Este documento describe la aplicación de luminol para detectar manchas de sangre en escenas del crimen. Explica que el luminol produce una reacción quimioluminiscente azul cuando se expone a la hemoglobina de la sangre, lo que permite localizar manchas de sangre incluso cuando son antiguas o han sido limpiadas. También proporciona detalles sobre la preparación de la solución de luminol y los pasos para aplicarla de manera segura en una escena del crimen.

1. Aplicación de luminol en huellas de escena del crimen William Ivan Alejandro LLANOS TORRICO Julio de 2.010

2. El lugar de los hechos La fase más importante en la investigación Es irrepetible Han de localizarse todos los indicios para su posterior envío al laboratorio. Si los indicios no se detectan, no se preservan, no se embalan adecuadamente, no llegará a haber identificación criminalística .

3. Situaciones características en el Lugar de Hechos Siempre es posible que se hayan producido mezclas, contaminaciones o pérdida de indicios. Los indicios son frágiles y pudieron haberse manipulado. Los indicios pueden pasar inadvertidos. Los indicios pueden sufrir alteraciones en sus características

4. Tipos de indicios

5. Sangre: Sustancia viscosa, roja y espesa, presente en el sistema circulatorio (arterias, arteriolas, capilares y venas), constituidas por una parte líquida o plasma y una parte de elementos celulares (hematíes, leucocitos y plaquetas).

6. “ Podemos asegurar que con respecto al ser humano, existen numerosas diferencias sanguíneas individuales que ya han sido puestas de manifiesto, e indudablemente todavía existen otras que aún no han sido establecidas”. Karl Landsteiner Disertación Nobel, 1930. “ Cada nuevo individuo es único en su información genética, de aquí el término de individualidad biológica. En cualquier parte del organismo siempre se encuentra el mismo material genético, propio de cada individuo y diferente de cualquier otro, excepto en el caso de gemelos monocigotos”. Zannoni – Primarrosa 1.999 . Identificación del individuo de quien procede

7. Entre sus funciones se tienen: Trasportar el oxígeno y eliminar el anhídrido carbónico. Promover las defensas del organismo frente a las infecciones. Termorregulación. Regulación osmótica. Nutrición celular. Sangre:

8. Volemia: Volumen normal de sangre de una persona. Cálculo: 6 – 8 % del peso corporal. 13 / 14 parte del peso corporal. M – 10%. Sangre:

9. Composición Fracción Líquida Fracción Sólida (Elementos Celulares) Agua – 90% Sólidos – 10% Proteínas. Lípidos. Glúcidos. Sales Minerales. Enzimas. Glóbulos Rojos. Glóbulos Blancos. Plaquetas. Sangre:

10. Elementos Celulares Glóbulos Rojos (Hematíes o Eritrocitos): Anucleados, bicóncavos, circulares. 7 – 7,5 m diámetro. 2 – 3 m espesor. 85 M volumen. 5.000.000 x mm 3 H. 4.500.000 x mm 3 H. Sangre:

11. Elementos Celulares Glóbulos Blancos (Leucocitos): Nucleados. 6.500 – 7.00 mm 3 . Granulocitos E: 1,5% parásitos. Granulocitos B: 0,5% respuestas alérgicas. Linfocitos: 26% detectan y atacan células cancerosas. Monocitos: 6% devoran células muertas o dañadas (Macrófagos). Sangre:

12. Hemoglobina: Estructura: Cromoproteína PM 64.500 – 96% Globina – 4% Hemo Globina: Fracción proteica constituida por cuatro cadenas polipeptídicas. Hemo: Núcleo porfirínico formado por cuatro grupos pirroles unidos por puentes de meteno (=C) que constituyen anillos tetrapirrólicos. 16 Isómeros – Nº 9 presente en elementos biológicos. Un átomo de hierro está ligado a los cuatro nitrógenos en el centro del anillo. 1 Molécula de Hemo = 4 Grupos Hemo.

13. Examen visual preliminar: Aspecto. Color. Forma. Número. Dimensiones. Ubicación. Importancia Criminalística: Data de los hechos. Intensidad de las lesiones. Reconstrucción de los hechos. Admitir o refutar alegatos. Identificación de sujetos. Sangre:

14. Color: Ropa blanca y soportes claros y absorbentes: Contornos muy nítidos por penetrar la sangre en los tejidos. Reciente: Roja. Antigua: Morena o parda y aún negruzca. Una vez seca: diminutas masas, ligeramente elevadas como pequeñas escamas brillantes, más o menos resquebrajadas según condiciones ambientales.

15. Forma: Manchas de proyección. Manchas por escurrimiento. Manchas por contacto. Manchas por impregnación. Manchas por limpiamiento. Manchas por arrastre.

16. Importancia: Reconstrucción de los hechos. Intensidad de las lesiones. Admitir o refutar alegatos.

17. Naturaleza sanguínea. Determinación de especie. Identificación del individuo. Data de la mancha de sangre. Cantidad de sangre que compone la mancha. Región del cuerpo de donde procede la sangre. Sexo genético de la persona de quien procede la sangre. Grupo etario. Agentes extraños a su naturaleza (medicamentos, drogas ilícitas, agentes patógenos). Problemas forenses que plantea una muestra de sangre:

18. Naturaleza Sanguínea: Métodos de Orientación: ¿Es Sangre? TÉCNICA INDICADOR SEÑAL SENSIBILIDAD Adler Bencidina Azul Intenso 1 / 200.000 O - Tolidina Orto – Tolidina Azul Verdoso 1 / 200.000 Medinger Verde de Malaquita (leuco derivado) Verde 1 / 1.000.000 K – Meyer Fenolftaleína Rojo 1 / 1.000.000 Luminol Hidracida del Ácido Alfa Amino ftálico Quimioluminiscencia blanco azulada 1 / 5.000.000

19. Métodos De Certeza: Histológicos. Biológicos. Físicos (Cromatográficos – Instrumental). Microquímicos.

20. Microquímicos Teichmann -> Cristales de Clorhidrato de Hematina. Métodos de Certeza: Takayama -> Cristales de Hemocromógeno. Guarino -> Cristales de Hematoporfirina (Ácida – Alcalina).

21. Métodos Determinación de Especie: Uhlenhutt : Proteínas Séricas (Halo Isogenético). Hexagon Obti – Test (Banda Azul) : Hemoglobina Humana Sub Tipos HbAo, HbA 2 , Hb F y Hb S. Histológicos Bioquímicos ADN

22. Sistemas tendentes a la determinación de la identidad biológica: Sistemas Eritrocitarios: ABO: A; B; AB; O; y Sub Grupos. Rh: D; d; C; c; Cc; E; e; Ee. MNS: M; N; MN. Otros sistemas: Kell; Lewis; Kidd; Diego; P; otros.

23. Sistema ABO: Antecedentes Antígenos A Aglutinógenos B α -> Alfa – Anti A β -> Beta – Anti B Anticuerpos Test de Landsteiner Incompatibilidad Sanguínea

24. LA PRUEBA DE LUMINOL Fe

25. LUMINOL El Luminol químicamente denominado como: 3 aminophtalahidrazida (5-amino-2, 3-dihidro-phthalazino-1,4-diona) fue sintetizada por Smicthz en el año de 1902, comprobando a la vez, que esta sustancia produce una brillante quimioluminiscencia (producción de luz por reacción química: Una fuerte luz fluorescente azul en soluciones ácidas con pH menor de 7).

26. Posteriormente, en el año de 1927 otro investigador de apellido Lommel , observó dicha quimioluminiscencia después de la oxidación del compuesto en medio alcalino (Soluciones con pH mayores de 7). En 1934 el investigador Albrecht denominó a este compuesto LUMINOL , por las propiedades quimioluminiscentes que presentaba. Además descubre que la reacción quimioluminiscente se da en presencia del peróxido de hidrógeno. En 1936 Gleu y Pfannstiel descubrieron que el Luminol presentaba luminiscencia en presencia de sangre . Esto es debido a la capacidad peroxidásica de la hemoglobina .

27. Posteriormente, en el año de 1927 otro investigador de apellido Lommel , observó dicha quimioluminiscencia después de la oxidación del compuesto en medio alcalino (Soluciones con pH mayores de 7). En 1934 el investigador Albrecht denominó a este compuesto LUMINOL , por las propiedades quimioluminiscentes que presentaba. Además descubre que la reacción quimioluminiscente se da en presencia del peróxido de hidrógeno. En 1936 Gleu y Pfannstiel descubrieron que el Luminol presentaba luminiscencia en presencia de sangre . Esto es debido a la capacidad peroxidásica de la hemoglobina .

28. En el año de 1937 se reportó la primera aplicación forense del Luminol, como prueba presuntiva de detección de sangre, dicho ensayo fue realizado por Walter Specht. Este investigador roció sangre en varios substratos como paredes, gradas, piedras, y tierra dejándola expuesta por 14 días a las condiciones ambientales. Seguidamente aplicó el Luminol y fotografió los resultados. Todas las áreas que contenían manchas de sangre presentaron luminiscencia que perduró por 15 minutos. En esta ocasión el Luminol funcionó bien con manchas de sangre frescas y viejas; se observó mayor respuesta quimioluminiscente en las manchas de sangre viejas, que en las manchas frescas o nuevas.

29. En el año de 1939, los investigadores Moody y Proescher , basándose en la investigación de Specht , aplicaron el Luminol, en papel, tela y piezas de hierro que contenían manchas de sangre de tres años de antigüedad, obteniendo resultados satisfactorios. En 1942, McGrath , recomendó el uso de la prueba de Luminol , para la detección de sangre, él notó que las manchas de sangre viejas, daban respuestas más fuertes y prolongas, debido a que en estas, hay una mayor concentración de metahemoglobina y hemática.

30. Los investigadores Lytle y Hedgecock , en el año de 1978 estudiaron los efectos del Luminol en solución alcalina, en la sangre detectada por la prueba, concluyendo que no afectaba la actividad enzimática de los eritrocitos, pero no reportan los efectos del reactivo en la determinación de grupo ABO en las manchas, ni análisis de marcadores genéticos ( ADN) . La prueba de Luminol es extremadamente sensible en la detección de sangre. En 1986 Thornton y colaboradores detectaron luminiscencia, a simple vista, proveniente de sangre que fue diluida 1:10000 partes .

31. En el año de 1939, los investigadores Moody y Proescher , basándose en la investigación de Specht , aplicaron el Luminol, en papel, tela y piezas de hierro que contenían manchas de sangre de tres años de antigüedad, obteniendo resultados satisfactorios. En 1942, McGrath , recomendó el uso de la prueba de Luminol , para la detección de sangre, él notó que las manchas de sangre viejas, daban respuestas más fuertes y prolongas, debido a que en estas, hay una mayor concentración de metahemoglobina y hemática.

32. La prueba del Luminol emplea: el Carbonato de Sodio para crear una solución alcalina de pH 10.4-10.8, Perborato de Sodio como agente oxidante, y el Luminol como la sustancia a ser oxidada con la subsecuente emisión de luz. La sangre es el sistema peroxidasa que cataliza la reacción . Fundamento teórico de la prueba de luminol

33. 1. Carbonato de Sodio 2. Perborato de Sodio Trihidratado 3. Luminol (5-amino-2,3-dihydrophthalazine 1,4-dione) Reactivos utilizados para la prueba de luminol

34. 1. Pesar 3,5 gramos de Perborato de Sodio en una balanza analítica. Depositar la medida en un beaker de 1.000 ml de volumen. 2. Pesar 25 gramos de Carbonato de Sodio y 0,5 gramos de Luminol en una balanza analítica y colocarlos juntos en un recipiente limpio. 3. Medir un volumen de agua destilada de 500 ml con una probeta de 1.000 ml de capacidad. Preparación del reactivo

35. 4. Agregar los 500 ml de agua destilada al beaker con los 3,5 gramos de Perborato de Sodio . 5. Agitar hasta disolver por completo. 6. Agregar a esta solución la medida de Carbonato de Sodio y Luminol . 7. Agitar hasta disolver por completo. 8. Verter la solución disuelta en el atomizador. Preparación del reactivo

36. Antes de la aplicación del reactivo el personal debe vestir prendas que lo protejan del contacto directo con el Luminol . Es imprescindible la utilización de mascarillas que impidan la inhalación del atomizado. Se debe procurar una completa oscuridad para la aplicación del reactivo. Aplicar el reactivo por aspersión, en las zonas del escenario en donde se sospecha la presencia de sangre. Cómo se aplica la prueba

37. En un lapso no menor de 10 segundos debe aparecer una reacción lumínica que evidencia la actividad peroxidasa que posee la sangre entre otras sustancias. Después de localizar los diferentes focos lumínicos se procede a evaluar la naturaleza de estos. De sospechar que los focos lumínicos se deben a la presencia de sangre (manchas de color y aspecto característico), se debe delimitar el área de reacción positiva con cinta adhesiva o con un marcador a base de agua, esto con el objetivo de facilitar el levantamiento de muestra y el registro fotográfico. Cómo se aplica la prueba

39. Procurar en la medida de lo posible no entrar en contacto directo con la sustancia. Es necesario asegurarse de que todo el personal presente este debidamente protegido. La vida media del Luminol ya preparado, es de 8 horas, por lo que debe tenerse la precaución de no exceder este tiempo en su aplicación. La prueba de Luminol es presuntiva para detectar la presencia de sangre, esto significa que requiere de otras técnicas como la determinación de especie para afirmar la presencia de sangre. Cuidados que se deben tener al aplicar la prueba

40. Esta sustancia no es corrosiva y no mancha Se ha observado que no tiene efectos destructivos e inhibitorios sobre la sangre, permitiendo la realización de análisis posteriores de ABO y ADN . Una desventaja de esta técnica es que por ser basada en la actividad peroxidasa y esta estar presente en muchas sustancias tales como ciertos metales, jugo de fruta, detergentes y productos de limpieza en general, es común obtener reacciones inespecíficas. Cuidados que se deben tener al aplicar la prueba

41. Antes de la aplicación de la prueba se debe realizar un ensayo previo con controles positivos, falsos positivos y negativos, para evaluar la efectividad del reactivo. El reactivo de Luminol muestra una alta sensibilidad ante la presencia de sangre, se observan reacciones positivas en muestras diluidas, hasta diez mil veces y capaz de detectar manchas de 25 años de antigüedad. Cuidados que se deben tener al aplicar la prueba

42. Varios estudios han demostrado que el luminol provoca la pérdida de diversos marcadores genéticos. Debido a que el luminol es hidrosoluble, también puede diluir una muestra ya diluída. Esto coloca al indicio por debajo de los límites de detección .

43. La fotografía en la Prueba del Luminol es de suma importancia para la investigación criminalística, ya que ella muestra toda la labor realizada por el equipo de aplicación, como a la vez permitirá al juzgador en el proceso del debate, como se manifestaron las manchas de sangre, su dinámica, arrastre, etc. Fotografía de la prueba luminol

44. Fijar fotográficamente escenarios reactivados con Luminol, depende de varios factores: ISO de la película Tiempo de exposición Duración de la luminiscencia del químico Intensidad de la luminiscencia Tomas en total oscuridad Para obtener imágenes positivas de la escena se deben de controlar varios factores, sujetos algunos a variaciones como el tiempo de exposición, espacio y luz. Fotografía de la prueba luminol

45. Comparación con reactivos para pruebas de campo de sangre - Fluoresceina - Bluestar - Luminol

46. Pruebas comparativas

47. Sangre lavada y repintada FLUORESCEINA BLUESTAR Tiempo de exposición: 20 s LUMINOL Tiempo de exposición: 1 m 15 s

48. Sangre lavada y limpiada del piso FLUORESCEINA BLUESTAR Tiempo de exposición: 20 s LUMINOL Tiempo de exposición: 1 m 15 s

49. Sangre lavada en alfombra FLUORESCEIN BLUESTAR Tiempo de exposición: 20 s LUMINOL Tiempo de exposición: 1 m 15 s

50. Sangre lavada con detergente para ropa FLUORESCEINA BLUESTAR Tiempo de exposición: 20 s LUMINOL Tiempo de exposición: 1 m 15 s

51. Gracias