2. MÉTODOS ÓPTICOS
El poder de resolución del microscopio de
luz bajo condiciones ideales es de casi la
mitad de la longitud de onda de la luz
utilizada.
La utilidad del microscopio radica en que la
magnificación hace visibles las partículas más
pequeñas alcanzables en el poder de
resolución. En microbiología a menudo
se utilizan varios tipos de microscopios de luz
3. Microscopio de
campo brillante.
El microscopio de campo brillante es el
utilizado más a menudo en los cursos de
microbiología y consiste en dos series de
Lentes (objetivo y ocular) que actúan
en conjunto para la resolución de la
imagen.
4.
5. Microscopio de contraste de fases
El microscopio de contraste de fases se desarrolló para
Mejorar las diferencias de contraste entre las células y el
medio circundante, con lo que se hace posible observar
células vivas sin tinción; con los microscopios de campo
brillante deben utilizarse preparaciones de microorganismos
muertos y teñidos. La microscopia de contraste de fases
toma ventaja del hecho de que la luz pasa a través de
objetos transparentes, como las células, y se fusiona en
diferentes fases dependiendo de las propiedades de
los materiales a través de los cuales pasa.
6. Microscopio de campo oscuro
El microscopio de campo oscuro es el microscopio de luz en
El cual el sistema de iluminación se ha modificado para
Alcanzar la muestra desde un solo lado. Esto se logra a
través del uso de un condensador especial que bloquea la luz
directa y la refleja a través de un espejo ubicado a un
Costado del condensador en un ángulo oblicuo. Esto crea un
“campo oscuro” que crea un contraste contra el borde
luminoso de la muestra y da origen a que los rayos oblicuos
se reflejen desde el borde de la muestra hacia el objetivo del
microscopio.
7. Microscopio de fluorescencia
El microscopio de fluorescencia se utiliza
para visualizar muestras con efecto de
fluorescencia, que tiene la capacidad
De absorber luz de longitud de onda corta
(ultravioleta) y emitir luz con mayor
longitud de onda (luz visible).
8. Microscopio electrónico
El gran poder de resolución de la microscopia
electrónica ha permitido a los científicos observar
estructuras detalladas de células procariotas y
eucariotas.
Hay dos tipos de microscopios electrónicos para uso
general:
el microscopio electrónico de transmisión (TEM,
Transmission electron microscope), que tiene muchas
Características en común con el microscopio de luz y el
microscopio electrónico de barrido (SEM,
scanning electron microscope).
9. Célula Procariota – Pared Celular
A. Capa de peptidoglucanos
El peptidoglucano es un polímero complejo que
consiste, de tres partes: una estructura básica,
Compuesta de moléculas alternadas de N
acetilglucosamina y de ácido N-acetilmurámico
y un grupo idéntico de enlaces peptídicos
Cruzados.
10. El ácido diaminopimélico es un elemento
singular en las paredes celulares
bacterianas; nunca se encuentra en las
paredes celulares de las arqueobacterias o
de células eucariotas; es el precursor
inmediato de la glicina en la biosíntesis
bacteriana de dicho aminoácido.
11. El hecho de que las cadenas de peptidoglucanos tengan
Enlaces cruzados significa que cada capa de peptidoglucanos
Tiene una sola molécula gigante.
En una bacteria grampositiva hay hasta 40 hojas de
peptidoglucanos, lo que constituye hasta 50% del material de
la pared celular; en las bacterias gramnegativas parece
haber sólo una o dos hojas, lo que constituye 5 a 10%
del material de la pared.
La bacteria adquiere su forma, que es característica para
cada especie en particular, por la estructura de su pared
celular.
12. Morfología Bacteriana:
Las bacterias que tienen forma esférica u
ovoide se denominan cocos.
Cuando los cocos se agrupan en cadenas,
se les denomina estreptococos y cuando lo
hacen en racimos, se les llama
estafilococos; también se pueden agrupar
en pares que reciben el nombre de
diplococos. Las bacterias en forma de
bastón reciben el nombre de bacilos.
13. Los bacilos curvados que presentan
espirales se llaman espirilos, rígidos;
algunas bacterias en espiral presentan
formas fácilmente reconocibles, como
las espiroquetas, semejantes a un tornillo
o sacacorchos, flexibles. Las bacterias que
carecen de pared celular tienen gran
plasticidad (micoplasmas) y adoptan una
variedad de formas.
18. Componentes especiales de las paredes
celulares de bacterias grampositivas:
La mayor parte de las paredes celulares de las
bacterias grampositivas contienen cantidades
considerables de ácidos teicoico y teicurónico,
Los cuales pueden constituir hasta 50% del
Peso seco de la pared y 10% del peso seco de
la totalidad de la célula.
20. 1. Ácidos teicoico y teicurónico. El
término ácido teicoico abarca la totalidad
de la pared celular, membrana o polímeros
capsulares que contienen glicerofosfato o
residuos de ribitol fosfato.
Los ácidos teicoicos constituyen la principal
superficie de los antígenos de aquellas
Especies de bacterias grampositivas que los
poseen y su accesibilidad para los
anticuerpos se ha tomado como evidencia
de que se encuentran en la superficie
externa del peptidoglucano.
21.
22. En el neumococo (Streptococcus pneumoniae) los ácidos
Teicoicos portan antígenos determinantes llamados antígeno
Forssman.
En el Streptococcus pyogenes, LTA se asocia con la proteína
M que protruye desde la membrana celular a través de la
Capa De peptidoglucanos.
Las largas moléculas de proteína M junto con LTA forman
microfibrillas que facilitan la unión de S. pyogenes a las
Células animales.
23. Los ácidos teicurónicos son polímeros
similares, pero repiten unidades, lo que
Incluyen carbohidratos ácidos (como
Nacetilmanosurónico o ácido d
glucosurónico) en lugar de ácido fosfórico.
24. 2. Polisacáridos. La hidrólisis de
paredes celulares de bacterias
grampositivas de ciertas especies ha
Permitido la obtención de carbohidratos
neutros como manosa, arabinosa, ramnosa
y glucosamina, así como azúcares ácidos
como el ácido glucurónico y ácido
manurónico.
25. Componentes especiales de las
paredes celulares
de bacterias gramnegativas
Las paredes celulares de bacterias
gramnegativas contienen tres componentes
Que se encuentran fuera de la capa de
peptidoglucanos: lipoproteínas, membrana
externa y Lipopolisacáridos.
27. Membrana externa.
La membrana externa es Diferente desde el
punto de vista químico de todas las demás
Membranas biológicas.
Es una estructura con bicapa cuya hoja
Interna tiene una composición similar a la
de la membrana celular, en tanto que la
Hoja externa contiene constituyentes
diferentes, Lipopolisacáridos.
28. La capacidad de la membrana externa para
Que excluya moléculas hidrófobas es una
Característica poco común Entre las
membranas biológicas y sirve para proteger a
la célula (en el caso de bacterias entéricas) de
Sustancias nocivas, como las sales biliares. Por
su naturaleza lipídica, es de esperarse que la
membrana externa excluya también a
moléculas hidrofílicas.
29. Dicha membrana posee conductos especiales, formados por
Proteínas denominadas porinas, que permiten la difusión pasiva de
Compuestos hidrofílicos de bajo peso molecular como azúcares,
aminoácidos y ciertos iones.
Las moléculas grandes de antibióticos penetran la membrana
externa con relativa lentitud, lo que explica la resistencia
Relativamente elevada a los antibióticos de las bacterias
gramnegativas. La permeabilidad de la membrana externa varía
ampliamente de un género bacteriano a otro; por ejemplo, P.
aeruginosa es extremadamente resistente a los fármacos
antibacterianos y tiene una membrana externa que es 100 veces
menos permeable que la de E. coli.
30. 2. Lipopolisacáridos (LPS). Los LPS de
Las paredes celulares de bacterias
Gramnegativas consisten en un glucolípido
complejo, denominado lípido A, el cual está
unido a un Polisacárido constituido por una
porción central y series terminales de
unidades repetidas.
31. Los LPS que son extremadamente tóxicos
Para los animales se denominan
endotoxinas de bacterias gramnegativas
porque se encuentran firmemente unidas a
la superficie celular y se liberan sólo
cuando las células sufren lisis.
32. No todas las bacterias gramnegativas tienen LPS
en la membrana externa compuesta por números
Variables De unidades repetidas de oligosacáridos;
Los glucolípidos de la membrana externa de las
bacterias que colonizan las
superficies mucosas (p. ej., Neisseria meningitidis,
N. gonorrhoeae, Haemophilus infl uenzae y
Haemophilus ducreyi) poseen glucanos
relativamente cortos, ramificados.
33. 3. Lipoproteínas. Las moléculas poco
comunes de lipoproteínas
Unen la membrana externa con las capas
De peptidoglucanos, Su función es
estabilizar la membrana externa y fijarla a
la capa de peptidoglucano.
34. 4. Espacio periplásmico. El espacio entre
Las Membranas interna y externa, conocido
Como espacio periplásmico contiene la capa
De peptidoglucano y una solución de
proteínas que se comporta como un gel.
35.
36.
37.
38. Pared celular de bacterias acidorresistentes
Algunas bacterias, entre las que sobresale el bacilo
Tuberculoso (M. tuberculosis) y bacterias
relacionadas poseen paredes celulares
que contienen grandes cantidades de ceras, que
Consisten de hidrocarbonos ramificados complejos
(con longitudes de 70 a 90 carbonos) conocidos
como ácidos micólicos.
39. Algunos compuestos también pueden penetrar los dominios
Lipídicos de la pared celular, aunque con gran lentitud.
La estructura hidrófoba confiere a estas bacterias resistencia
A muchos compuestos químicos como detergentes y ácidos
fuertes.
Si se introduce un colorante en estas células por un proceso
De calentamiento breve o el tratamiento con detergentes, no
Puede eliminarse con la aplicación de ácido clorhídrico
diluido, como ocurre con otras bacterias. Dichos
microorganismos se denominan acidorresistentes.
40.
41.
42.
43.
44. Enzimas que atacan la pared celular
El enlace β1→4 de la estructura básica de los
Peptidoglucanos sufre hidrólisis por acción de la enzima
lisozima, que s encuentra en las secreciones animales
(lágrimas, saliva, Secreciones nasales), así como en la
clara del huevo. En Bacterias grampositivas tratadas
con lisozimas en medios de lisis con baja concentración
osmótica, si la fuerza osmótica del Medio de cultivo se
incrementa para equilibrarla con la presión osmótica
interna de la célula.
45. Crecimiento de la pared celular
Para la división celular es necesaria la síntesis de la
Pared celular; sin embargo, la incorporación de nuevo
material de la Pared celular varía con la forma de la
bacteria. Las bacterias en forma de bacilos (p. ej., E.
coli, Bacillus subtilis) tienen dos modos de síntesis de la
pared celular; se introducen nuevos Peptidoglucanos
con un patrón helicoidal, lo que da origen a
la formación de un tabique de división.
46. CAPSULA Y GLUCOCALIZ
Los términos cápsula y capa mucilaginosa con
Frecuencia se utilizan para describir capas de
polisacáridos; también se utiliza el término más
incluyente, glucocáliz que se define como el
material que se encuentra fuera de la célula y que
contiene polisacáridos. Una capa condensada, bien
definida que rodea en forma estrecha a
la célula y que excluye partículas, como la tinta
china, se conoce como cápsula.
47. La cápsula contribuye a la capacidad de
invasión de La bacteria patógena; las células
Encapsuladas Están protegidas de la
fagocitosis a menos que estén cubiertas con
anticuerpos anticapsulares.
El glucocáliz participa en la adherencia
bacteriana a Las superficies en su entorno, lo
que incluye células Hospedadoras vegetales y
animales.
50. Micoplasmas
Los micoplasmas son bacterias que carecen
de pared y que no contienen peptidoglucano.
Los micoplasmas carecen de un sitio de
acción para los fármacos antimicrobianos que
inhiben la síntesis de la pared celular (p. ej.,
penicilinas y cefalosporinas) y por tanto son
resistentes a tales fármacos. Algunos
micoplasmas causantes de neumonía, como
Mycoplasma pneumoniae, contienen
esteroles en su membrana.
51.
52. Flagelos
Son órganos de locomoción para las
Estructuras que los poseen. Se conocen
tres tipos de disposición: monotrico
(flagelo polar único), Lofotrico (múltiples
flagelos polares) y peritrico (flagelos
distribuidos sobre la totalidad
de la célula).
53. Motilidad
Los flagelos bacterianos son rotores
Helicoidales Semirrígidos que imparten
movimiento de Rotación a la célula; esta
rotación funciona por el flujo de protones
dentro de la misma, siguiendo el gradiente
de concentración producido por una bomba
de protones primaria.
54.
55. Pilosidades (fimbrias)
Muchas bacterias gramnegativas poseen
Apéndices Superficiales rígidos denominados
Pilosidades (“pelos L”) o fimbrias (“flecos L”).
Son más cortos y más fi nos que los fl agelos y
Al igual que éstos, se componen por
Subunidades proteínicas estructurales
denominadas pilinas.
56. La virulencia de ciertas bacterias
Patógenas depende de la producción de toxinas y
también de “antígenos de colonización”,
los cuales son pilosidades ordinarias que
proporcionan a las células propiedades de
adherencia. En cepas de E. coli enteropatógena,
las enterotoxinas y los antígenos de colonización
(pilosidades) tienen determinación genética a
través de plásmidos transmisibles.
57. En los estreptococos que son un grupo de
cocos grampositivos, las fimbrias son el
sitio principal para la ubicación del antígeno
de superficie, la proteína M. El ácido
lipoteicoico relacionado con estas fimbrias
es causante de la adherencia de los
estreptococos del grupo A a las células
epiteliales del hospedador.
58. Las pilosidades de diferentes bacterias
son distintas desde el punto de vista
antigénico y desencadenan la formación de
anticuerpos por el hospedador.
59. Algunas bacterias. como N. gonorrhoeae
son capaces de producir pilosidades con
diferentes tipos antigénicos (variación
antigénica) y por tanto pueden adherirse a
las células aun en presencia de anticuerpos
contra su velocidad original.
Al igual que las cápsulas, las pilosidades
inhiben la capacidad fagocítica de los
leucocitos.
60. Endosporas
Miembros de varios géneros bacterianos
Son capaces de formar endosporas. Las dos
Más comunes son bacilos grampositivos:
Los anaerobios obligados del género
Bacillus y los anaerobios obligados del
género Clostridium.
61. La espora es una célula en reposo, muy
resistente a la desecación, al calor y a los
Compuestos químicos; cuando se encuentra
en condiciones nutricionales favorables y se
activa la espora germina para producir
una célula vegetativa.
62. Realiza un cuadro comparativo entre
bacterias gram positivas y negativas.
Explica la tinción de Gram
Cita morfologia de las bacterias.
Define Flagelos, cita tipos.
Que es el espacio periplasmico.
En donde encontramos el acido teicoico y
teicuronico?
63.
64. Tinción acidorresistente
Las bacterias acidorresistentes son aquellas
Que conservan la carbolfucsina (tiroxina
Básica disuelta en una mezcla de
aguaalcohol- fenol) incluso cuando se
decolora con ácido Clorhídrico en alcohol.
65. Las bacterias acidorresistentes
(micobacterias y algunos actinomicetos
relacionados) adquieren un color rojizo en
tanto que otras células adquieren el color
del segundo colorante.
66. Tinción negativa
Este procedimiento consiste en la atención del
entorno con un colorante ácido, dejando a las
células incoloras. El colorante negro
de nigrosina (tinta china) se utiliza a menudo.
Dicho método se emplea para aquellas células
O estructuras difíciles de teñir en forma
directa.
67. Cambios Morfológicos durante la
proliferación:
División celular
La mayor parte de las bacterias se dividen por fisión
binaria en dos células hijas iguales. En un medio de
cultivo de bacilos, como E. coli, las células sufren
elongación y más tarde forman una partición
que finalmente se separa en dos células hijas.
La partición se conoce como tabique y es
consecuencia del crecimiento hacia el interior de la
membrana citoplásmica y la pared celular a partir
de direcciones opuestas hasta que se separan dos
células hijas.
68. Agrupamiento celular:
Si las células permanecen
transitoriamente unidas durante la división,
se originan ciertas agrupaciones
características. Dependiendo del plano de
división y el número de divisiones a través
del cual las células permanecen unidas, pueden
presentarse las siguientes formas durante la
replicación de cocos: cadenas (estreptococos),
pares (diplococos), haces cúbicos (sarcinas) o
Placas planas.
Los bacilos pueden formar pares o cadenas.
69. Clasificación de las bacterias:
La clasificación, nomenclatura e
identificación constituyen tres áreas
distintas pero interrelacionadas de la
Taxonomía bacteriana.
La clasificación se basa en catalogar a
los organismos dentro de grupos
taxonómicos.
70. Nomenclatura
La nomenclatura se refiere al nombre
asignado a un organismo según las reglas
internacionales (establecidas por un grupo
reconocido de profesionales médicos)
según sus características.
71. Identificación:
El término identificación se refiere a la
aplicación práctica de un esquema
de clasificación para: 1) aislar y distinguir a los
Organismos convenientes de los perjudiciales;
2) verificar la autenticidad o propiedades
especiales de un cultivo en un contexto clínico,
y
3) aislar e identificar al organismo causal de
una enfermedad.
72. Las categorías taxonómicas forman la base
para organizar a las bacterias. La taxonomía
linneana o de Linneo es el sistema que mejor
conocen los biólogos.
Utiliza las categorías taxonómicas formales (en
orden) reino, tipo, clase, orden, familia, género
y especie. Las categorías inferiores son
aprobadas por un consenso de expertos en la
comunidad científica.
73.
74. CRITERIOS PARA CLASIFICAR
A LAS BACTERIAS:
Crecimiento en medios de cultivo
Los criterios adecuados para fines de
clasificación bacteriana incluyen muchas de las
propiedades. Una de ellas es el crecimiento en
un medio bacteriológico. A diferencia de los
virus y parásitos, muchas bacterias
patógenas se pueden aislar en un medio que
contiene agar sólido.
75. El cultivo general de la mayor parte de las
bacterias requiere un medio con
abundantes nutrientes metabólicos. Estos
medios por lo general comprenden agar,
una fuente de carbono, y un hidrolizado
ácido o una fuente de material biológico
Sometida a degradación enzimática (p. ej.,
caseína).
76. Los medios pueden ser no selectivos o
selectivos y se utilizan para distinguir
entre diversas bacterias de una muestra
clínica que contiene numerosos
microorganismos.
77. 1. Medios no selectivos
El agar sangre y agar chocolate constituyen
ejemplos de medios complejos no selectivos
Que facilitan el crecimiento de diversas
bacterias. Los medios no selectivos son
Importantes para aislar bacterias desconocidas
en una muestra. Por lo general se observan
muchos tipos de colonias bacterianas
cuando las muestras clínicas se inoculan en un
medio no selectivo.
78. 2. Medios selectivos
En vista de la diversidad de microorganismos que
habitan en algunos sitios (p. ej., el aparato
intestinal), se utilizan medios selectivos para
eliminar (o reducir) el gran número de bacterias
irrelevantes en estas muestras. El fundamento de
los medios selectivos es la incorporación de una
sustancia que inhibe de manera selectiva el
crecimiento de las bacterias irrelevantes.
79. 3. Medios diferenciales
Al cultivarse, algunas bacterias producen
pigmentos característicos y otras se
distinguen con base en su complemento.
80. Condiciones atmosféricas
Aeróbicas. Una vez inoculados, los cultivos de la mayoria de
las bacterias anaerobias se colocan en una incubadora con una
Temperatura constante entre 35 y 37 °C. En ocasiones, se utilizan
Temperaturas ligeramente mayores o menores para favorecer un
Cierto organismo o grupo de organismos en forma selectiva. La
mayoria de las bacterias que no son anaerobias obligadas crecen en
el aire; sin embargo, algunas requieren de CO2 y el mismo
compuesto potencia el crecimiento de otras. Las incubadoras que
mantienen una concentracion de 2 a 5% de CO2 en el aire se
utilizan con frecuencia para el aislamiento primario porque este
nivel no es dañino para ningún tipo de bacteria y mejora el
aislamiento de algunas.
81. Anaeróbicas. Las bacterias estrictamente
anaerobias no crecen bajo las condiciones antes
descritas y muchas mueren al verse expuestas al
oxigeno atmosferico o a altos potenciales de
oxidorreduccion.
La mayoria de los anaerobios de importancia
Medica Crecen en las profundidades de medios
liquidos o semisolidos que contienen cualquier
variedad de agentes reductores, tales como
cisteina, tioglucolato, acido ascorbico o, incluso,
limaduras de hierro.
82. de enzimas extracelulares; la actividad de
estas enzimas se identifica al observar
zonas claras alrededor de las colonias
cultivadas en presencia de sustratos
insolubles (p. ej., zonas de hemólisis en
un agar que contiene eritrocitos).
83. Muchos de los miembros de
Enterobacteriaceae se distinguen por su
Potencial para metabolizar lactosa. Por
ejemplo, las cepas patógenas de Salmonella y
Shigella no fermentan lactosa y en el
agar MacConkey forman colonias
transparentes, mientras que los miembros de
Enterobacteriaceae que fermentan lactosa
(p. ej., E. coli) forman colonias rojas o rosas.
84. Microscopia bacteriana
Las bacterias agrupadas se pueden examinar usando
Muestras teñidas en forma adecuada. Desde el punto de vista
histórico, la tinción de Gram, aunada a la visualización a
través del microscopio óptico, es uno de los métodos más
informativos para clasificar a las eubacterias. Esta técnica de
tinción por lo general constituye el primer paso para dividir
en términos generales a las bacterias con base en una serie
de diferencias fundamentales en la estructura de sus paredes
celulares
85. Pruebas bioquímicas
Algunos exámenes como la prueba de la oxidasa, en la
que se utiliza un aceptor artificial de electrones, se
Emplean para diferenciar a los microorganismos con
base en la presencia o ausencia de una enzima
respiratoria, el citocromo C, cuya ausencia diferencia a
Las Enterobacteriaceae de otros bacilos gramnegativos.
Asimismo, se puede utilizar la actividad de la catalasa,
Por ejemplo, para diferenciar entre los cocos
grampositivos. También se puede utilizar la sensibilidad
antimicrobiana (p. ej., colistina y/o ácido nalidíxico).
86.
87. Pruebas inmunológicas: serotipos,
serogrupos y serovariedades
La designación “sero” simplemente indica el uso de
Anticuerpos (policlonales o monoclonales) que
reaccionan con estructuras específicas de la
superficie celular bacteriana como los
Lipopolisacáridos (LPS), los flagelos o los
antígenos capsulares. Los términos “serotipo”,
“serogrupo” y “serovariedad”, para fi nes
prácticos, son idénticos; todos ellos utilizan la
especificidad de estos anticuerpos para subdividir
a las cepas de una especie bacteriana
88. Inestabilidad genética:
Los avances en la biología molecular permiten ahora
Investigar la relación de genes o genomas comparando
secuencias de diversas bacterias. Para estos casos, la
inestabilidad genética hace que ciertos rasgos sean
muy variables dentro de un grupo biológico o incluso
dentro de un grupo taxonómico.
Por ejemplo, los genes que confieren resistencia
Antimicrobiana o los genes que codifican enzimas
(utilización de lactosa, etc.), se transportan en
plásmidos o bacteriófagos
89. Condiciones atmosféricas
Aeróbicas. Una vez inoculados, los cultivos de la mayoria de
las bacterias anaerobias se colocan en una incubadora con una
Temperatura constante entre 35 y 37 °C. En ocasiones, se utilizan
Temperaturas ligeramente mayores o menores para favorecer un
Cierto organismo o grupo de organismos en forma selectiva. La
mayoria de las bacterias que no son anaerobias obligadas crecen en
el aire; sin embargo, algunas requieren de CO2 y el mismo
compuesto potencia el crecimiento de otras. Las incubadoras que
mantienen una concentracion de 2 a 5% de CO2 en el aire se
utilizan con frecuencia para el aislamiento primario porque este
nivel no es dañino para ningún tipo de bacteria y mejora el
aislamiento de algunas.
90. Anaeróbicas. Las bacterias estrictamente
anaerobias no crecen bajo las condiciones antes
descritas y muchas mueren al verse expuestas al
oxigeno atmosferico o a altos potenciales de
oxidorreduccion.
La mayoria de los anaerobios de importancia
Medica Crecen en las profundidades de medios
liquidos o semisolidos que contienen cualquier
variedad de agentes reductores, tales como
cisteina, tioglucolato, acido ascorbico o, incluso,
limaduras de hierro.