.25 454.17± 0.29 <2 75.83 2.77 61.67± 1.02 88.67±2.265.24 24.63 1.51 10.58 1.25 127.83 3.41 182.67 10.62 25A8 23.88 21.17±03320.35 16533 4.56 101.00 7.03 (ii)*** 1338 (i)**6.83 17±0.70 15LOO±IL64 163.00 ±±±1.84 33433 ±0.10 0.65 ± ±2.86 6.92 0.27 219.67±24A9 44.50 0.06 4.18 0.05 3.60 0.09 448.50 0.02 41.96 0.08 6AO 0.21 6.70 0.03 7.42 o.3.31 373 (i)** 0.24 632 43.82 0.16 15AO 0.33 26233 0.35 39.17± 0.23 51.33 0.25 94.00±2.8516.23 144.67±L05 144.83±L01 142. 0.02 14433±1.28 15.05 0.04 146.50±0.96 3.95 0.09 3.55 0.07 47.50 ±3.93 66.67 0.08 6.22 49.70 031 24.97 0.12 O.17± 2.80 0.23 4.22 0.57 Hembras9.65 6.65 10.39 0.69 0.17±0.021.05 0.27 0.25 10.96 0.10 10.82 1.31 0.58 10.58 0.51 43.50 4.76 8.17 34.67± 0.95 1437 15.08 0.77 7.65 41.17±1.568 4578 43.08 2.57 14.23 239 7.52 7.28 6A5 15.67 1.23 141.50±2.25 1537 144.00±1.77 4.25 94.83±3.136.73 5.98 144.33±0.95 7J2±0.171.08 4.03 161.83 0.78 10.81 4.52 0.63 Machos1.58 10A5 0.65 0.67 4433 53.75 1.55 15.92 1.12 3783 46.50 2.55 6.67 143.67±OA2 143.00±L48 6A8 8.17±0.1621.56 3.63 6.60 0.22 3.72 10.85±0.18 10A6±0.18 0.23 48.55 10.55 170.50 ]13.55 155.83 28.60 3.78 1235 148.67 93111.63 11.17 140.00 29.99 139.17 20.22 836 25A5 130.83 ± 10.67 Grupo Satélite0.61 Machos2.60 Hembras SDFSatélite± 0.02 23.27 146.50±0.67 635±0.271.64 15.55 1.06 (i)* 20.66 14.68 26.53 ±±0.06 140.67 0.84 45.67 0.85 43.17 4.66 77.83 2.27 52.10 OA8 143.67±1.28 10.53 830 14J2 030 7.93 4.03 0.68 14.83 830 131.17±4A1 117.50±8.04 5 6 4 325A5 27.02 Grupo 1 1.56
  • 10. Fibrinógeno (rng/dl) a Los datos se expresan como Media ± desviación del error medio (n =6) para cada grupo y género (i) Diferencias significativas respecto al grupo control, * P<O.05; ** P<O.Ol; *** P<O.OOl (ii) Diferencias significativas respecto a la grasa SDF, *** P<O.OOl b ASAT, aspartato amino transferasa; ALA T, alanina amino transferasa