JC .pptx

Introducción
• lactobacilos  la salud humana y
la longevidad.
• Bifidobacterias -- probióticos
• Los efectos antienvejecimiento --
inmunosenescencia
• Efectos antienvejecimiento de
los probióticos,
• Bifidobacterium longum BB68,
aislada de residentes centenario
de Bama, Guangxi6

Caenorhabditis elegans
• Nematodo de vida libre
• Vive en el suelo
• Son de dos sexos:
hermafrodita y machos.
• Hermafrodita: 959 células.
• Macho: 1031 células.
• Los adultos miden 1mm.
• Es transparente.
• Es muy fácil su uso en el
laboratorio.
• Es simple.

Caenorhabditis elegans
• Se alimenta de Microorganismos
• Numero grande de progenie (300-400)
• ciclo de vida de ~ 50 horas (huevo a
huevo; hermafrodita facultativo)
• Producción a gran escala de animales
en un poco tiempo
• Hoy, el C. elegans es usado para
estudiar procesos biológicos como
• la apoptosis,
• señalización celular,
• ciclo celular,
• polaridad celular regulación génica,
• metabolismo,
• envejecimiento y determinación sexual

Vías se señalización en la respuesta al estrés y en la longevidad
• En C. elegans, la señalización de
la proteína quinasa activada por
mitógeno (MAPK) y la
señalización similar a la insulina
(ILS) regulan el proceso de
envejecimiento y la inmunidad
• Conservadas en mamíferos y
nematodos,
• En los mamíferos, las cepas
probióticas mejoran la
inmunidad del huésped al
regular la ruta de señalización
p38/MAPK9, lo que sugiere que
los probióticos pueden afectar la
inmunidad de los nematodos y el
envejecimiento a través de una
ruta homóloga.
Baumeister, R., Schaffitzel, E., y Hertweck, M. (2006). Endocrine signaling in
Caenorhabditis elegans controls stress response and longevity. J Endocrinol, 190(2), 191-
202.

Estudios que describen los
mecanismos a través de
los cuales las LAB afecta el
envejecimiento
las vías de señalización
• DAF-2/DAF-16
• p38 MAPK/SKN-1 y
• JNK-1/DAF-16
• resistencia al estrés
• extensión de vida prolongada,
AAK-2/DAF-16
• longevidad dependiente de la
restricción calórica

METODOS
Cepa Bacterianas
• BB68 de Bifidobacterium longum
strain
• muestras fecales de centenarios
sanos del condado de Bama,
Guangxi, China
• E. coli OP50 (OP50), alimento
estándar para nematodos, se
obtuvo del Caenorhabditis
Genetics Center
Nematodos
• C. elegans Bristol cepa N2,
• eat-2 (ad1116),
• daf-16 (mu86),
• daf-16 (mu86); muIs61,
• daf-2 (e1368),
• pmk-1 (km25),
• jnk-1 (gk7)
• tir-1 (ok1052)

METODOS
• Ensayo de extensión de extensión de vida. L4
cultivados en placas NGM se transfirieron a
placas mNGM con un alambre de platino, se
ensayaron 100 gusanos por cada especie
bacteriana (10 gusanos / placa) a 25 ° C. se
determinó el # de gusanos vivos y cada 24 h.
se utilizo el método de Kaplan-Meier, la
prueba de log-rank (P <0.05).
• Ensayo de alimentación con gradiente
alimentario. Las suspensiones bacterianas
BB68 y OP50 muertas por calor se
extendieron en placas mNGM en
concentraciones en serie que van desde 0,01
a 200 mg de células bacterianas / placa. La
extensión de vida se midió como se describió
anteriormente.
• Mediciones del tamaño corporal, tasa de
bombeo de faringe y reproducción.
• Se examinó el tamaño de los gusanos vivos cada
24 h. Las imágenes de nematodos adultos se
capturaron y el área de proyección de los
gusanos se analizó como el tamaño del cuerpo
utilizando el software ImageJ
• Velocidad de bombeo de la faringe. La frecuencia
de bombeo se registró como el número de
contracciones en el bulbo terminal de la faringe
de un gusano individual en un período de 60 s.
• Ensayo de reproducción. Las crías de cada animal
se contaron en la etapa L2 o L3.
• Determinación de la expresión del gen SOD-
3. se extrajo ARN total de los gusanos de la
etapa L4 y se detectó la expresión del gen
SOD-3 en un sistema de PCR Quantica en
tiempo real (

METODOS
• Ensayo de localización de DAF-16 :: GFP. Gusanos L4 DAF-16
:: GFP se puntuaron para la localización nuclear,
citoplasmática o intermedia de proteína fluorescente (GFP).
Se determinó el número de gusanos con cada nivel de
translocación nuclear. El porcentaje de gusanos que muestran
translocación fluorescente nuclear e intermedia de 100
gusanos se calculó como el % de ubicación nuclear DAF-16.
• Distribución nuclear y citosólica de DAF-16 (transferencia
Western). de los gusanos L4 DAF-16 :: GFP se separaron. las
fracciones nuclear y citosólica, y la proteína DAF-16 se
detectó mediante Western blotting. Lamin B1 y GAPDH se
usaron como marcadores para las fracciones nuclear y
citosólica, respectivamente.
• Ensayo de tinción de inmunofluorescencia. se realizó la
tinción de inmunofluorescencia para JNK-1 fosforilada en
larvas L4. Se obtuvieron imágenes de fluorescencia con un
microscopio invertido.
• Separación de CW y CFE de bacterias. OP50 y BB68 se
cultivaron, y las células se cosecharon por centrifugación a
14,000 × g durante 10 minutos a 4 ° C. Luego, el CW y el CFE
se separaron por sonicación como lo describen Komura et
al.15. El CW y el CFE se secaron por congelación y se
almacenaron a -80 ° C hasta su uso posterior. Para el ensayo
de vida útil, CW y CFE se solubilizaron a 50 mg / ml en
tampón M9 y se añadieron a OP50 matado por calor en un
gradiente de concentración.
• Cincuenta microlitros de la mezcla se extendieron en placas
de mNGM de 35 mm que contenían 3,4 mg de OP50 muerta
por calor y diferentes concentraciones de CW y CFE (0,012
mg, 0,12 mg y 1,2 mg como concentraciones baja, media y
alta, respectivamente). Luego, los ensayos de extensión de
vida se realizaron como se describe anteriormente.
• La concentración media (0,12 mg) de CW o CFE de OP50 se
usó como control en los ensayos de vida útil.

BB68 prolonga la
extensión de vida de
C. elegans
• Los ensayos de supervivencia --
C. elegans N2 alimentados con
BB68 extensión de vida - 28%
• no afectó el bombeo de la
faringe de los nematodos, el
tamaño corporal o la capacidad
reproductiva

BB68 prolonga la
extensión de vida de
C. elegans
• El ensayo de alimentación con gradiente
de concentración bacteriana (0.1–200
mg/placa) y los ensayos de supervivencia
de mutantes eat-2 indicaron que la
extensión de la vida mediada por BB68
fue independiente de la restricción
calórica
• La mayor extensión de la vida de los
nematodos se obtuvo a una
concentración bacteriana de 1.0
mg/placa, independientemente de la
alimentación con OP50 o BB68, lo que
representa una forma de restricción
calórica (CR).
• Eso indicó que 10 mg/placa de BB68
(concentración experimental en este
estudio) no podía inducir CR.

BB68 prolonga la extensión de vida de C. elegans
• el papel de ILS
en la
longevidad del
C. elegans
mediada por
BB68,
• se evaluaron
DAF-16 y DAF-
2
• La
alimentación
de gusanos
con BB68
aumentó la
vida útil de las
cepas N2 y
daf-2, pero no
la cepa daf-16.

La extension de vida de C.
elegans por BB68 depende de
DAF-16
• Con cepa reportera DAF-16-GFP (daf-16
(mu86); muIs61),
• Alimentando gusanos DAF-16 :: GFP con
BB68 durante 24 h activó DAF-16 (las
flechas indican una mayor acumulación
nuclear de DAF-16)
• BB68 aumentó significativamente la
acumulación nuclear de DAF-16 en un 56%
• Se detectaron niveles más bajos de DAF-16
activado en presencia de mutantes jnk-1 o
tir-1.
• El Western blotting mostró una
acumulación nuclear significativa de la
proteína DAF-16 en nematodos
alimentados con BB68 durante 24 h.
• Se observó un aumento en el nivel de
expresión del gen SOD-3 en nemátodos
alimentados con BB68 durante 24 h

La via MAPK esta involucrada
en la regulación mediada por
DAF-16 de la extensión de la
vida inducida por BB68
• se evaluaron JNK y p38. JNK-1 y PMK-1 /
p38, dos miembros de la familia MAPK en
C. elegans que pueden transmitir señales
de estrés ambiental a DAF-16 y regular su
localización nuclear
• BB68 extiende la extensión de vida de
pmk-1 (km25) mutantes, pero no
mutantes jnk-1 (gk7)
• La presencia de mutantes jnk-1 y tir-1
eliminó por completo la extensión de la
vida útil inducida por BB68.
• el dominio TIR de la proteína TIR-1
participa en la cascada de señalización de
longevidad mediada por BB68.
• BB68 no aumentó la extensión de vida de
los gusanos tir-1

La via MAPK esta involucrada
en la regulación mediada por
DAF-16 de la extensión de la
vida inducida por BB68
• JNK-1 activado se observó en el anillo
nervioso de los nematodos tratados con
BB68
• La alimentación de gusanos N2 con BB68
durante 24 h activó JNK-1 por
fosforilación.
• las mutaciones en TIR-1 suspendieron la
activación de JNK-1 y la acumulación
nuclear de DAF-16 inducida por BB68
• la translocación nuclear inducida por
BB68 de DAF-16 se redujo en gusanos con
un gen JNK-1 mutado
• JNK parece estar involucrado en la
regulación mediada por DAF-16 de la
extensión de la vida inducida por BB68

• Además de funcionar en ILS, DAF-16 está corriente abajo de
MAPK. Para identificar el regulador en la ruta MAPK
involucrado en la regulación mediada por DAF-16 inducida
por BB68 de la extensión de la vida útil, se evaluaron JNK y
p38. JNK-1 y PMK-1 / p38, dos miembros de la familia MAPK
en C. elegans, pueden transmitir señales de estrés ambiental
a DAF-16 y regular su localización nuclear12, 13. Nuestros
resultados muestran que BB68 extiende la extensión de vida
de pmk-1 (km25) mutantes, pero no mutantes jnk-1 (gk7)
(Tabla S1; Fig. 1E), y JNK-1 activado se observó en el anillo
nervioso de los nematodos tratados con BB68 (Fig. 2).
Además, la translocación nuclear inducida por BB68 de DAF-
16 se redujo en gusanos con un gen JNK-1 mutado (Fig. 1B;
Tabla S3). Por lo tanto, JNK parece estar involucrado en la
regulación mediada por BB68 de DAF-16. Además,
encontramos que el dominio TIR de la proteína TIR-1
participa en la cascada de señalización de longevidad
mediada por BB68. BB68 no aumentó la extensión de vida de
los gusanos tir-1 (ok1052) (Fig. 1E; Tabla S1), y las mutaciones
en TIR-1 suspendieron la activación de JNK-1 y la
acumulación nuclear de DAF-16 inducida por BB68 (Tabla S3;
Fig. 2) Por lo tanto, concluimos que BB68 regula DAF-16 a
través de la vía de transducción de señales TIR-JNK, una
cascada de señalización de inmunidad innata conservada de
nematodos a mamíferos.
• Para evaluar el componente activo potencial de BB68 en la
longevidad de los nematodos, el componente de la pared
celular (CW) y los extractos sin pared celular (CFE) de BB68 se
separaron y se alimentaron a los nematodos. En comparación
con el CW o CFE de OP50, el CW de BB68 aumentó
significativamente la extensión de vida de C. elegans de una
manera dosis-respuesta (P <0.05); sin embargo, los CFE de
BB68 no ejerció un efecto similar (Fig. 3). Por lo tanto, estos
resultados indican que los componentes de la pared celular
de BB68 contribuyen a sus efectos sobre la longevidad en los
nematodos.

Los componentes de la pared celular de BB68
contribuyen a sus efectos sobre la longevidad en los
nematodos
• el componente de la
pared celular (CW) y los
extractos sin pared
celular (CFE) de BB68 se
separaron y se
alimentaron a los
nematodos
• En comparación con el
CW o CFE de OP50, el
CW de BB68 aumentó
significativamente la
extensión de vida de C.
elegans de una manera
dosis-respuesta
• los CFE de BB68 no
ejerció un efecto similar

Conclusión
• la cepa BB68 de Bifidobacterium
longum prolonga la extensión de
vida de C. elegans al regular la
actividad de DAF-16, que
participa en una cascada de
señalización inmune conservada
• Se activa la vía de señalización
TIR-1 - JNK-1 - DAF-16

Figura 3.
La pared celular es el principal componente efectivo de BB68 en la longevidad de los
nematodos. (A) La alimentación de gusanos con la pared celular (CW) de BB68 (0,12 mg
y 1,2 mg por placa) aumentó significativamente la vida útil de los nematodos en
relación con la alimentación de OP50 CW (0,12 mg por placa). (B) La alimentación de
extractos sin pared celular (CFE) de gusanos de BB68 no afectó la vida útil de los
nematodos en relación con la vida útil de los nematodos alimentados con OP50 CFE.

Tabla 1.
Resumen del efecto de los
probióticos en la longevidad
de C. elegans.
CEPA MECANISMO REFERENCIA
Lactobacillus
gasseri
SBT2055
Aumento de la supervivencia media en un
37%; mayor bombeo faríngeo; resistencia
mejorada contra el estrés oxidativo
intrínseco
NSY-1 – SEK-1 – PMK-1 activado;
upregulated la expresión de SKN-1
y sus genes objetivo
Nakagawa, H. et al. Effects and
mechanisms of prolongevity induced by
Lactobacillus gasseri SBT2055 in
Caenorhabditis elegans. Aging Cell 15,
227–236 (2016).
Weissella
koreensis
KACC 11853
Weissella
cibaria
KACC 11845
Mayor longevidad; bombeo faríngeo
reducido
JNK-1-DAF-16 activado relacionado
con la respuesta al estrés; AAK-2-
DAF-16 activado relacionado con la
restricción dietética
Lee, J., Kwon, G. & Lim, Y. H. Elucidating
the mechanism of Weissella-dependent
lifespan extension in Caenorhabditis
elegans. Sci. Rep. 5, 17128 (2015).
Lactobacillus
salivarius
FDB89
Extendió la vida media en un 11,9%;
capacidad reproductiva reducida, tasa de
bombeo faríngeo y crecimiento; aumento
de la actividad de reducción de SOD y XTT
Dependencia de la restricción
alimentaria (eat-2 y ensayo de
alimentación con gradiente )
Zhao, Y. et al. Lactobacillus salivarius
strain FDB89 induced longevity in
Caenorhabditis elegans by dietary
restriction. J. Microbiol. 51, 183–188
(2013).
Bifidobacteri
um infantis
ATCC15697
Mayor longevidad de una manera
dependiente de la dosis; Mayor
resistencia al estrés oxidativo y al calor.
PMK-1-SKN-1 activado para regular
la desintoxicación de fase 2; DAF-2
participa en la regulación SKN-1; la
pared celular bacteriana es un
constituyente efectivo importante
Komura, T., Ikeda, T., Yasui, C., Saeki, S. &
Nishikawa, Y. Mechanism underlying
prolongevity induced by bifidobacteria in
Caenorhabditis elegans. Biogerontology
14, 73–87 (2013).

Figura 1.
Bifidobacterium longum BB68 extiende la vida
útil de C. elegans regulando la señalización TIR-
1 - JNK-1 - DAF-16. (A) La alimentación de
gusanos con BB68 aumentó la vida útil de las
cepas N2 y daf-2, pero no la cepa daf-16. (B)
Alimentando gusanos DAF-16 :: GFP con BB68
durante 24 h activó DAF-16 (las flechas indican
una mayor acumulación nuclear de DAF-16), y
se detectaron niveles más bajos de DAF-16
activado en presencia de mutantes jnk-1 o tir-1.
(C) La transferencia Western mostró una
acumulación nuclear significativa de la proteína
DAF-16 en nematodos alimentados con BB68
durante 24 h. Lamin B1 se usó como referencia
nuclear, y GAPDH se usó como referencia
citosólica. (D) Se observó un aumento en el
nivel de expresión del gen SOD-3 en nemátodos
alimentados con BB68 durante 24 h. ** Indica
una diferencia significativa (prueba T de
Student, p <0.01). La prueba se realizó por
triplicado. (E) La presencia de mutantes jnk-1 y
tir-1 eliminó por completo la extensión de la
vida útil inducida por BB68. Barra de escala =
50 μm.

Figura 4.
Mecanismo por el cual BB68
afecta la longevidad de C. elegans.
BB68 aumentó la longevidad de
los nematodos al activar la vía de
señalización TIR-1 - JNK-1 - DAF-
16, y el componente de la pared
celular de BB68 contribuyó a la
longevidad. La flecha sólida indica
la activación observada en este
estudio. Una línea discontinua con
una "X" indica que no se observó
ningún efecto en este estudio.
Una línea discontinua indica que
la prueba no se realizó en este
estudio. Una "P" indica un sitio de
fosforilación. * Indica fosforilación
directa o indirecta.

Table S3. Changes of DAF-16
nuclear location treated with
BB68.
• * La diferencia entre los tratamientos con las dos cepas se comparó con la
prueba ANOVA con Duncan's como posthoc (P < 0.01).
• ** Solo se calcularon cambios significativos (P<0.01).
Genotipo
Localización nuclear de DAF-16
(n) %
valor p**
Porcentaje
de
cambios**
Ensayos
Alimentado
con OP50
Alimentado
con BB68
daf-16 (mu86);
muIs61
42.4 ± 6.9 (198) 66.5 ± 11.4 (157) < 0.001 56% 3
jnk-1 (gk7); daf-16
(mu86); muIs61
51.3 ± 15.2 (124) 46.8 ± 8.7 (156) 0.532 - 3
tir-1 (ok1052); daf-
16 (mu86); muIs61
48.2 ± 9.5 (181) 50.5 ± 13.5 (210) 0.361 - 3

BB68.
Genotipo
(n) %
valor p**
Porcentaje
de
cambios**
Ensayos
Alimentado
con OP50
Alimentado
con BB68
jnk-1 (gk7); daf-16
(mu86); muIs61
51.3 ± 15.2 (124) 46.8 ± 8.7 (156) 0.532 - 3
tir-1 (ok1052); daf-
16 (mu86); muIs61
48.2 ± 9.5 (181) 50.5 ± 13.5 (210) 0.361 - 3

Figura 2.
La alimentación de gusanos N2
con BB68 durante 24 h activó
JNK-1 por fosforilación. El
anticuerpo fosfo-JNK/SAPK
(Thr183/Tyr185) y la IgG anti-
ratón de cabra marcada con
Cy3 (H + L) se usaron como
anticuerpos primarios y
secundarios, respectivamente.
El círculo discontinuo indica
JNK-1 fosforilado en el anillo
nervioso, pero no se detectó
JNK-1 activado en presencia de
mutante tir-1.

BB68.
Genotipo
(n) %
valor p**
Porcentaje
de
cambios**
Ensayos
Alimentado
con OP50
Alimentado
con BB68
daf-16 (mu86);
muIs61
42.4 ± 6.9 (198) 66.5 ± 11.4 (157) < 0.001 56% 3

BB68 prolonga la extensión de vida de C.
elegans
• Los ensayos de supervivencia -- C. elegans
N2 alimentados con BB68 extensión de
vida - 28% (Fig. 1A; Tabla S1).
• no afectó el bombeo de la faringe de los
nematodos, el tamaño corporal o la
capacidad reproductiva (Tabla S2).
• El ensayo de alimentación con gradiente
de concentración bacteriana (0.1–200
mg/placa) y los ensayos de supervivencia
de mutantes eat-2 (ad1116) (mutantes
que comen defectuosos con el fenotipo
de restricción calórica) indicaron que la
extensión de la vida mediada por BB68
fue independiente de la restricción
calórica (Tabla S1; Fig. S1).
• el papel de ILS en la longevidad del C.
elegans mediada por BB68,
• se evaluaron DAF-16 y DAF-2,
• Los ensayos de extensión de vida -
mutación de DAF-16 (daf-16 (mu86))
causó que el efecto mediado por BB68 se
perdiera por completo (Fig. 1A; Tabla S1).

Tabla S1. Cambios en la extensión
de vida en C. elegans tratadas con
BB68.
* Se empleo el Análisis de
sobrevivencia de Kaplan-Meier. La
diferencia entre los tratamientos con
las dos cepas se comparó con pruebas
de LogRank (P < 0.05).
** Solo se calcularon cambios
significativos (P <0.05).
N20.01, N20.1, N21, N2100 y N2200
indica que C. elegans N2 se trataron
con 0.01, 0.1, 1, 100 y 200 mg de
bacteria muerta por calor por placa
(diámetro = 60 mm). Los nematodos
en otros grupos experimentales fueron
tratados con 10 bacteria muerta por
calor por placa de mismo diámetro
Genotipo
Extensión de vida media ± SD (n)
(Day)
valor p* Porcentaje
de cambios**
Ensay
os
Alimentado con
OP50
Alimentado con
BB68
N2 16.1 ± 1.9 (704) 20.5 ± 2.4 (616) < 0.001 28% 6
eat-2 (ad1116) 24.3 ± 0.9 (335) 26.3 ± 1.5 (318) 0.006 8% 3
N20.01 15.9 ± 1.0 (196) 17.2 ± 1.1 (199) 0.382 - 2
N20.1 18.0 ± 0.9 (191) 20.6 ± 1.1 (189) 0.006 14% 2
N21 19.7 ± 1.0 (200) 22.1 ± 1.2 (195) 0.004 12% 2
N2100 17.2 ± 1.0 (194) 19.7 ± 1.3 (191) 0.004 15% 2
N2200 18.1 ± 0.9 (196) 19.0 ± 1.1 (190) 0.158 - 2
daf-16 (mu86) 11.5 ± 0.8 (315) 10.6 ± 0.7 (292) 0.004 -8% 3
daf-2 (e1368) 25.8 ± 1.5 (422) 30.0 ± 1.9 (398) < 0.001 16% 4
jnk-1 (gk7) 15.0 ± 1.2 (294) 15.4 ± 1.4 (290) 0.275 - 3
tir-1 (ok1052) 18.8 ± 1.3 (308) 18.5 ± 1.2 (321) 0.401 - 3
pmk-1 (km25) 17.5 ± 1.1 (216) 19.3 ± 1.4 (210) 0.002 11% 2

BB68.
N20.01, N20.1, N21, N2100 y N2200
con 0.01, 0.1, 1, 100 y 200 mg de
Genotipo
(Day)
valor p* Porcentaje
de cambios**
Ensay
os
Alimentado con
OP50
Alimentado con
BB68
jnk-1 (gk7) 15.0 ± 1.2 (294) 15.4 ± 1.4 (290) 0.275 - 3
tir-1 (ok1052) 18.8 ± 1.3 (308) 18.5 ± 1.2 (321) 0.401 - 3
pmk-1 (km25) 17.5 ± 1.1 (216) 19.3 ± 1.4 (210) 0.002 11% 2

BB68.
N20.01, N20.1, N21, N2100 y N2200
con 0.01, 0.1, 1, 100 y 200 mg de
Genotipo
(Day)
valor p* Porcentaje
de cambios**
Ensay
os
Alimentado con
OP50
Alimentado con
BB68
daf-16 (mu86) 11.5 ± 0.8 (315) 10.6 ± 0.7 (292) 0.004 -8% 3
daf-2 (e1368) 25.8 ± 1.5 (422) 30.0 ± 1.9 (398) < 0.001 16% 4

BB68.
N20.01, N20.1, N21, N2100 y N2200
con 0.01, 0.1, 1, 100 y 200 mg de
Genotipo
(Day)
valor p* Porcentaje
de cambios**
Ensay
os
Alimentado con
OP50
Alimentado con
BB68
eat-2 (ad1116) 24.3 ± 0.9 (335) 26.3 ± 1.5 (318) 0.006 8% 3
N20.01 15.9 ± 1.0 (196) 17.2 ± 1.1 (199) 0.382 - 2
N20.1 18.0 ± 0.9 (191) 20.6 ± 1.1 (189) 0.006 14% 2
N21 19.7 ± 1.0 (200) 22.1 ± 1.2 (195) 0.004 12% 2
N2100 17.2 ± 1.0 (194) 19.7 ± 1.3 (191) 0.004 15% 2
N2200 18.1 ± 0.9 (196) 19.0 ± 1.1 (190) 0.158 - 2

BB68.
N20.01, N20.1, N21, N2100 y N2200
con 0.01, 0.1, 1, 100 y 200 mg de
Genotipo
(Day)
valor p* Porcentaje
de cambios**
Ensay
os
Alimentado con
OP50
Alimentado con
BB68
N2 16.1 ± 1.9 (704) 20.5 ± 2.4 (616) < 0.001 28% 6

Figura S1. Ensayo del gradiente de concentración bacterial
de la alimentación con BB68 y OP50.
La alimentación de BB68 aumentó
significativamente la extensión de
la vida de los nematodos bajo un
amplio rango de concentración
bacteriana (0.1 mg/placa a 200
mg/placa). La mayor extensión de
la vida de los nematodos se obtuvo
a una concentración bacteriana de
1.0 mg/placa,
independientemente de la
alimentación con OP50 o BB68, lo
que representa una forma de
restricción calórica (CR). Eso indicó
que 10 mg/placa de BB68
(concentración experimental en
este estudio) no podía inducir CR.
** indica diferencias significativas
entre OP50 y BB68 (pruebas
LogRank, P <0.01).

Tabla S2. Cambios del tamaño
del cuerpo, tamaño de la prole y
tasa de bombeo de nematodos
tratados con BB68.
*La diferencia entre los tratamientos con las dos cepas se comparó
con la prueba ANOVA con Duncan's como posthoc (P < 0.05)
Alimentado con
OP50
Alimentado con
BB68
valor p * Ensayos
Area de Cuerpo
proyectada (n) mm2
0.063 ± 0.005 (45) 0.058 ± 0.005 (45) 0.193 3
Tamaño de la prole
(n)
112.6 ± 56.8 (45) 2. ± 19.1
(45)
0.342 3
Tasa de bombeo
(n) bombeo/min
194.9 ± 21.5 (10) 191.8 ± 54.6
(10)
0.858 5

• Efectos antienvejecimiento de
los probióticos,
• Bifidobacterium longum BB68,
aislada de residentes centenario
de Bama, Guangxi6

• Utilizando el modelo Caenorhabditis elegans (C.
elegans), varios estudios han descrito los
mecanismos a través de los cuales las LAB afecta el
envejecimiento (Tabla 1), incluidos los mecanismos
que implican diferentes vías de señalización de la
longevidad relacionadas con la resistencia al estrés
y la restricción calórica. Se descubrió que las vías
de señalización DAF-2/DAF-16, p38 MAPK/SKN-1 y
JNK-1/DAF-16 contribuyen a la resistencia al estrés,
lo que contribuye a una extensión de vida
prolongada, y AAK-2/DAF-16 podría ser asociado
con la longevidad dependiente de la restricción
calórica (Tabla 1). Dos factores de transcripción
principales, SKN-1 y DAF-16, pueden actuar como
reguladores clave de la longevidad en los gusanos
que responden a varias cepas de LAB. En estudios
previos se identificaron los mecanismos específicos
de especie/cepa a través de los cuales los
probióticos afectan la longevidad de los
nematodos. En particular, se descubrió que el
papel de DAF-16 y su transducción de señales son
inconsistentes en diferentes estudios.

• Este fenómeno indicó que dicha extensión
depende de DAF-16. Usando una cepa reportera
con la fusión DAF-16-GFP (daf-16 (mu86); muIs61),
demostramos que BB68 aumentó
significativamente la acumulación nuclear de DAF-
16 en un 56% (Fig. 1B; Tabla S3) en relación con la
inducida por OP50. La Western blotting también
mostró un aumento de la localización nuclear de la
proteína DAF-16 (Fig. 1C). Estos resultados
sugirieron la regulación positiva de DAF-16 en
respuesta al tratamiento con BB68. Para confirmar
el papel de DAF-16 en la longevidad inducida por
BB68, se determinó con qPCR11 el nivel de
expresión génica de SOD-3, uno de los genes diana
específicos de DAF-16. Se observó un aumento
significativo en la expresión de SOD-3 (2,27 veces
en comparación con la expresión de SOD-3 en
gusanos alimentados con OP50) en gusanos
alimentados con BB68 durante 24 h (Fig. 1D). Por
lo tanto, concluimos que DAF-16 es esencial para la
prolongación de la vida mediada por BB68.
• DAF-2 es un homólogo del receptor de insulina
humana corriente arriba de DAF-16 en ILS, y las
mutaciones en DAF-2 disminuyen las extensiones
en la extensión de vida y la resistencia a los
patógenos al activar la translocación nuclear de
DAF-168, 10. Nuestros resultados muestran que
alimentar con BB68 a los gusanos prolongan aún
más la extensión de la vida de los mutantes daf-2
(e1368) (Fig. 1A; Tabla S1), lo que indica que la
regulación mediada por BB68 de DAF-16 es
independiente de DAF-2.

• Los ensayos
de
supervivenci
a -- C.
elegans N2
alimentados
con BB68
extensión
de vida - 28%
• no afectó el
bombeo de
la faringe de
los
nematodos,
el tamaño
corporal o la
capacidad
reproductiva

• El ensayo de
alimentación con
gradiente de
concentración bacteriana
(0.1–200 mg/placa) y los
ensayos de supervivencia
de mutantes eat-2
indicaron que la
extensión de la vida
mediada por BB68 fue
independiente de la
restricción calórica
• La mayor extensión de la
vida de los nematodos se
obtuvo a una
concentración bacteriana
de 1.0 mg/placa,
independientemente de
la alimentación con OP50
o BB68, lo que
representa una forma de
restricción calórica (CR).
• Eso indicó que 10
mg/placa de BB68
(concentración
experimental en este
estudio) no podía inducir
CR.

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