1. Clase 6: Levaduras yClase 6: Levaduras y
AntifúngicosAntifúngicos
Bioq. María de los Angeles SosaBioq. María de los Angeles Sosa
Microbiología GeneralMicrobiología General
20092009
2. Crecimiento inicial a 25-28ºCCrecimiento inicial a 25-28ºC
Crecimiento inicial
a 25-28ºC
Hialino
Hialino,
hifas delgadas
Tabicado
Crecimiento
en cicloheximida
Dematiaceos
Colonias parecidas
a bacterias
Crec. de 2-5 dias
Colonias lisas,
pastosas o
Mucoides
LEVADURAS
5. ““Las candidiasis son micosisLas candidiasis son micosis
producidas por hongos delproducidas por hongos del
génerogénero CandidaCandida ””
La infección puede serLa infección puede ser
aguda o crónica, superficialaguda o crónica, superficial
o profunda, localizada oo profunda, localizada o
diseminadadiseminada
6. La candidiasis es un indicador
de algún desequilibrio,
por ello, ante su manifestación
se debe buscar siempre el
origen o factor predisponente
que la desencadena.
alteraciones en las defensas celularesalteraciones en las defensas celulares
fisiologíafisiología
biota normalbiota normal
desequilibrio
Estos organismos no son patógenos por naturaleza
7. Factores predisponentesFactores predisponentes
FisiológicasFisiológicas: embarazo, vejez, RN, etc.: embarazo, vejez, RN, etc.
EndócrinasEndócrinas:: diabetes, hipotiroidismo, enfermedad de Addison.diabetes, hipotiroidismo, enfermedad de Addison.
Enfermedades hematológicasEnfermedades hematológicas: linfomas, leucemias, agranulocitosis,: linfomas, leucemias, agranulocitosis,
anemia aplásica, inmunodepresión celular, hipogammaglobulinemiaanemia aplásica, inmunodepresión celular, hipogammaglobulinemia
y agammaglobulinemia.y agammaglobulinemia.
IatrogénicasIatrogénicas: corticoides, antibióticos de amplio espectro,: corticoides, antibióticos de amplio espectro,
alimentación parenteral, diálisis reiteradas, cirugías a cielo abierto,alimentación parenteral, diálisis reiteradas, cirugías a cielo abierto,
transplantes renales o cardíacos y operaciones abdominales,transplantes renales o cardíacos y operaciones abdominales,
sondas y catéteres, etc.sondas y catéteres, etc.
OtrosOtros:: drogadicción (IV), quemaduras graves y extensas, infeccionesdrogadicción (IV), quemaduras graves y extensas, infecciones
por HIV y otras enfermedades infecciosas (TBC, fiebre reumática,por HIV y otras enfermedades infecciosas (TBC, fiebre reumática,
endocarditis, meningitis, etc.), insuficiencia renal aguda o crónica,endocarditis, meningitis, etc.), insuficiencia renal aguda o crónica,
neoplasias, etc.neoplasias, etc.
12. Mayor incidencia en RN,
lactantes y pacientes con
inmunodeficiencias.
Muguet bucal
• pH bajo de la boca
• contagio en canal del parto
• chupetes, tetinas, mamaderas mal lavadas
• materiales y manos del personal de unidades maternales
Se presenta como pseudomembranas blancas griseas cremosas,
sobre lengua, paladar blando, mucosa bucal, faringe y esófago.
Candidiasis
mucocutánea
13. Candidiasis sistémicasCandidiasis sistémicas
Hospederos normalesHospederos normales
Sondas y catéteresSondas y catéteres
Colonizan Fungemias transitoriasColonizan Fungemias transitorias
Hemo ++Hemo ++
Hospederos inmunosuprimidosHospederos inmunosuprimidos
Invasión micelial de los órganos y tejidosInvasión micelial de los órganos y tejidos
Formación de trombosFormación de trombos
Mortalidad + de 55%Mortalidad + de 55%
15. DefiniciónDefinición
““La criptococosis es una micosis cosmopolitaLa criptococosis es una micosis cosmopolita
causadas por levaduras encapsuladas de lacausadas por levaduras encapsuladas de la
especieespecie Cryptococcus neoformans var.Cryptococcus neoformans var.
neoformansneoformans””
““LaLa mayoría de las infecciones graves se observanmayoría de las infecciones graves se observan
cuando hay alteraciones importantes de lacuando hay alteraciones importantes de la
inmunidad celular (SIDA, linfomas...)inmunidad celular (SIDA, linfomas...)””
““SuelenSuelen tener un curso subagudo o crónico contener un curso subagudo o crónico con
afectación pulmonar y meníngeaafectación pulmonar y meníngea””
18. LLevaduras encapsuladasevaduras encapsuladas (tinción con tinta o con(tinción con tinta o con
nigrosina) en elnigrosina) en el sedimentosedimento del LCR u otros líquidosdel LCR u otros líquidos
corporalescorporales
En enfermos con SIDA, las cápsulasEn enfermos con SIDA, las cápsulas pueden ser muypueden ser muy
pequeñaspequeñas e incluso estar ausentese incluso estar ausentes
19. Identificación de levadurasIdentificación de levaduras
Observación macro y micro-morfológica de la coloniaObservación macro y micro-morfológica de la colonia
Siembra en medios cromogénicosSiembra en medios cromogénicos
Métodos convencionalesMétodos convencionales
– Presencia de cápsulaPresencia de cápsula
– Examen micro-morfológicoExamen micro-morfológico
Producción de clamidoconidiosProducción de clamidoconidios
Producción de pseudomicelioProducción de pseudomicelio
– Formación de tubos germinativos/prueba de filamentizaciónFormación de tubos germinativos/prueba de filamentización
– Otras pruebas bioquímicas:Otras pruebas bioquímicas:
Producción de ureasaProducción de ureasa
– ZimogramaZimograma
– AuxonogramaAuxonograma
Sistemas comercialesSistemas comerciales
20.
21. Cultivos en agar cromogénicoCultivos en agar cromogénico
CHROM agarCHROM agar
CandidaCandida
CandidaCandida IDID
Tiempo: 48 – 72 hs
Incubación: 35-37ºC
22.
23. Observación directaObservación directa
**** Tinta China**** Tinta China
(Pelikan negra)(Pelikan negra)
LCRLCR (sedimento)(sedimento)
80% de (80% de (+)+)
Examen micológico directo
24.
25. Presencia de levadurasPresencia de levaduras
con prolongación de lascon prolongación de las
paredes paralelas,paredes paralelas, sinsin
constricción en la baseconstricción en la base
de unión a célula madrede unión a célula madre
Producción de tubos germinativosProducción de tubos germinativos
POSITIVAPOSITIVA
37º C no más
de 3 horas
26. 25ºC por25ºC por
2 a 7 días2 a 7 días
en agar harina de maíz - Tween 80
agar arroz
29. Métodos bioquímicosMétodos bioquímicos
• Zimograma
Capacidad de fermentación de fuentes de carbono
•Auxonograma
Capacidad de asimilación de fuentes de carbono y nitrógeno
Observación de la producción de gas
30. Asimilación de compuestos carbonadosAsimilación de compuestos carbonados
y nitrogenados:y nitrogenados: AuxonogramaAuxonograma
ResultadoResultado positivopositivo::
halo de crecimientohalo de crecimiento
alrededor del azúcar.alrededor del azúcar.
31.
32. APIFungichromI ID 32 C
API
Candida
30ºC por30ºC por
24 a 48 hrs24 a 48 hrs
35ºC por35ºC por
24 a 48 hrs24 a 48 hrs
30ºC por30ºC por
24 a 4824 a 48
hrshrs
34. IntroducciónIntroducción
Blancos de acción o “target”Blancos de acción o “target” para desarrollo depara desarrollo de
antifúngicos:antifúngicos:
Ergosterol de la membrana celular,Ergosterol de la membrana celular,
la producción de quitina y alfa- y beta-glucanosla producción de quitina y alfa- y beta-glucanos
de la pared celularde la pared celular
La vía del acido aminoadípico en la síntesis deLa vía del acido aminoadípico en la síntesis de
lisinalisina
Las diferencias en la síntesis de ácido nucleico.Las diferencias en la síntesis de ácido nucleico.
Los mecanismos de la división nuclear.Los mecanismos de la división nuclear.
35. ClasificaciónClasificación
Según su sitio blanco:
a) interferentes del ergosterol
b) inhibidores de síntesis de pared
c) inhibidores del metabolismo de ácidos
nucleicos
d) inhibidores del ensamblaje de
microtúbulos
38. AzolesAzoles
Los antifúngicos azólicos son preparadosLos antifúngicos azólicos son preparados
sintéticos que se caracterízan por lasintéticos que se caracterízan por la
presencia de uno o más anillos de cincopresencia de uno o más anillos de cinco
elementos con dos moléculas deelementos con dos moléculas de
nitrógeno (imidazoles) ó tres moléculas denitrógeno (imidazoles) ó tres moléculas de
nitrógeno (triazoles).nitrógeno (triazoles).
40. ClasificaciónClasificación
De primera generación: imidazoles tópicos.De primera generación: imidazoles tópicos.
De segunda generación: imidazoles sistémicos.De segunda generación: imidazoles sistémicos.
De tercera generación: triazoles.De tercera generación: triazoles.
Micosis superficiales: Clotrimazol, Miconazol, TioconazolMicosis superficiales: Clotrimazol, Miconazol, Tioconazol
y Ketoconazoly Ketoconazol
Micosis sistémicas se utilizan Fluconazol e Itraconazol.Micosis sistémicas se utilizan Fluconazol e Itraconazol.
En los últimos años se han incorporado al uso clínicoEn los últimos años se han incorporado al uso clínico
tres nuevos compuestos: voriconazol, posaconazol ytres nuevos compuestos: voriconazol, posaconazol y
ravuconazol. Todos ellos poseen amplio espectro.ravuconazol. Todos ellos poseen amplio espectro.
41. Mecanismo de acciónMecanismo de acción
Inhiben la 14-alfa-demetilación del lanosterol en laInhiben la 14-alfa-demetilación del lanosterol en la
biosíntesis del ergosterol.biosíntesis del ergosterol.
Esta enzima también juega un rol importante en laEsta enzima también juega un rol importante en la
síntesis desíntesis de colesterolcolesterol en mamíferos pero, usandoen mamíferos pero, usando
concentraciones terapéuticas, los azoles tendríanconcentraciones terapéuticas, los azoles tendrían
mayor afinidad por la enzima fúngica.mayor afinidad por la enzima fúngica.
La depleción deLa depleción de ergosterolergosterol altera la fluidez de laaltera la fluidez de la
membrana reduciendo la actividad de enzimasmembrana reduciendo la actividad de enzimas
asociadas a ésta, aumentando así laasociadas a ésta, aumentando así la
permeabilidad e inhibiendo el crecimiento ypermeabilidad e inhibiendo el crecimiento y
replicación celular.replicación celular.
42. Mecanismos de ResistenciaMecanismos de Resistencia
Disminución de la permeabilidad de laDisminución de la permeabilidad de la
membrana fúngica producida pormembrana fúngica producida por cambios en elcambios en el
ergosterolergosterol. La penetración de los azoles. La penetración de los azoles
dependerá de que sean lipofílicos (itraconazol,dependerá de que sean lipofílicos (itraconazol,
ketoconazol) o hidrofílicos (fluconazol).ketoconazol) o hidrofílicos (fluconazol).
Mutación de la enzima lanosterol - 14Mutación de la enzima lanosterol - 14 αα --
demetilasademetilasa, condicionando una menor afinidad, condicionando una menor afinidad
por los azoles.por los azoles.
Sobreproducción de las enzimas del citocromoSobreproducción de las enzimas del citocromo
p-450p-450, lo que lleva al aumento de la síntesis de, lo que lleva al aumento de la síntesis de
esteroles y contrarresta la acción de los azoles.esteroles y contrarresta la acción de los azoles.
Presencia de bomba de eflujoPresencia de bomba de eflujo con capacidad decon capacidad de
extraer azoles.extraer azoles.
43. PolienosPolienos
Son productos naturales con dobles enlacesSon productos naturales con dobles enlaces
conjugados. Los principales agentesconjugados. Los principales agentes
pertenecientes a este grupo son lapertenecientes a este grupo son la
Anfotericina BAnfotericina B (administración endovenosa)(administración endovenosa)
lala NistatinaNistatina (aplicación tópica).(aplicación tópica).
Poseen amplio espectro y se los utiliza para elPoseen amplio espectro y se los utiliza para el
tratamiento de micosis sistémicas severas,tratamiento de micosis sistémicas severas,
incluso como tratamiento empírico en casos enincluso como tratamiento empírico en casos en
los que se desconoce el agente causal de lalos que se desconoce el agente causal de la
infección fúngica.infección fúngica.
44.
45. Mecanismo de acciónMecanismo de acción
Interacción con los esteroles (ergosterol)Interacción con los esteroles (ergosterol)
de la membrana plasmática provocando lade la membrana plasmática provocando la
despolarización de la membrana y ladespolarización de la membrana y la
formación de poros que aumentan laformación de poros que aumentan la
permeabilidad a proteínas, azúcares ypermeabilidad a proteínas, azúcares y
cationes, conduciendo eventualmente a lacationes, conduciendo eventualmente a la
muerte celular.muerte celular.
46. Mecanismo de ResistenciaMecanismo de Resistencia
La resistencia a estos compuestos seLa resistencia a estos compuestos se
podría deber a cambiospodría deber a cambios cualitativoscualitativos oo
cuantitativoscuantitativos del ergosterol presente endel ergosterol presente en
las membranas. Los cambios cuantitativoslas membranas. Los cambios cuantitativos
se deberían a la inhibición de la vía dese deberían a la inhibición de la vía de
síntesis del ergosterol.síntesis del ergosterol.
47. AlilaminasAlilaminas
Es un grupo de antifúngicos sintéticos que estáEs un grupo de antifúngicos sintéticos que está
representado por Naftifina yrepresentado por Naftifina y TerbinafinaTerbinafina..
Son de menor espectro que los azoles.Son de menor espectro que los azoles.
Activos frente a dermatofitos,Activos frente a dermatofitos, CandidaCandida..
La Terbinafina puede emplearse tanto enLa Terbinafina puede emplearse tanto en
infecciones superficiales como en sistémicas.infecciones superficiales como en sistémicas.
49. Mecanismo de AcciónMecanismo de Acción
Inhibición de la enzima escualeno-Inhibición de la enzima escualeno-
epoxidasa. Esto resulta en la acumulaciónepoxidasa. Esto resulta en la acumulación
de escualeno y conduce a la muerte de lade escualeno y conduce a la muerte de la
célula fúngica por aumento de lacélula fúngica por aumento de la
permeabilidad de la membrana plasmáticapermeabilidad de la membrana plasmática
que lleva a la disrupción celular.que lleva a la disrupción celular.
51. ¿Porqué estudiar la susceptibilidad¿Porqué estudiar la susceptibilidad
de los hongos?de los hongos?
Por la existencia dePor la existencia de levaduras y hongos miceliales conlevaduras y hongos miceliales con
resistencia “natural”resistencia “natural” a los nuevos azoles.a los nuevos azoles.
Por elPor el cambio de patrón de susceptibilidadcambio de patrón de susceptibilidad en cepas deen cepas de
levaduras como consecuencia del tratamiento antifúngico.levaduras como consecuencia del tratamiento antifúngico.
Por laPor la aparición de nuevas especiesaparición de nuevas especies de hongos patógenosde hongos patógenos
oportunistas de susceptibilidad desconocida.oportunistas de susceptibilidad desconocida.
Por elPor el desarrollo de nuevos antifúngicosdesarrollo de nuevos antifúngicos..
Por laPor la necesidad de tener una orientación terapétuica ynecesidad de tener una orientación terapétuica y
profiláctica.profiláctica. Poder predecir la rta al ATFPoder predecir la rta al ATF
52. NCCLS M27-A2 (2002)NCCLS M27-A2 (2002) MacrométodoMacrométodo
MacrodiluciónMacrodilución en caldoen caldo
+10 tubos con concentraciones del
antifúngico + inóculo ⇒
24 - 72h a 35o
C ⇒ lectura visual y
puntuación de inhibición de
crecimiento de 0 à 4 ⇒
* CIM de azoles
Concentración que inhibe 80% o
substancialmente (=2),
* CIM de AMB:
La cc que inhibe totalmente (=0)
CIM = cálculo de porcentajes de
inhibición respecto a un control de
crecimiento .
