Presencacion de review de regenarción en grillo

1. Regeneración en grillo
Isaac Martínez Ugalde

2. Introducción
• Únicamente se da en ninfas instar 3
• Es un proceso regulado a muchos niveles
• Cascadas de transducción de señales
• Postranscripcional
• Epigenético
• Avances en … regeneración de SN y extremidades
Instar 1-6

3. • La amputación de extremidades es muy
común
• Se requiere la formación de de blastema
• Los mecanismos de formación de blastema
son poco claros en grillo
• La formación del blastema inicia a las 24 hrs
• MUCHAS moléculas implicadas
Ohuchi et al., 2015
Gryllus bimaculatus

4. RNA-seq (Tetsuya et al., 2013)
• Una visión global de la formación del blastama en
G.bimaculatus
• Se evalúa la expresión génica durante la formación del
blastema en la parte distal
• Evaluación de niveles de expresión
• Ontología de genes
• qPCR
• RNAi

5. • 55,043 UT (261 bp) ensambladas entre extremidades
regeneradas y sanas (velvet y oases)
• 466 únicos de extremidades regeneradas
• 11,492 con niveles de expresión mas altos
• Blast2Go para ontología
• 2724 transcritos únicamente dieron hit en BlastX por
tamaño y falta de datos genómicos de G. bimaculatus
Pediculus humorous y Tribolium castaneum

6. • De los 2724, 2344 fueron anotados con
terminología Go
• Principales términos :
• Transducción de señales
• Interacción P-P
• Receptores
• Factor de transcripción
• También se encontraron sobre expresados
genes de apoptosis MMPs, piwi y AGO3
• Wg/Wnt, Hh/Shh, JAK/STAT, EGF, Dpp/TGF,
VEGF, Insulina/IGF, Notch, Toll

7. Evaluación de niveles de expresión
• ¿JAK/STAT es esencial para la formación del blastema?

8. • Se valido la funcionalidad de esta vía de señalización con RNAi
• Gb’dome Gb’hop y Gb’Stat
• Los experimentos se hicieron en instar 3 y se observaron los siguientes
estadios

9. • Gb’Stat y Gb’dome están asociados a la formación
del blastema
• Gb’hop esta asociado al crecimiento de las
extremidades
• Por el efecto fenotípico del RNAi se enfocan en STAT
• Correlacionan los niveles de ciclina E con
prolifreación duarnte la formación temprana de
blastema
• Con RNAi Gb’Stat disminuyen los niveles de
expresión de ciclina E
Gb’Stat regula la prolifreación

10. Regulación negativa de JAK/STAT

11. Otras moléculas implicadas
• Dachshund y Distal less
• Exd y hth
• Wnt y Hh
Ishimaru et al., 2015

12. Factores epigenéticos
• miRNA’s, piwiRNA, RISC, Histonas
• Muy poco caracterizado en grillo
• El grupo de Tetsuya encontró ncRNA’s pero no hubo mas datos
• Primeros avances con histonas en 2015

13. • La formación del blastema puede darse por
células troncales (neblasto) o por procesos de
transdiferenciación
• En planaria por ejemplo se da por células
troncales
• Su identidad celular esta asociada a la regulación
por HMT de la familia SET/MLL
• En insectos la formación del blastema
transdiferenciación celular
• HMT de la familia Polycomb regulan el proceso
Reddien et al., 2016
Itzhaki 2014

14. Hamada et al., 2015
• Gryllus Enhancer of zeste Gb’E(z)
• Ubiquitously transcribed tetratricopeptide
repeat gene on the X chromosome Gb’Utx
• H3K27
• La metilación se ve disminuida por
Gb’E(z)RNAi
• Gb’UtxRNAi incrementa los niveles de
mtilación
• E(z) y Utx se sobre expresan post
amputación
Tsetuya et al., 2013 reportan
sobreexpresión de estas
moléculas ´post amputación

15. • Gb’E(z) en el dominio SET tiene 96% y
95% de homología con Dm’Ez y EZH2
(dos parálogos en humano y ratón)
• Gb’Utx JmjC tiene 91% y 83% con Utx y
KDM6 (3 parálogos en humano y raton)
• Hibridación in situ para determinar los
patrones de expresión de Gb’Utx y
Gb’E(z)

16. • Uso de RNAi para evaluar efectos
fenotípicos
• Gb’E(z)RNAi induce la formación de un
segmento extra
• Gb’UtxRNA induce defectos en la
formación de articulaciones
del tarso
• Gb’E(z) también esta asociado a la
formación de segmentos

18. • La regulación de los estados de metilación de la H3K27 es esencial para la
regeneración de extremidades