bioqumica clinica

1. BIOQUIMICA CLINICA
ESPECIALIZADA
DOCENTE: DINO SANCHEZ VERANO

2. BIOQUÍMICA CLÍNICA
Especialidad que se ocupa del estudio de los
aspectos químicos de la vida humana en la salud y
en la enfermedad (cambios metabólicos).
Aplica métodos químicos y bioquímicos de
laboratorio al diagnóstico, control del
tratamiento, seguimiento, prevención e
investigación de la enfermedad.

4. Se analizan muestras de pacientes (normalmente
sangre o suero, pero también esputo, orina,
heces, etc).

6. La mayoría de los laboratorios de bioquímica
clínica realizan dos tipos distintos de pruebas
diagnósticas (química clínica e inmunoensayos)
utilizando analizadores automatizados.
La mayoría de las pruebas se basan en métodos
colorimétricos o reconocimientos enzimáticos o
de anticuerpos para permitir la detección de una
gran variedad de biomarcadores complejos.

7. MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS
En los métodos espectrofotométricos se
mide la intensidad de luz (energía radiante
o radiación electromagnética) para
determinar la concentración del analito
presente en una muestra.

8. Los métodos espectrofotométricos se dividen
en dos grandes grupos:
1- Espectrofotometría de absorción:
En estos casos se mide la Absorbancia (A) del
analito, esto es la luz absorbida por el analito,
y esta magnitud se relaciona con la
concentración (C).
A ∞ c (la absorbancia es directamente
proporcional a la concentración)

9. 2- Espectrofotometría de emisión:
En este caso se mide la luz emitida por un
analito previamente excitado, la señal
emitida se relaciona con la concentración del
analito.
Señal emisión ∞ C (la emisión es
directamente proporcional a la
concentración)

10. ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN
MOLECULAR UV-VISIBLE
Equipo que se utiliza se denomina:
ESPECTROFOTÓMETRO UV-VISIBLE, es un
instrumento que mide la ABSORBANCIA de una
solución.
Por lo tanto para medir la concentración de un
analito es necesario que el analito (o un producto
de reacción del analito) tenga la propiedad de
absorber radiación electromagnética (luz) en la
región del UV-visible.

11. ESPECTROFOTÓMETRO

12. Partes del Espectrofotómetro:
Fuente de Luz: Lámpara de Tungsteno, que ofrece una luz
intensa y estable
Prisma: Descompone la luz en sus diferentes ondas
Selector: Permite el paso de sólo una onda con una
determinada λ.
Cubeta: Lugar donde se coloca la solución que contenga los
analitos cuyo % T y A va a obtenerse.
Detector: Detecta la lo
Convertidor – Amplificador: Convierte la señal luminosa en
eléctrica y la amplifica.

13. ESPECTROFOTÓMETRO

14. ESPECTROFOTÓMETRO

15. CURVA DE CALIBRACION
Se trata de una curva de referencia construida con
cantidades conocidas de una sustancia, que se
utiliza para determinar la cantidad de esta
sustancia (analito) presente en una muestra
incógnita.
En muchas determinaciones se cumple una
relación proporcional entre la magnitud
o intensidad de color que da una reacción y
la cantidad del reactivo que la provoca.

16. CURVA
DE
CALIBRACION

17. MEDICION DEL ANALITO
• Reactivos
– Deben tener la mayor especificidad posible para un determinado analito.
– Existen básicamente dos tipos:
• Químicos: Moderada o Pobremente específicos, Bajo
costo y Larga duración.
• Enzimáticos: Altamente específicos, Mayor costo y Corta
duración.

18. MEDICION DEL ANALITO
• Soluciones que contienen Analitos
– Muestra Problema:
• Líquido Biológico: Suero, Plasma, Orina, Líquido
Cefalorraquídeo, Líquido Sinovial, Líquido Ascítico, etc.
• Estos líquidos biológicos contienen el analito que se
desea medir (Glucosa, Urea, Creatinina, Acido Úrico,
Bilirrubinas, etc.)
• Contienen varios tipos de analitos, todos de
concentración desconocida.

19. MEDICION DEL ANALITO
• Soluciones que contienen Analitos (CONCENTRADOS)
– Estándar:
• Líquido Comercial
• Contiene un solo analito de concentración conocida

20. MEDICION DEL ANALITO
• Soluciones que contienen Analitos
– Control
• Solución comercial
• Contiene varios analitos de concentración conocida.

21. MEDICION DEL ANALITO
Rvo + MP ABS MP
• Cálculo de la Medición del Analito
– Se hace reaccionar al Reactivo con el St para obtener la ABSST.
Lectura en el Espectrofotómetro
Rvo + St ABS ST
– Se hace reaccionar al Reactivo con la Muestra Problema y la
Mezcla de Reacción se lee en el Espectrofotómetro para obtener
la ABSMP.
Lectura en el Espectrofotómetro

22. MEDICION DEL ANALITO
• Cálculo de la Medición del Analito
– Como de antemano se conoce la concentración del [ St ] se
puede establecer la siguiente proporcionalidad:
ABSST [St]
– Aunque se desconoce la [MP], también se puede establecer
una proporcionalidad análoga:
ABSMP [MP]

23. MEDICION DEL ANALITO
• Cálculo de la Medición del Analito
– Si se relacionan las dos proporcionalidades anteriores, se puede
aplicar una regla de tres simple.
– Se aplica entonces la siguiente fórmula:
[ MP ] = [ St ] ) x ABSMP
ABSST

24. MEDICION DEL ANALITO
• Dado que la [ St ] y la ABSST serán siempre las
mismas para un grupo de muestras (lote), la [ St
]/ABSST será siempre constante y este valor se
conoce como FACTOR.
• Entonces la nueva formula será:
[ MP ] = ABSMP x FACTOR

25. MEDICION DEL ANALITO
• Para comprobar si el FACTOR es correcto, se
hace la medición del Control.
• Como la [ C ] es conocida, el valor hallado por
la fórmula debe coincidir con el rango
para
de la
este. De no ser así el
prueba debe considerarse
establecido
desarrollo
INVALIDO.

26. MEDICION DEL ANALITO
• Procedimiento de Lectura
– Elección de la Longitud de Onda
– Lectura al Vacío (Blanco de Aire)
– Lectura de Agua (Blanco de Agua)
– Lectura del Reactivo (Blanco de Reactivo)
– Lectura del Estándar
– Lectura del Control
– Lectura de las Muestras Problema

27. CALIBRACIÓN
Hay que usar un blanco, y con ese calibrar. Por que si no lo haces
obtendrás lecturas erróneas.
Si la sustancia que estás midiendo está disuelta en algún reactivo
químico, ése reactivo químico será tu blanco.
Por ejemplo si disuelves un polvo (reactivo químico) en metanol, el
metanol será tu blanco. Esto para saber la concentración de dicho
polvo, claro una vez que hayas hecho la curva de concentración.
Aunque generalmente se usa como blanco agua destilada, para
conocer la
absorbancia o transmitancia de un líquido.