Las causas principales de errores en la determinación de biomasa por métodos turbidimétricos incluyen errores aleatorios como el pipeteo o la dilución, errores sistemáticos como un tiempo de incubación incorrecto, y errores en la medición como la falta de calibración del instrumento. El método turbidimétrico solo se puede aplicar a microorganismos unicelulares y es afectado por burbujas y sólidos. El contador de células Coulter mide el volumen de partículas que atraviesan un orificio mediante

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1. ¿Cuáles son las causas de los errores en la determinación de biomasa por
métodos turbidimétricos?
I. Errores del proceso analítico
a. Errores aleatorios comunes
 Pipeteo
 Recuperación
 Dilución
 Separación de la fracción libre de la unidad
b. Errores aleatorios anormales “outliers” o “flyers”
 Error en el uso de tubos
 Doble dispensamiento de algún reactivo en el mismo tubo
 Falta de un reactivo en algún tubo
 Generación de burbujas al dispensar
c. Errores sistemáticos
 Incorrecto tiempo de incubación
 Incorrecta temperatura de incubación
 Alteración en el proceso de separación de la fracción unida
 Errores técnicos (error en el volumen dispensado de estándar, control,
muestra, trazador o anticuerpos)
II. Errores en la medición.
a. Errores de fondo.
 Ruidos térmicos del instrumento.
 Contaminación.
 Spillover (contribución de radiación de otros nucleídos).
 Crosstalk (actividad por irradiación de otro nucleído).
b. Errores de conteo
 Falta de calibración del aparato de medición.
 Errores estadísticos (Tiempo de conteo incorrecto)
 Contaminación del algún tubo.
 Diferencias de eficiencia de medición
III. Errores de cálculo.
a) Errores de los calibradores o estándares.
• Errores en la concentración de los estándares.
• Errores en el cálculo de la curva Dosis – Repuesta
• Naturaleza de la curva Dosis – Repuesta
b) Errores en la interpolación en la curva Dosis - Respuesta
• Error en el cálculo de los desconocidos.
• Errores en la identificación de algún tubo.
2. ¿Cuáles son las limitaciones del método turbidimétrico?

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- Solo se puede aplicar a microorganismos unicelulares.
- Este método sólo da una estimación del número de microorganismo (viable y no
viable) y sirve sólo para cargas altas.
- Es afectada por burbujas y sólidos no disueltos.
- Es sensible en un rango acotado de concentración (igualmente la muestra se puede
diluir).
- Normalmente se usan longitudes de onda de aproximadamente de 540 nm.
3. Esplique y esquematicé el principio del método de recuento de células por métodos
electrónicos (coulter-counter).
En un contador Coulter, un tubo con un pequeño orificio en la pared, se sumerge en un vaso
que contiene las partículas suspendidas en un electrolito. Se emplean dos electrodos, uno
dentro del tubo y otro dentro del vaso, de modo que la corriente fluya entre ellos a través del
electrolito, pasando por el orificio del tubo, cuando se aplica una diferencia de potencial entre
ellos (Figura 1). Se mide entonces la impedancia entre los electrodos. La apertura crea una
“zona sensible”, que permite detectar las partículas cuando atraviesan el orificio. Cuando esto
ocurre, la partícula desplaza su propio volumen de electrolito a medida que pasa por el orificio,
lo que crea un aumento momentáneo de la resistencia al paso de corriente a través del orificio.
Este pulso puede medirse como un cambio de voltaje o de corriente. La altura del pulso
producido es proporcional al volumen de la partícula. Si la densidad de todas las partículas es
la misma, el pulso es entonces proporcional también a la masa de cada partícula.
4. Mencione oros métodos de estimación de biomasa.
a. Métodos directos gravímetros
 Peso seco
 Peso húmedo
 Recuento electrónico

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 Volumétrico
b. Métodos indirectos
 De componentes de cultivo: Nitrógeno total, ARN, ADN, proteínas…
 De la actividad metabólica: Consumo de nutrientes característicos como el oxigene
(respiración)
 Métodos turbidimétricos: espectrofotométricos y nefelométricos
 Espectroscopia de infrarrojo cercano.