Explicación de cromatografía

1. CROMATOGRAFIA EN PAPEL
Es muy usado para análisis cualitativos.
No es muy potente pero no requiere grandes equipamientos.
La fase estacionaria es una tira de papel de filtro.
La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de la
disolución y
evaporando el disolvente.

2. COMPORTAMIENTO
CROMATOGRAFICO
Ka: Conocer el valor de Ka de un ácido débil, bien sea de los analitos o de las sustancias a utilizar como tampones, es fundamental. En el primer
caso, el Ka del analito y el pH de la fase móvil condicionarán el grado de ionización del analito y, en función de éste, la retención
cromatográfica en la columna. En el segundo caso, el valor de pKa del tampón condiciona el intervalo de pH en el cual el tampón desarrolla
correctamente su función reguladora
Ph: puede afectar la forma del pico así como el tiempo de retención de la molécula porque afecta el estado de ionización de la molécula y, por lo
tanto, la química de las moléculas. interacciones en la columna de HPLC. Por lo tanto, es importante mantener el pH correcto para el compuesto
que puede verse afectado por el cambio de pH de la fase móvil y el tampón
Temperatura: En cuanto al tiempo de retención, a medida que aumenta la temperatura de la columna, el tiempo de retención disminuye. Esto
se debe a que cuanto mayor es la temperatura de la columna, más rápido se intercambian los analitos entre la fase estacionaria de la columna y
la fase móvil.

3. CROMATOGRAFÍA DE
CAPA FINA
La cromatografía de capa fina (TLC, por sus
siglas en inglés) es una técnica de separación
en la que se utiliza una placa recubierta con
una capa fina de un material adsorbente, por lo
general sílice o alúmina.
La TLC es una técnica muy útil para separar y
analizar componentes de muestras de
compuestos orgánicos, así como para
determinar la pureza de los mismos. Además,
es relativamente fácil de realizar

5. CROMATOGRAFIA DE PERMEACION EN GEL
• EXCLUSIÓN
• SOLIDO-LIQUIDO
En partículas que tienen diferentes tamaños o poros con el fin de que las moléculas de soluto sean
retenidas o excluidas en su:
• Forma.
• Tamaño.
• Y NO en el peso molecular.

6. Método de separación
CROMATOGRAFIA DE PERMEACION EN GEL
MAYOR tamaño
2.Son arrastrados
en la fase
estacionaria
3.Excluidas
4.Extrae volumen
en fase móvil
1.No caben
dentro de los
poros
MENOR
tamaño
1.Extraen
hasta el final
Tamaño
INTERMEDIO
1.Tardan
diferentes
tiempos

7. CROMATOGRAFIA DE PERMEACION EN GEL
• Clasificación de geles
Según su
NATURALEZA
INORGANICOS Y
ORGANICOS
FLEXIVILIDAD
INCHABLES
RIGIDOS
MICROESTRUCTURA
AROEGELES
XEROGELES

8. CROMATOGRAFIA DE PERMEACION DE
EXCLUSIÓN DE IONES
Es una variante de la cromatografía de permeacion en gel o
cromatografía de exclusión.
Separación
DEPENDE:
Del tamaño de la
particula de la resina
resinas de
intercambio con
base en
poliestireno de alta
capacidad.
APLICACIÓN:
-alimentos y bebidas

9. • PROCESO:
involucra la adsorción/desorción de materiales ionicos cargados en la
fase móvil con una fase estacionaria permanentemente cargadas de
signo contrario.
Ejemplo:
resina, H + K+ resina, K+ + H+
CROMATOGRAFIA DE PERMEACION DE
EXCLUSIÓN DE IONES

10. CROMATOGRAFIA DE GASES
• Iniciada a finales de 1952: se ha desarrollado notablemente en
separación, identificación y determinación de compuestos volátiles
(gases y líquidos).
• NOS PERMITE:
Análisis rápido y exacto de gases, vapores, líquidos.
• IDENTIFICAR:
los componentes individuales de las mezclas gaseosas.

11. CROMATOGRAFIA DE GASES
TIPOS:
Gas-Solido
retención de los
analitos de una
fase estacionaria
Gas-Liquido
campos de la
ciencia
y su denominación

12. • VENTEJAS:
Sensible, rápido y sencillo
La muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna
cromatográfica
La elución se produce por el flujo de un fase móvil de un gas inerte
CROMATOGRAFIA DE GASES

13. CROMATOGRAFÍA DE GAS
LIQUIDO
La cromatografía de gas líquido (GLC, por sus siglas en
inglés) es una variante de la GC en la que la fase
estacionaria es un líquido adsorbido en un soporte sólido,
como una resina. En la GLC, la muestra se disuelve en un
solvente compatible con la fase estacionaria líquida y se
inyecta en la columna de separación. El gas inerte arrastra
los componentes de la muestra a través de la columna,
donde se separan en función de su afinidad por la fase
estacionaria líquida. Los componentes separados se
detectan mediante un detector adecuado, como un
detector de ionización de llama o un detector de
espectrometría de masas.

14. CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA
La cromatografía de columna es una técnica de
separación en la que se utiliza una columna
empacada con un material adsorbente, por lo
general sílice o alúmina, para separar y purificar
los componentes de una muestra.
La cromatografía de columna es una técnica
muy útil para purificar compuestos a pequeña y
mediana escala, así como para analizar la
composición de mezclas complejas. Esta técnica
se utiliza ampliamente en la industria química,
farmacéutica y biotecnológica.

15. CROMATOGRAFIA GAS-SOLIDO.
• Adsorción de sustancias
gaseosas sobre superficies
solidas.
• Los coeficientes de
distribución son
generalmente mucho
mayores que en el caso
de la GLC.
• Útil para la separación de especies que no se retienen en columnas de gas-liquido, tales como los componentes del aire,
sulfuro de hidrogeno, disulfuro de carbono, óxidos de nitrógeno, monóxido de carbono, dióxido de carbono y los gases
nobles.

16. • Columnas de relleno.
(Empaquetada.)
• Columnas capilares.
(Tubulares, abierta o capa
porosa.)
• Se fija en las paredes del capilar una delgada
capa de adsorbente.
• Tamices moleculares.
• Polímeros porosos

17. ESPECTROMETRÍA Estudio de la interacción de la radiación
electromagnética con la materia.
Permite el estudio y análisis de diferentes tipos de espectro.
Espectros de absorción
Emisión
Fluorescencia
Resonancia magnética nuclear
Masas, entre otros.

18. ESPECTROFOTOMETRÍA
Se basa en la relación que existe
entre la absorción de luz por parte de
un compuesto y su concentración.
En la cromatografía, se separan los componentes de una
muestra en función de sus diferentes afinidades por el medio
cromatográfico.
Al medir la A o T de la luz en
diferentes longitudes de onda, se
genera un cromatograma que muestra
los picos correspondientes a los
componentes separados.
Utilidades
Cuantificar los
componentes de
interés.
Identificación de un
componente por sus
características
espectroscópicas.
Información de la
concentración de
componentes.
Detección en línea durante el
proceso de cromatografía.
Monitoreo de la elución de
los componentes a medida
que salen de la columna
cromatográfica.

19. La ley solo aplica a soluciones diluidas: al aumentar la [ ] de
una especie absorbente, las moléculas cambian la distribución
de cargas de las moléculas vecinas y la relación entre
absorbancia y concentración deja de ser lineal.
Regla de oro
Debemos quedarnos debajo de un valor de
absorción de 1 al hacer las mediciones.
La absorbancia es inversamente proporcional a lo que se conoce
como transmitancia, de forma logarítmica.
-log 0.6611= 0.1797
Relación lineal entre la absorbancia y la concentración.
Ley de Lambert-Beer:
c: concentración de la solución
I: longitud de la solución (por la
que tiene que pasar la luz)
ε: es la absortividad (específica
para cada compuesto)
Muestra la «absorbancia» (A)
Cálculo: log(lt/lo)
lo: intensidad de la luz incidente
lt: intensidad de la luz que
atraviesa la solución

21. CROMATOGRAFÍA Y TÉCNICAS
ESPECTROSCÓPICAS
ACOPLADAS
Este enfoque permite obtener
información detallada al
identificar y cuantificar con
datos más completos y precisos
sobre los componentes presentes
en una muestra.
Se puede ajustar para proporcionar sensibilidad y
selectividad en la detección de componentes.

22. Especialmente útil en:
La identificación de compuestos
desconocidos
La determinación de estructuras
químicas
La cuantificación precisa de los
componentes.
Áreas de aplicación
Farmacia:
antibióticos,
sedantes esteroides,
analgésicos,
vitaminas, etc.
Alimentos:
edulcorantes,
antioxidantes,
aflatoxinas,
aditivos,
colorantes, etc.
Bioquímica:
aminoácidos,
proteínas, péptidos,
azúcares, lípidos,
nucleótidos, etc.
Productos de la
industria química:
compuestos
aromáticos
condensados,
tensoactivos,
propulsores,
colorantes, etc.
Contaminantes:
fenoles,
pesticidas,
herbicidas, etc.
Química forense:
drogas, venenos,
narcóticos, etc.
Medicina clínica:
metabolitos de
alimentos o
fármacos
(incluyendo
drogas), etc.

23. Cromatografía Liquida de Alta
Resolución HPLC.
• Método físico de separación
basado en la distribución de
los componentes de una
mezcla entre dos fases
inmiscibles: una estacionaria
y otra móvil.
• La fase móvil es un liquido
que fluye a través de una
columna que contiene a la
fase estacionaria.
• Se lleva acabo en una
columna de vidrio.
• Se coloca la muestra por la
parte superior y se hace fluir
la fase móvil a través de la
columna por efecto de la
gravedad.

24. Cromatografía HPLC acoplada a
Espectroscopia de masas MS.
• Muy buena herramienta para la
identificación de compuestos
puros.
• Es necesaria una interfase entre
ambos instrumentos que tiene
como misión eliminar el eluyente
(fase móvil) antes de la
introducción de los analitos en el
espectrómetro.
• Pueden registrarse espectros de
masas a lo largo de toda la
separación cromatografía.

25. Cromatografía HPLC acoplada a
Ultravioleta (UV)
• Se usa cuando los
componentes absorben
radiación como:
compuestos aromáticos,
alquenos, moléculas con
enlaces C-O, C-N; C-S.
• No es destructiva, es
estable en el tiempo y se
afecta poco por la
temperatura.

26. CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA
RESOLUCION HPLC ACOPLADA A
RMN Las condiciones en cromatografía HPLC-RMN de los
experimentos son los mismos
que en la cromatografía convencional, pero el agua se sustituye
por agua deuterada.
La combinación de técnicas de separación cromatográfica con
espectroscopía de RMN
es uno de los más poderosos y los métodos de ahorro de tiempo
para la separación y la
determinación estructural de compuestos desconocidos y mezclas.
Especialmente para la elucidación de la estructura de sustancias
sensibles a la luz y el
oxígeno, por ejemplo ácidos de lúpulo amargo y estereoisómeros
de carotenoídes.

27. GASES MS
Los gases MS, o espectrómetros de masas de gases, son una forma
común de detector en la cromatografía de gases acoplada a
espectrometría de masas (GC-MS). En un espectrómetro de masas, los
iones se generan a partir de moléculas en la fase gaseosa, y luego se
separan y detectan en función de su relación masa/carga (m/z).En la GC-
MS, los componentes separados por cromatografía de gases se
introducen en el espectrómetro de masas, donde se ionizan los
componentes individuales.
Los iones generados se aceleran y separan mediante un campo
eléctrico y un campo magnético, y se detectan en función de su
relación m/z. La cantidad de iones detectados a cada relación m/z
se representa gráficamente en un espectro de masas, que
proporciona información sobre la composición y estructura de los
componentes de la muestra.
.
La espectrometría de masas de gases es una técnica muy
versátil y potente para la identificación y cuantificación de los
componentes de una muestra, y se utiliza comúnmente en
aplicaciones como la identificación de contaminantes en
alimentos y medicamentos, el análisis de metabolitos en
muestras biológicas, y la identificación de compuestos
orgánicos en productos químicos y materiales.

28. CROMATOGRAMAS
Diagrama donde se representan los
resultados de la separación de una mezcla
mediante técnicas cromatográficas.
Obtenido en un medio absorbente, muestra la separación de sustancias de una mezcla formando un
patrón visible, picos o manchas
Detector
Columna que contiene
la fase estacionaria
Residuos
Muestra que
contiene los
compuestos
Bomba
Solvente
(fase móvil)
Cromatograma
Inyector

29. ¿PARA QUÉ SIRVE? Constituye el registro final de todo el proceso,
obteniendo un parámetro de interés analítico.
Es indispensable un análisis óptimo del tiempo, de las
características de los picos o manchas obtenido, el tamaño,
ubicación, color, entre otros aspectos.
Los análisis de los
cromatogramas
requieren en general
el uso de controles o
estándares,
sustancias de
identidad y
concentración
conocida.
La información extraída puede ser de tipo:
CUALITATIVO
Al identificar
sustancias y se
determina su
pureza.
CUANTITATIVO
Determinación del
número de
componentes de la
mezcla y la
concentración del
analito separado.

30. Resultado de graficar la señal
continuamente variante de un
detector contra el tiempo.
En el eje de las ordenadas
se representa el valor
medido de alguna
propiedad física a partir de
la cual se ha detectado la
presencia de una sustancia,
o bien una unidad relativa
que la cuantifica
(igualmente basada en la
medición de alguna
propiedad).
Tiempo de retención en eje de las abscisas
CARACTERÍSTICAS GENERALES

31. Tres locaciones importantes.
1. Punto de inyección
2. Punto muerto
3. Máximo de soluto
Línea base: parte plana en que no se
encuentra soluto eluyendo.
La posición de los picos en el eje del
tiempo puede servir para identificar los
componentes de la muestra
Áreas bajo los picos: medida
cuantitativa de la cantidad de cada
componente.
CARACTERÍSTICAS PRINCIPALES

32. Equivalente a la suma de : tM + tR’
Tiempo Muerto: tiempo que tarda en salir del eluyente.
Tiempo de retención corregido: tiempo efectivo que es
retenido cada eluato.
tR: indica la manera en la que se mide lo que tarda en
abandonar al sistema de separación una de estas sustancias
tomando como referencia su máximo.