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PRÁCTICA No. 11
Haemophilus
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
ACADEMIA DE BACTERIOLOGÍA MÉDICA
18/09/2019
Taxonomía
● Bacilos cortos
● Gram (-)
● Pleomórficos
● No esporulados
● inmóviles
● Algunos son capsulados
● Anaerobios Facultativos
Haemophilus
Se encuentran en las mucosas de las personas
Factores de crecimiento
Primoaislamiento
● AGAR CHOCOLATE
● Variante del agar sangre.
● Enriquecido y no selectivo
● Contiene glóbulos rojos que han sido lisados por el suave
calentamiento a 56 °C.
● NAD y hemina, se encuentran dentro de los glóbulos rojos.
Especies de importancia clínica:
Haemophilus ducreyi bacteria - the
causative agent of chancroid - stained
with en:Gentian Violet.
Margaret Pittman (1931)
Haemophilus influenzae
Kilian, Gratén, Sottnek y
Albritton
En 6 biotipos en base a sus
3 reacciones bioquímicas.
● Secreciones conjuntivales o
respiratorias
● Medicamentos oftalmicos
● Maquillaje
TRASMISIÓN
Diagnóstico del laboratorio
Muestras:
● Sangre para hemocultivo
● LCR, pleural, sinovial, pus etc.
hacer tinción de Gram e inocular en agar chocolate
enriquecido (Meningococo).
● Pus (ocular): hisopó con alginato de calcio.
● para H. ducreyi se obtienen con una torunda
humedecida de la base o el margen de la
úlcera.
● Medios de transporte: Amies con carbón
activado, Dorset, STTG si exceder los 5-7 días
● Morfología colonial y microscopica
● Requerimientos nutricionales.
● Prueba de satelitismo.
● Serotipificación.
● Biotipificación (UREA,INDOL,
descarboxilación de ORNITINA).
● Pruebas. de sensibilidad a antibióticos.
● Secuenciación de ácidos nucleicos.
IDENTIFICACIÓN
MEDIOS DE AISLAMIENTO
MEDIO GELOSA GONOCOCO GC
-(BASE CG ENRIQUECIDA CON HEMOGLOBINA AL 2% Y POLIENRIQUECIMIENTO)
GELOSA CHOCOLATE
-SANGRE DESFIBRINADA DE CORDERO AL 5% CHOCOLATEADA POR CALENTAMIENTO A
80°C POR 10 MINUTOS PARA LIBERAR EL FACTOR X Y SUPLEMENTADO CON
ENRIQUECIMIENTO.
-GELOSA CON ENRIQUECIMIENTO DE FILDES
SANGRE DE CARNERO TRIPSINIZADA
-MEDIO LEVINTHAL
SANGRE DE CABALLO CALENTADA Y FILTRADA, INCUBADAS EN TENSION DE 5% DE
CO2 A 37°C POR 24-48HRS.
MEDIOS DE AISLAMIENTO
PARA EL AISLAMIENTO SELECTIVO DE H. INFLUENZAE A PARTIR DE MUESTRAS
CLÍNICAS DEL TRACTO RESPIRATORIO ALTO, ESPECIALMENTE CUANDO SE HACE ESTUDIO
DE PORTADORES, PUEDE USARSE GELOSA CHOCOLATE CON BACITRACINA (300MCG/ML)
LA IDENTIFICACIÓN TAMBIEN ES A BASE DE
REQUERIMIENTOS
LOS REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES DE FACTORES X Y V MEDIANTE LA PRUEBA DE
SATELITISMO USANDO S. AUREUS CEPA COWAN (PROPORCIONA EL FACTOR V) EN
GELOSA SANGRE (QUE PROPORCIONA EL FACTOR X) Y GELOSA SOYA TRIPTICASEINA (NO
TIENE NINGÚN FACTOR) O SE ADICIONAN DISCOS O TIRAS DE PAPEL FILTRO
IMPREGNADAS CON LOS FACTORES (X y V O SOLO FACTOR V).
++ TAMBIÉN SE PUEDE REALIZAR EMPLEANDO LA PRUEBA DE PORFIRINA (NEGATIVA PARA
H. INFLUENZAE).
DETERMINACIÓN DE SENSIBILIDAD
A) MÉTODO DE DIFUSIÓN CON DISCO (KIRBY BAUER).
B) METODO DE CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA (MICRODILUCIÓN EN
MICROPLACA O E-TEST)
C) ADEMÁS SE DEBE DE REALIZAR DETERMINACIÓN DE BETA LACTAMASAS.
Quad IDES UN MÉTODO PARA DETERMINAR LOS
REQUERIMIENTOS DE FACTOR DE
CRECIMIENTO DE LOS AISLAMIENTOS DE
HAEMOPHILUS, LA PLACA QUAD ID, ESTÁ
DIVIDIDA EN 4 CUADRANTES DE AGAR:
1.- CONTIENE HEMINA (FACTOR X)
2.-CONTIENE NAD (FACTOR V)
3.- CONTIENE FACTOR X Y V
4.-CONTIENE AGAR CALDO
INFUSIÓN DE CORAZÓN O AGAR
BASE SANGRE CON % DE SANGRE DE
CABALLO PARA DIFERENCIAR H.
HAEMOLYTICUS.
Tabla 1.- Diferenciación bioquímica entre especies del género Haemophilus
Conocer la morfología colonial y microscópica de Haemophilus spp. y las pruebas
necesarias para la identificación de algunas especies del género.
OBJETIVO
DESARROLLO
Prueba de satelitismo
Bibliografía:
● Dr. Martinez Baéz M. “lineamientos para la vigilancia epidemiológicade las
infecciones respiratorias agudas graves e invasivas causadas por Streptococcus
pneumoniae, Neisseria meningitidis y Haemophilus influenzae” Dirección General
de Epidemiología DGE-InDRE–RNLSP 2015
● Carroll, K., Hobden, J., Miller, S., Morse, S., Mietzner, T., & Detrick, B. et al.
Jawetz, Melnick, & Adelberg's medical microbiology (25th ed., p. 246).
● Murray, P., Rosenthal, K., Pfaller, M., Di_Francesco, P., & Angiolella, L. (2017).
Microbiologia medica (7th ed., p. 296). Milano: Edra.

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Haemophilus

  • 1. PRÁCTICA No. 11 Haemophilus DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA ACADEMIA DE BACTERIOLOGÍA MÉDICA 18/09/2019
  • 3. ● Bacilos cortos ● Gram (-) ● Pleomórficos ● No esporulados ● inmóviles ● Algunos son capsulados ● Anaerobios Facultativos Haemophilus Se encuentran en las mucosas de las personas
  • 5. Primoaislamiento ● AGAR CHOCOLATE ● Variante del agar sangre. ● Enriquecido y no selectivo ● Contiene glóbulos rojos que han sido lisados por el suave calentamiento a 56 °C. ● NAD y hemina, se encuentran dentro de los glóbulos rojos.
  • 6. Especies de importancia clínica: Haemophilus ducreyi bacteria - the causative agent of chancroid - stained with en:Gentian Violet.
  • 8. Kilian, Gratén, Sottnek y Albritton En 6 biotipos en base a sus 3 reacciones bioquímicas.
  • 9. ● Secreciones conjuntivales o respiratorias ● Medicamentos oftalmicos ● Maquillaje TRASMISIÓN
  • 10. Diagnóstico del laboratorio Muestras: ● Sangre para hemocultivo ● LCR, pleural, sinovial, pus etc. hacer tinción de Gram e inocular en agar chocolate enriquecido (Meningococo). ● Pus (ocular): hisopó con alginato de calcio. ● para H. ducreyi se obtienen con una torunda humedecida de la base o el margen de la úlcera. ● Medios de transporte: Amies con carbón activado, Dorset, STTG si exceder los 5-7 días
  • 11. ● Morfología colonial y microscopica ● Requerimientos nutricionales. ● Prueba de satelitismo. ● Serotipificación. ● Biotipificación (UREA,INDOL, descarboxilación de ORNITINA). ● Pruebas. de sensibilidad a antibióticos. ● Secuenciación de ácidos nucleicos. IDENTIFICACIÓN
  • 12. MEDIOS DE AISLAMIENTO MEDIO GELOSA GONOCOCO GC -(BASE CG ENRIQUECIDA CON HEMOGLOBINA AL 2% Y POLIENRIQUECIMIENTO) GELOSA CHOCOLATE -SANGRE DESFIBRINADA DE CORDERO AL 5% CHOCOLATEADA POR CALENTAMIENTO A 80°C POR 10 MINUTOS PARA LIBERAR EL FACTOR X Y SUPLEMENTADO CON ENRIQUECIMIENTO. -GELOSA CON ENRIQUECIMIENTO DE FILDES SANGRE DE CARNERO TRIPSINIZADA -MEDIO LEVINTHAL SANGRE DE CABALLO CALENTADA Y FILTRADA, INCUBADAS EN TENSION DE 5% DE CO2 A 37°C POR 24-48HRS.
  • 13. MEDIOS DE AISLAMIENTO PARA EL AISLAMIENTO SELECTIVO DE H. INFLUENZAE A PARTIR DE MUESTRAS CLÍNICAS DEL TRACTO RESPIRATORIO ALTO, ESPECIALMENTE CUANDO SE HACE ESTUDIO DE PORTADORES, PUEDE USARSE GELOSA CHOCOLATE CON BACITRACINA (300MCG/ML)
  • 14. LA IDENTIFICACIÓN TAMBIEN ES A BASE DE REQUERIMIENTOS LOS REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES DE FACTORES X Y V MEDIANTE LA PRUEBA DE SATELITISMO USANDO S. AUREUS CEPA COWAN (PROPORCIONA EL FACTOR V) EN GELOSA SANGRE (QUE PROPORCIONA EL FACTOR X) Y GELOSA SOYA TRIPTICASEINA (NO TIENE NINGÚN FACTOR) O SE ADICIONAN DISCOS O TIRAS DE PAPEL FILTRO IMPREGNADAS CON LOS FACTORES (X y V O SOLO FACTOR V). ++ TAMBIÉN SE PUEDE REALIZAR EMPLEANDO LA PRUEBA DE PORFIRINA (NEGATIVA PARA H. INFLUENZAE).
  • 15. DETERMINACIÓN DE SENSIBILIDAD A) MÉTODO DE DIFUSIÓN CON DISCO (KIRBY BAUER). B) METODO DE CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA (MICRODILUCIÓN EN MICROPLACA O E-TEST) C) ADEMÁS SE DEBE DE REALIZAR DETERMINACIÓN DE BETA LACTAMASAS.
  • 16. Quad IDES UN MÉTODO PARA DETERMINAR LOS REQUERIMIENTOS DE FACTOR DE CRECIMIENTO DE LOS AISLAMIENTOS DE HAEMOPHILUS, LA PLACA QUAD ID, ESTÁ DIVIDIDA EN 4 CUADRANTES DE AGAR: 1.- CONTIENE HEMINA (FACTOR X) 2.-CONTIENE NAD (FACTOR V) 3.- CONTIENE FACTOR X Y V 4.-CONTIENE AGAR CALDO INFUSIÓN DE CORAZÓN O AGAR BASE SANGRE CON % DE SANGRE DE CABALLO PARA DIFERENCIAR H. HAEMOLYTICUS.
  • 17. Tabla 1.- Diferenciación bioquímica entre especies del género Haemophilus
  • 18. Conocer la morfología colonial y microscópica de Haemophilus spp. y las pruebas necesarias para la identificación de algunas especies del género. OBJETIVO
  • 21. Bibliografía: ● Dr. Martinez Baéz M. “lineamientos para la vigilancia epidemiológicade las infecciones respiratorias agudas graves e invasivas causadas por Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis y Haemophilus influenzae” Dirección General de Epidemiología DGE-InDRE–RNLSP 2015 ● Carroll, K., Hobden, J., Miller, S., Morse, S., Mietzner, T., & Detrick, B. et al. Jawetz, Melnick, & Adelberg's medical microbiology (25th ed., p. 246). ● Murray, P., Rosenthal, K., Pfaller, M., Di_Francesco, P., & Angiolella, L. (2017). Microbiologia medica (7th ed., p. 296). Milano: Edra.