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HEMOGRAMA AUTOMATIZADO

Lic. TM Boris Valdivia Vizarraga
UNMSM
Hospital Nacional “ Guillermo Almenara Irigoyen “
ESSALUD
Introducción
• El desarrollo de los Autoanalizadores hematológicos
comenzó en la década de los 50 con los hermanos
Wallace y Joseph Coulter, quienes inventaron en 1956
el primer contador automático de células sanguíneas

• Hasta 1973 los hermanos coulter mantuvieron sus
diseños en forma exclusiva, desarrollándolos y
mejorándolos
• Posteriormente otros fabricantes introducen nuevos
modelos basados en el mismo principio
• En 1980 se introduce el diferencial 3 Diff además del
estudio de la serie roja con los cómputos de eritocitos, la
determinación de la hemoglobina y el cálculo de los
índices eritrocitarios
Hermanos Wallace y Joseph
Coulter
Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff
Parametro
Recuento total de glóbulos blancos
Porcentaje de neutrófilos

Abreviarura

Unidades
x 10 3 / ul

WBC
NEUT %

%

Porcentaje de linfocitos

LYNPH %

%

Porcentaje de monocitos

MONO %

%

Porcentaje de eosinófilos

EO

%

%

Porcentaje de basofilos

BASO %

%

Valor absoluto de neutrófilos

NEUT

#

x 10 3 / ul

Valor absoluto de linfocitos

LYNPH #

x 10 3 / ul

Valor absoluto de monocitos

MONO #

x 10 3 / ul

Valor absoluto de eosinófilos

EO

#

x 10 3 / ul
Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff
Parametro

Abreviarura

Unidades

BASO #

x 10 3 / ul

Recuento total de glóbulos rojos

RBC

x 10 6 / ul

Hemoglobina

HGB

G / dl

Hematocrito

HCT

%

Volumen Corpuscular Medio

MCV

fL

Valor absoluto de basófilos

Hemoglobina Corpuscular Media

HCM

pg

MCHM

g / dl

Ancho de Distribución Eritrocitaria

RDW - SD

fL

Ancho de Distribución Eritrocitaria – CV

RDW – CV

%

Concentración de HGB Corpuscular Media
Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff
Parametro

Abreviarura

Unidades
x 10 6 / ul

Recuento total de Plaquetas

PLT

Volumen Plaquetario Medio

MPV

fL

Ancho de Distribución Plaquetario

PDW

%
Principio de Medición
por el Método
de la
Impedancia Eléctrica

El número de pulsos
eléctricos indica la
cantidad de partículas
que pasan a través de la
apertura y el tamaño de
los pulsos es
proporcional al volumen
de las partículas
Un pequeño voltaje aparece
A travez de los electródos

Señal celular

Apertura

Cuando una célula suspendida en una solución electrolítica pasa a través
De la apertura, el cambio de la impedancia eléctrica es detectado como un
Pulso. El número total de pulsos corresponde al conteo total de células y
La altura de cada pulso es proporcional al correspondiente volumen celular
Apertura

Célula 1
Célula 2
Apertura

Cuando 2 o mas células son detectadas en
La apertura, la célula 1 y célula 2 son
Detectadas como un gran pulso, por lo tanto
Una de las células no es contada ( perdida
De coincidencia ). El grado de perdida de
Coincidencia depende de la concentración
Celular .
• Los sistemas
COULTER poseen 2
baños, uno de
eritrocitos y otro de
leucocitos, en el baño
de eritrocitos se
encuentra una
apertura de 50 µm y
en el de los leucocitos
otra de 100 µm.
Ley de Ohm : V=IR

El voltaje generado es directamente proporcional
al tamano de la particula. Por lo tanto para cada
celula se le puede determinar su recuento y
tamaño
IMPEDANCIA
BUENO PARA PLAQUETAS Y ERITROCITOS

Permite la medicion de
parametros objetivos en
estas dos poblaciones
MCV: Tamano eritrocitos
MCH y MCHC: Hb en GR
RDW: Anisocitosis
MPV: Volumen plaquetario
Eritrocitos Dimórficos

Falla renal crónica con
transfusión reciente

Microcitosis

Betatalasemia
VOLUMETRIA
No se puede obtener el recuento celular absoluto a
menos que se conozca el volumen preciso de sangre
total diluida que atraviesa la abertura durante el ciclo
de recuento
Método de Conteo Celular por
Dispersión de la Luz
•

•
•

•

Medida a 0º
sirve para medir el tamaño
celular
Medida a 10º
mide la complejidad celular
Medida a 90º
mide la superficie celular y la
estructura interna
( granularidad )
Medida a 90ºD
mide determinados tipos de
granularidad celular
FOCALIZACIÓN HIDRODINÁMICA
• A medida que las células
penetran en el área de
visualización específica,
se produce la interacción
con el rayo láser con
ángulos diferentes, que
suministran información
sobre el tamaño de la
célula, la estructura
interna, la granularidad y
la morfología de la
superficie.
• CITOMETRIA DE FLUJO
“ Una subdisciplina de
la citología analítica,
con orientación
metodológica, que mide
las células en
suspensión, dentro de
un vehículo líquido, a
su paso por una
estación de medida ”
NCCLS
RADIOFRECUENCIA ( Conductividad )
La conductividad de las
ondas de radio
A través de las células, nos
revelan su composición
interna

Una frecuencia alta, generada por
un oscilador de cristal,
sobreimpuesta a la corriente
directa, que incide sobre
las células para medir su
densidad.
TECNOLOGÍA
VCS

• IMPEDANCIA
• SCATTER LIGHT
• RADIOFRECUENCIA
Estudio de la Serie Roja
• Los años y evaluaciones
han dado total
aprobación a la impedancia eléctrica para el
estudio de las serie roja, en la obtención del
computo de eritrocitos
• Hematocrito electrónico
• Hemoglobina
• VCM, HCM, CHCM
• Nuevos índices como RDW
• Gráficos de distribución de la población
eritroide, histogramas que se obtienen de los
parámetros de volumen celular Vs distribución
de frecuencia
Recuento de Glóbulos Rojos
Cuando una célula
pasa a través de una
apertura por la cual
fluye una corriente
eléctrica continua y
constante,
en
un
medio electrolítico que
puede ser isotónico o
no isotónico, generara
una variación en la
velocidad de flujo de
esta corriente eléctrica
( impedancia ) que será
directamente
proporcional
al
volumen de la célula e
inversamente
proporcional
al
• En el hemograma automatizado por la
metodología usada el valor de Hto es menor al
método del capilar. Disminuye 5% ( 1 – 2
unidades del Hto )
• La CHCM deja el significado del método manual
debido a la menor variabilidad debido a que el
Hto se obtiene electrónicamente
• Solo es significativa si presenta variaciones muy
importantes ( < 29% ) o elevaciones extremas
( > de 37% ) como se observa en la
esferocitosis
• Entonces en un caso de anemia la
clasificación inicial se realiza con las cifras
de HB, Hto, constantes corpusculares ,
RDW y el histograma
• Toda esta información muy valiosa para el
clínico debe ser corroborada por el
examen microscópico de la serie roja,
atendiendo a las alarmas que estos
equipos mostrarán en sus pantallas .
Para tener en cuenta :
•

A pesar del avance tecnológico alcanzado, los
autoanalizadores hematológicos presentan
limitaciones :

1.

No detectan poiquilocitosis

2.

No detectan inclusiones eritrocitarias

3.

Lo que nos presentan los fabricantes son distintos
tipos de alarmas con diversa sensibilidad, que tienen
que ver con el tamaño celular, línea celular, error intramétodo y/o de proceso.

4.

Finalmente, no se debe por ningún motivo, dejar de
realizar el examen microscópico de las células
Estudio de la Serie Roja
• Por lo tanto, la observación microscópica nos permite
confirmar lo señalado por los índices hemáticos, asi
como, establecer la presencia de anormalidades
• Deben considerarse además una serie de interferencias
que alteran el hemograma automatizado :

•
•
•
•
•
•
•

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

lipemia
ictericia severa
hemólisis
auto-aglutinación por anticuerpos fríos
plaquetas gigantes
leucemias
otras anormalidades
ANEMIA

MCV

RDW CV

RDW SD

elevado

elevado

elevado

bajo

elevado

elevado

Hemoglobinopatías heterocigóticas

normal

normal

bajo

Hemoglobinopatías homocigótas

normal

elevado

elevado

Mielofibrosis / anemia sideroblástica

normal

elevado

elevado

Anemia hemolítica

normal

normal

elevado

Anemia secundaria

normal

normal

normal

Talasemia y Hemoglobina S combinada

bajo

elevado

elevado

Talasemia

bajo

normal

bajo

Deficiencia de B12/folato, hemólisis
Causa inmune, aglutinación de GR
Por anticuerpos fríos, anemia aplásica
Insuficiencia severa de fierro
Talasemia
Estudio de las Plaquetas
• El computo se hace habitualmente por
impedancia
• La condición de una muestra en
circunstancias de tiempo, temperatura,
homogenización, relación sangre total /
anticoagulante, y la no formación de
hemólisis y espuma. Son indispensables
para un resultado confiable
Recuento de Plaquetas
En los instrumentos
tipo impedancia las
partículas analizadas
son suspendidas en
una
solución
electrolítica
y
la
dilución es pasada a
través de una apertura
que liga dos cámaras,
una que tiene un
electrodo positivo y
otra
un
electrodo
negativo.
Al pasar por el orificio
las células causan un
incremento
momentáneo en la
resistencia
eléctrica,
que
es
registrado
Cell Dyn Series ( ABBOTT )

La alarma LRI aparece acompañando a la cifra de plaquetas para
indicar interferencias en la región baja ( LRI ); se debe a la
acumulación de datos en la región de 2 – 3 fl. Se activa por una o
varias de las siguientes causas :
 microplaquetas
hemólisis
 fragmentos celulares
residuos en el orificio del transductor
 crioglobulinas
inclusiones intraeritrocitarias
Cell Dyn Series ( ABBOTT )

La alarma URI aparece acompañando a la cifra de plaquetas para indicar
interferencias en la región alta ( URI ); se debe a la acumulación de
plaquetas y eritrocitos entre los 20 y 40 fl. Esta alarma se activa por las
siguientes causas :
 Macroplaquetas

 Eritrocitos Microcíticos
Agregados plaquetarios
Eritrocitos Fragmentados
Satelitósis Plaquetaria
Histogramas de Plaquetopenias
•COULTER utiliza su tecnología patentada de SWEET FLOW
que consiste en hacer circular una corriente de diluyente en
la parte inmediatamente posterior de la apertura de
eritrocitos, a fin de que las plaquetas como son tan pequeñas
no permanezcan en el área de recuento y por lo tanto no se
cuenten más de una vez
• Ante un recuento plaquetario disminuido, se debe de
hacer un examen microscópico de toda la lámina y/o
recuento en cámara.
• Las plaquetas se comportan de manera particular, ya
que cambian de forma desde el momento de su
extracción, para luego estabilizarse, despues de varias
horas pierde confiabilidad.

• Los cambios reales dependen de la alteración en la
generación medular de plaquetas
• Presenta alteraciones en pacientes con plaquetas
gigantes

• El PDW o ancho de distribución plaquetaria,
corresponde a la amplitud de distribución o anisocitosis
plaquetaria y se encuentra alterado en PTI,
Mielodisplasia, Mieloproliferación
• Debe tenerse presente que algunas condiciones con
producción defectuosa medular liberan plaquetas muy
pequeñas y entonces el PDW, VPM y P-LCR presentan
valores muy bajos
• En trombocitopenias es muy útil el histograma, ya que el
equipo no realiza los cálculos
• Es definitivo que toda alteración plaquetaria debe
realizarse al examen microscópico

•
•
•
•
•
•
•

Alteraciones en el recuento automatizado :
1. pseudotrombicitopenia
2. microcitos
3. fragmetos eritrocitarios
4. inclusiones eritrocitarias
5. microcoagulos
6. heparina
Estudio de la Serie Blanca
• Es en el estudio diferencial de leucocitos donde se han
desarrollado mas y nuevas tecnologías, con el fin de
detectar con mayor precisión : tamaño, forma,
morfología nuclear, granularidad y estructuras
complejas.
• La cuenta total de leucocitos se da con la impedancia en
la mayoría de aparatos

• Algunos aparatos usan la impedancia para medir el
volumen nuclear y realizar un diferencial 3 Diff, que
muestra linfocitos, granulocitos y células mixtas
• Estos diferenciales se acompañan de histogramas y
deben ser tomados en cuenta, pero nunca ser los
definitivos. Mas usados en pacientes saludables
Estudio de la Serie Blanca
• Los datos mas confiables para el leucograma
electrónico los ofrecen los diferenciales 5 Diff
• Estos ofrecen análisis por medi de :
• 1. rayo láser ( scatter light )
• 2. radiofrecuencia
• 3. impedancia
• 4. citoquímica
• 5. canales de lobularidad
• La utilización de citoquímica para detectar los
granulocitos se encuentra en algunos
instrumentos, con el uso de la peroxidasa, en
conjunto con un canal de lobularidad, para
basófilos
• Análoga a la especificidad de los antígenos, la
composición y cantidad relativa de diferentes
clases de lípidos en la membrana de los
leucocitos, muestra patrones característicos, que
son diferentes para cada tipo de célula

• Una reacción cito-química, basada en estas
características de la membrana es la mejor
forma de estos instrumentos para diferenciar
granulocitos maduros de los inmaduros
• Causas de interferencia en serie blanca :

•
•
•
•
•
•
•
•

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

crioglobulinas
criofibrinógeno
proteínas monoclonales
eritroblastos
agregados plaquetarios
eritrocitos no lisados
microcoagulos
heparina circulante
Limitaciones del recuento manual de
leucocitos
•

•
•
•
•

•

Rumke C.L. The statistical expected variability in differential
leucocyte counting en Kopke JA Differential Leucocyte Counting
CAP 1978
Bacus JW. The observer error in peripheral blood leucocyte
classification Am J Clin Path 1973, 59, 223-230
Talstad I, Problems in microscopic and automatic differentiation of
blood and cell suspensions Scand J Haematol, 1981, 26, 398-406
Bentley S.A. Quality control and the differential leucocyte count. Clin
Lab Haemat, 1990, 12 Suppl 1, 101-109
Kopke JA, Dotson MA, Shifman MA, A critical evaluation of the
manual/visual differential leucocyte counting method Blood Cells,
1985, 11, 173- 186
Goossens W, Van Hove L, Verwilghen RL, Monocyte counting,
discrepancies in results obtained with differential automated
instruments , J Clin Pathol, 1991, 44, 224-227
HISTOGRAMAS
Histogramas
• De Glóbulos Rojos.
Histograma Normal
de Distribución de
Globulos rojos.
VCM

RDW
Histogramas
• De Glóbulos Rojos.
Desplazamiento a la Izquierda:
Microcitosis

VCM
Histogramas
• De Glóbulos Rojos.
Desplazamiento a la Derecha:
Macrocitosis

VCM
Histogramas
• De Glóbulos Rojos.
RDW Mayor de 15%:
Anisocitosis

RDW
Histogramas
• De Plaquetas.

Zona de Macroplaquetas,
Agregados plaquetarios, microcitos
Todo conteo celular comparte tres pasos básicos :
1. Dilución de la sangre
2. Toma de muestra de una cantidad medida
3. Enumeración de partículas

Ventajas de los métodos electrónicos :
1. Velocidad
2. Precisión
3. Cálculo automatizado del Hematocrito y constantes
4. Impresión de resultados
•

• El MCV es calculado sobre las bases de la sumatoria
de la altura de los pulsos de las células rojas y
dividido por el conteo de G.R.
• El volumen del paquete celular es calculado del MCV
multiplicado por el conteo de células rojas

•

El MCH es calculado del valor de la Hemoglobina y
el conteo de G.R.

•

El MCHC es calculado del valor de Hemoglobina y el
Hematocrito
1.

La turbidez producida por conteos elevados de
células blancas, pueden alterar el valor de la
Hemoglobina, MVC, y Hematocrito.

2.

En LLC y otras leucemias las células son
fácilmente dañadas por la apertura, pudiendo
aparecer falsos conteos bajos de leucocitos
( WIC / WOC )

3.

Títulos altos de aglutininas frías, que agregan los
GR a temperaturaambiente, son responsables de
macrocitosis y valores altos de MCHM
Hematocrito :
Se mide en % y representa la proporción total de
GR en la sangre.

•

No se mide directamente con los citómetros de
flujo y se calcula a partir del VCM y en número de
GR. Tiene menor presición

•

El hematocrito es medido electrónicamente :
“ el pulso que es generado cuando los GR pasan a
través de la abertura es proporcional a su
volumen “. Se determina comparando el volumen
total o acumulado de GR al volumen total de
sangre en los 11.7ul de la dilución 1:500
El conteo diferencial manual está
sujeto a varios errores
•
•
•
•
•

Errores en la preparación del frotis
Errores en la tinción del frotis
Distribución celular
Interpretación celular
Número de células contadas
Un buen diferencial automatizado debe ser capaz de :

1. Identificar células normales y anormales
2. Resultados reproducibles en conteos repetitivos
3. El conteo debe exceder largamente ( 8,000 – 32,000 cel. )
al tradicional conteo manual ( 100 – 200 células )
1. El conteo debe llevarse a cabo en un mínimo lapso
de tiempo
1. Se debe tener capacidad de almacenamiento de datos
ALARMA LRI EN EL HISTOGRAMA
DE PLAQUETAS
PLT: 94K ul LRI
• Esta alarma se activa
por una o varias causas
–
–
–
–

Microplaquetas
Fragmentos celulares
Crioglobulinas
Inclusiones
eritrocitarias
– Hemólisis
– Residuos en el orificio
del transductor

Interferencias en la región baja “low region
interference”(LRI)
ALARMA URI EN EL HISTOGRAMA
DE PLAQUETAS
PLT: 296 K/uL URI
• Esta alarma se activa
por una o varias causas
– Acumulación de
plaquetas
– Eritrocitos microciticos
– Macroplaquetas
– Eritrocitos
fragmentados
– Eritrocitos microcíticos
– Satelitosis plaquetaria
– Agregados
plaquetarios

Alarma Interferencias en la región alta
URI “upper region interference”
LOCALIZACIÓN DE LAS ALARMAS REGIONALES EN EL
HISTOGRAMA DE LEUCOCITOS
• Los grupos celulares que se encuentran fuera de las
regiones consideradas como normales, disparan una alarma.
Según la categoría de las células anormales, CELL-DYN
utiliza seis alarmas diferentes
– R0,R1,R2,R3,R4 y RM
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DEL
HISTOGRAMA DE BLANCOS

•
•
•

•

Existen diferentes regiones o puntos de control dentro de las tres
poblaciones de células blancas
Cuando no se cumplen los criterios de normalidad se muestran las alarmas
R (R0,R1,R2,R3,R4 y RM)
Las muestra cuyos resultados numéricos estén dentro del rango normal,
con histograma normal y que no presenten alarmas ¨R¨, pueden ser
informadas directamente sin supervisión posterior
Las muestras que presentan un resultado o histograma anormal con
alarma ¨R¨, requieren posterior supervisión
Histograma
Influencia del EDTA y la temperatura
HEMATOLOGÍA NORMAL

Diferencial manual
Linfocitos: 39%
Neutrófilos: 56%
Monocitos: 3%
Bandas:1%
Eosinofilos: 1%
LEUCOCITOSIS CON LINFOPENIA Y NEUTROFILIA, LIGERA
TROMBOCITOSIS

Diferencial manual
Linfocitos: 4.5%
Neutrófilos:81.5%
Monocitos: 5%
Bandas: 9%

(CD) Diferencial automatizado
Linfocitos: 8.4%
Granulocitos:87.7%
MID: 3.9%
ERITROCITOSIS MICROCÍTICA

Diferencial manual
Linfocitos: 55%
Neutrófilos: 36%
Monocitos: 5
Bandas: 1%
Basófilos: 3%
Anisocitosis: +
Poiquilocitosis: +
Policromasia: +
GR nucleados: 1/1000GR

(CD) Diferencial automatizado
Linfocitos: 45.9%
Granulocitos: 49.5%
MID: 4.6 %
Valores serie roja alterados
Alarma URI
LIGERA MONOCITOSIS Y EOSINOFILIA
CON NEUTROPENIA

Diferencial manual
Linfocitos: 34%
Basófilos: 2%
Monocitos: 16%
Neutrófilos: 26%
Eosinófilos: 13%
Bandas:7%
Mielocitos: 1%
Metamielocitos: 1%

(CD) Diferencial automatizado
Linfocitos: 32.6%
Granulocitos: R3 51.6%
MID: R3 15.8 %
Poiquilositosis:+
Policromasia: +
Células en diana: +
GRnucleados:1/100G
Reticulocitos:23/1000GR

Valores serie roja alterados
DISPLASIA MEDULAR CON FIBRINA.
CÉLULAS AFECTADAS POR QUIMIOTERAPIA CITÓXICA

Diferencial manual
Linfocitos: 28%
Bandas: 11%
Monocitos: 24%
Eosinofilos: 3%
Neutrófilos: 34%

(CD) Diferencial automatizado
Linfocitos: RM 54.3 %
Granulocitos: RM 33.1 %
MID: R3 12.6 %
Reticulocitos: 13/1000GR
Anisocitosis: ++
Poiquilocitosis: ++

Valores serie roja alterados
Alarma URI
SISTEMA MODULAR TOTALMENTE AUTOMATIZADO

MUCHAS GRACIAS !

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Hematología automatizada 2013

  • 1. HEMOGRAMA AUTOMATIZADO Lic. TM Boris Valdivia Vizarraga UNMSM Hospital Nacional “ Guillermo Almenara Irigoyen “ ESSALUD
  • 2. Introducción • El desarrollo de los Autoanalizadores hematológicos comenzó en la década de los 50 con los hermanos Wallace y Joseph Coulter, quienes inventaron en 1956 el primer contador automático de células sanguíneas • Hasta 1973 los hermanos coulter mantuvieron sus diseños en forma exclusiva, desarrollándolos y mejorándolos • Posteriormente otros fabricantes introducen nuevos modelos basados en el mismo principio • En 1980 se introduce el diferencial 3 Diff además del estudio de la serie roja con los cómputos de eritocitos, la determinación de la hemoglobina y el cálculo de los índices eritrocitarios
  • 3. Hermanos Wallace y Joseph Coulter
  • 4.
  • 5.
  • 6. Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff Parametro Recuento total de glóbulos blancos Porcentaje de neutrófilos Abreviarura Unidades x 10 3 / ul WBC NEUT % % Porcentaje de linfocitos LYNPH % % Porcentaje de monocitos MONO % % Porcentaje de eosinófilos EO % % Porcentaje de basofilos BASO % % Valor absoluto de neutrófilos NEUT # x 10 3 / ul Valor absoluto de linfocitos LYNPH # x 10 3 / ul Valor absoluto de monocitos MONO # x 10 3 / ul Valor absoluto de eosinófilos EO # x 10 3 / ul
  • 7. Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff Parametro Abreviarura Unidades BASO # x 10 3 / ul Recuento total de glóbulos rojos RBC x 10 6 / ul Hemoglobina HGB G / dl Hematocrito HCT % Volumen Corpuscular Medio MCV fL Valor absoluto de basófilos Hemoglobina Corpuscular Media HCM pg MCHM g / dl Ancho de Distribución Eritrocitaria RDW - SD fL Ancho de Distribución Eritrocitaria – CV RDW – CV % Concentración de HGB Corpuscular Media
  • 8. Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff Parametro Abreviarura Unidades x 10 6 / ul Recuento total de Plaquetas PLT Volumen Plaquetario Medio MPV fL Ancho de Distribución Plaquetario PDW %
  • 9. Principio de Medición por el Método de la Impedancia Eléctrica El número de pulsos eléctricos indica la cantidad de partículas que pasan a través de la apertura y el tamaño de los pulsos es proporcional al volumen de las partículas
  • 10. Un pequeño voltaje aparece A travez de los electródos Señal celular Apertura Cuando una célula suspendida en una solución electrolítica pasa a través De la apertura, el cambio de la impedancia eléctrica es detectado como un Pulso. El número total de pulsos corresponde al conteo total de células y La altura de cada pulso es proporcional al correspondiente volumen celular
  • 11. Apertura Célula 1 Célula 2 Apertura Cuando 2 o mas células son detectadas en La apertura, la célula 1 y célula 2 son Detectadas como un gran pulso, por lo tanto Una de las células no es contada ( perdida De coincidencia ). El grado de perdida de Coincidencia depende de la concentración Celular .
  • 12. • Los sistemas COULTER poseen 2 baños, uno de eritrocitos y otro de leucocitos, en el baño de eritrocitos se encuentra una apertura de 50 µm y en el de los leucocitos otra de 100 µm.
  • 13. Ley de Ohm : V=IR El voltaje generado es directamente proporcional al tamano de la particula. Por lo tanto para cada celula se le puede determinar su recuento y tamaño
  • 14. IMPEDANCIA BUENO PARA PLAQUETAS Y ERITROCITOS Permite la medicion de parametros objetivos en estas dos poblaciones MCV: Tamano eritrocitos MCH y MCHC: Hb en GR RDW: Anisocitosis MPV: Volumen plaquetario
  • 15. Eritrocitos Dimórficos Falla renal crónica con transfusión reciente Microcitosis Betatalasemia
  • 16. VOLUMETRIA No se puede obtener el recuento celular absoluto a menos que se conozca el volumen preciso de sangre total diluida que atraviesa la abertura durante el ciclo de recuento
  • 17. Método de Conteo Celular por Dispersión de la Luz • • • • Medida a 0º sirve para medir el tamaño celular Medida a 10º mide la complejidad celular Medida a 90º mide la superficie celular y la estructura interna ( granularidad ) Medida a 90ºD mide determinados tipos de granularidad celular
  • 18. FOCALIZACIÓN HIDRODINÁMICA • A medida que las células penetran en el área de visualización específica, se produce la interacción con el rayo láser con ángulos diferentes, que suministran información sobre el tamaño de la célula, la estructura interna, la granularidad y la morfología de la superficie.
  • 19. • CITOMETRIA DE FLUJO “ Una subdisciplina de la citología analítica, con orientación metodológica, que mide las células en suspensión, dentro de un vehículo líquido, a su paso por una estación de medida ” NCCLS
  • 20. RADIOFRECUENCIA ( Conductividad ) La conductividad de las ondas de radio A través de las células, nos revelan su composición interna Una frecuencia alta, generada por un oscilador de cristal, sobreimpuesta a la corriente directa, que incide sobre las células para medir su densidad.
  • 21. TECNOLOGÍA VCS • IMPEDANCIA • SCATTER LIGHT • RADIOFRECUENCIA
  • 22.
  • 23.
  • 24.
  • 25.
  • 26.
  • 27. Estudio de la Serie Roja • Los años y evaluaciones han dado total aprobación a la impedancia eléctrica para el estudio de las serie roja, en la obtención del computo de eritrocitos • Hematocrito electrónico • Hemoglobina • VCM, HCM, CHCM • Nuevos índices como RDW • Gráficos de distribución de la población eritroide, histogramas que se obtienen de los parámetros de volumen celular Vs distribución de frecuencia
  • 28. Recuento de Glóbulos Rojos Cuando una célula pasa a través de una apertura por la cual fluye una corriente eléctrica continua y constante, en un medio electrolítico que puede ser isotónico o no isotónico, generara una variación en la velocidad de flujo de esta corriente eléctrica ( impedancia ) que será directamente proporcional al volumen de la célula e inversamente proporcional al
  • 29. • En el hemograma automatizado por la metodología usada el valor de Hto es menor al método del capilar. Disminuye 5% ( 1 – 2 unidades del Hto ) • La CHCM deja el significado del método manual debido a la menor variabilidad debido a que el Hto se obtiene electrónicamente • Solo es significativa si presenta variaciones muy importantes ( < 29% ) o elevaciones extremas ( > de 37% ) como se observa en la esferocitosis
  • 30. • Entonces en un caso de anemia la clasificación inicial se realiza con las cifras de HB, Hto, constantes corpusculares , RDW y el histograma • Toda esta información muy valiosa para el clínico debe ser corroborada por el examen microscópico de la serie roja, atendiendo a las alarmas que estos equipos mostrarán en sus pantallas .
  • 31. Para tener en cuenta : • A pesar del avance tecnológico alcanzado, los autoanalizadores hematológicos presentan limitaciones : 1. No detectan poiquilocitosis 2. No detectan inclusiones eritrocitarias 3. Lo que nos presentan los fabricantes son distintos tipos de alarmas con diversa sensibilidad, que tienen que ver con el tamaño celular, línea celular, error intramétodo y/o de proceso. 4. Finalmente, no se debe por ningún motivo, dejar de realizar el examen microscópico de las células
  • 32. Estudio de la Serie Roja • Por lo tanto, la observación microscópica nos permite confirmar lo señalado por los índices hemáticos, asi como, establecer la presencia de anormalidades • Deben considerarse además una serie de interferencias que alteran el hemograma automatizado : • • • • • • • 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. lipemia ictericia severa hemólisis auto-aglutinación por anticuerpos fríos plaquetas gigantes leucemias otras anormalidades
  • 33. ANEMIA MCV RDW CV RDW SD elevado elevado elevado bajo elevado elevado Hemoglobinopatías heterocigóticas normal normal bajo Hemoglobinopatías homocigótas normal elevado elevado Mielofibrosis / anemia sideroblástica normal elevado elevado Anemia hemolítica normal normal elevado Anemia secundaria normal normal normal Talasemia y Hemoglobina S combinada bajo elevado elevado Talasemia bajo normal bajo Deficiencia de B12/folato, hemólisis Causa inmune, aglutinación de GR Por anticuerpos fríos, anemia aplásica Insuficiencia severa de fierro
  • 34.
  • 36.
  • 37.
  • 38.
  • 39.
  • 40. Estudio de las Plaquetas • El computo se hace habitualmente por impedancia • La condición de una muestra en circunstancias de tiempo, temperatura, homogenización, relación sangre total / anticoagulante, y la no formación de hemólisis y espuma. Son indispensables para un resultado confiable
  • 41. Recuento de Plaquetas En los instrumentos tipo impedancia las partículas analizadas son suspendidas en una solución electrolítica y la dilución es pasada a través de una apertura que liga dos cámaras, una que tiene un electrodo positivo y otra un electrodo negativo. Al pasar por el orificio las células causan un incremento momentáneo en la resistencia eléctrica, que es registrado
  • 42.
  • 43.
  • 44. Cell Dyn Series ( ABBOTT ) La alarma LRI aparece acompañando a la cifra de plaquetas para indicar interferencias en la región baja ( LRI ); se debe a la acumulación de datos en la región de 2 – 3 fl. Se activa por una o varias de las siguientes causas :  microplaquetas hemólisis  fragmentos celulares residuos en el orificio del transductor  crioglobulinas inclusiones intraeritrocitarias
  • 45. Cell Dyn Series ( ABBOTT ) La alarma URI aparece acompañando a la cifra de plaquetas para indicar interferencias en la región alta ( URI ); se debe a la acumulación de plaquetas y eritrocitos entre los 20 y 40 fl. Esta alarma se activa por las siguientes causas :  Macroplaquetas  Eritrocitos Microcíticos Agregados plaquetarios Eritrocitos Fragmentados Satelitósis Plaquetaria
  • 47. •COULTER utiliza su tecnología patentada de SWEET FLOW que consiste en hacer circular una corriente de diluyente en la parte inmediatamente posterior de la apertura de eritrocitos, a fin de que las plaquetas como son tan pequeñas no permanezcan en el área de recuento y por lo tanto no se cuenten más de una vez
  • 48. • Ante un recuento plaquetario disminuido, se debe de hacer un examen microscópico de toda la lámina y/o recuento en cámara. • Las plaquetas se comportan de manera particular, ya que cambian de forma desde el momento de su extracción, para luego estabilizarse, despues de varias horas pierde confiabilidad. • Los cambios reales dependen de la alteración en la generación medular de plaquetas • Presenta alteraciones en pacientes con plaquetas gigantes • El PDW o ancho de distribución plaquetaria, corresponde a la amplitud de distribución o anisocitosis plaquetaria y se encuentra alterado en PTI, Mielodisplasia, Mieloproliferación
  • 49. • Debe tenerse presente que algunas condiciones con producción defectuosa medular liberan plaquetas muy pequeñas y entonces el PDW, VPM y P-LCR presentan valores muy bajos • En trombocitopenias es muy útil el histograma, ya que el equipo no realiza los cálculos • Es definitivo que toda alteración plaquetaria debe realizarse al examen microscópico • • • • • • • Alteraciones en el recuento automatizado : 1. pseudotrombicitopenia 2. microcitos 3. fragmetos eritrocitarios 4. inclusiones eritrocitarias 5. microcoagulos 6. heparina
  • 50. Estudio de la Serie Blanca • Es en el estudio diferencial de leucocitos donde se han desarrollado mas y nuevas tecnologías, con el fin de detectar con mayor precisión : tamaño, forma, morfología nuclear, granularidad y estructuras complejas. • La cuenta total de leucocitos se da con la impedancia en la mayoría de aparatos • Algunos aparatos usan la impedancia para medir el volumen nuclear y realizar un diferencial 3 Diff, que muestra linfocitos, granulocitos y células mixtas • Estos diferenciales se acompañan de histogramas y deben ser tomados en cuenta, pero nunca ser los definitivos. Mas usados en pacientes saludables
  • 51. Estudio de la Serie Blanca • Los datos mas confiables para el leucograma electrónico los ofrecen los diferenciales 5 Diff • Estos ofrecen análisis por medi de : • 1. rayo láser ( scatter light ) • 2. radiofrecuencia • 3. impedancia • 4. citoquímica • 5. canales de lobularidad
  • 52. • La utilización de citoquímica para detectar los granulocitos se encuentra en algunos instrumentos, con el uso de la peroxidasa, en conjunto con un canal de lobularidad, para basófilos • Análoga a la especificidad de los antígenos, la composición y cantidad relativa de diferentes clases de lípidos en la membrana de los leucocitos, muestra patrones característicos, que son diferentes para cada tipo de célula • Una reacción cito-química, basada en estas características de la membrana es la mejor forma de estos instrumentos para diferenciar granulocitos maduros de los inmaduros
  • 53. • Causas de interferencia en serie blanca : • • • • • • • • 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. crioglobulinas criofibrinógeno proteínas monoclonales eritroblastos agregados plaquetarios eritrocitos no lisados microcoagulos heparina circulante
  • 54. Limitaciones del recuento manual de leucocitos • • • • • • Rumke C.L. The statistical expected variability in differential leucocyte counting en Kopke JA Differential Leucocyte Counting CAP 1978 Bacus JW. The observer error in peripheral blood leucocyte classification Am J Clin Path 1973, 59, 223-230 Talstad I, Problems in microscopic and automatic differentiation of blood and cell suspensions Scand J Haematol, 1981, 26, 398-406 Bentley S.A. Quality control and the differential leucocyte count. Clin Lab Haemat, 1990, 12 Suppl 1, 101-109 Kopke JA, Dotson MA, Shifman MA, A critical evaluation of the manual/visual differential leucocyte counting method Blood Cells, 1985, 11, 173- 186 Goossens W, Van Hove L, Verwilghen RL, Monocyte counting, discrepancies in results obtained with differential automated instruments , J Clin Pathol, 1991, 44, 224-227
  • 56. Histogramas • De Glóbulos Rojos. Histograma Normal de Distribución de Globulos rojos. VCM RDW
  • 57. Histogramas • De Glóbulos Rojos. Desplazamiento a la Izquierda: Microcitosis VCM
  • 58. Histogramas • De Glóbulos Rojos. Desplazamiento a la Derecha: Macrocitosis VCM
  • 59. Histogramas • De Glóbulos Rojos. RDW Mayor de 15%: Anisocitosis RDW
  • 60. Histogramas • De Plaquetas. Zona de Macroplaquetas, Agregados plaquetarios, microcitos
  • 61.
  • 62. Todo conteo celular comparte tres pasos básicos : 1. Dilución de la sangre 2. Toma de muestra de una cantidad medida 3. Enumeración de partículas Ventajas de los métodos electrónicos : 1. Velocidad 2. Precisión 3. Cálculo automatizado del Hematocrito y constantes 4. Impresión de resultados
  • 63. • • El MCV es calculado sobre las bases de la sumatoria de la altura de los pulsos de las células rojas y dividido por el conteo de G.R. • El volumen del paquete celular es calculado del MCV multiplicado por el conteo de células rojas • El MCH es calculado del valor de la Hemoglobina y el conteo de G.R. • El MCHC es calculado del valor de Hemoglobina y el Hematocrito
  • 64. 1. La turbidez producida por conteos elevados de células blancas, pueden alterar el valor de la Hemoglobina, MVC, y Hematocrito. 2. En LLC y otras leucemias las células son fácilmente dañadas por la apertura, pudiendo aparecer falsos conteos bajos de leucocitos ( WIC / WOC ) 3. Títulos altos de aglutininas frías, que agregan los GR a temperaturaambiente, son responsables de macrocitosis y valores altos de MCHM
  • 65. Hematocrito : Se mide en % y representa la proporción total de GR en la sangre. • No se mide directamente con los citómetros de flujo y se calcula a partir del VCM y en número de GR. Tiene menor presición • El hematocrito es medido electrónicamente : “ el pulso que es generado cuando los GR pasan a través de la abertura es proporcional a su volumen “. Se determina comparando el volumen total o acumulado de GR al volumen total de sangre en los 11.7ul de la dilución 1:500
  • 66. El conteo diferencial manual está sujeto a varios errores • • • • • Errores en la preparación del frotis Errores en la tinción del frotis Distribución celular Interpretación celular Número de células contadas
  • 67. Un buen diferencial automatizado debe ser capaz de : 1. Identificar células normales y anormales 2. Resultados reproducibles en conteos repetitivos 3. El conteo debe exceder largamente ( 8,000 – 32,000 cel. ) al tradicional conteo manual ( 100 – 200 células ) 1. El conteo debe llevarse a cabo en un mínimo lapso de tiempo 1. Se debe tener capacidad de almacenamiento de datos
  • 68. ALARMA LRI EN EL HISTOGRAMA DE PLAQUETAS PLT: 94K ul LRI • Esta alarma se activa por una o varias causas – – – – Microplaquetas Fragmentos celulares Crioglobulinas Inclusiones eritrocitarias – Hemólisis – Residuos en el orificio del transductor Interferencias en la región baja “low region interference”(LRI)
  • 69. ALARMA URI EN EL HISTOGRAMA DE PLAQUETAS PLT: 296 K/uL URI • Esta alarma se activa por una o varias causas – Acumulación de plaquetas – Eritrocitos microciticos – Macroplaquetas – Eritrocitos fragmentados – Eritrocitos microcíticos – Satelitosis plaquetaria – Agregados plaquetarios Alarma Interferencias en la región alta URI “upper region interference”
  • 70. LOCALIZACIÓN DE LAS ALARMAS REGIONALES EN EL HISTOGRAMA DE LEUCOCITOS • Los grupos celulares que se encuentran fuera de las regiones consideradas como normales, disparan una alarma. Según la categoría de las células anormales, CELL-DYN utiliza seis alarmas diferentes – R0,R1,R2,R3,R4 y RM
  • 71. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DEL HISTOGRAMA DE BLANCOS • • • • Existen diferentes regiones o puntos de control dentro de las tres poblaciones de células blancas Cuando no se cumplen los criterios de normalidad se muestran las alarmas R (R0,R1,R2,R3,R4 y RM) Las muestra cuyos resultados numéricos estén dentro del rango normal, con histograma normal y que no presenten alarmas ¨R¨, pueden ser informadas directamente sin supervisión posterior Las muestras que presentan un resultado o histograma anormal con alarma ¨R¨, requieren posterior supervisión
  • 72. Histograma Influencia del EDTA y la temperatura
  • 73. HEMATOLOGÍA NORMAL Diferencial manual Linfocitos: 39% Neutrófilos: 56% Monocitos: 3% Bandas:1% Eosinofilos: 1%
  • 74. LEUCOCITOSIS CON LINFOPENIA Y NEUTROFILIA, LIGERA TROMBOCITOSIS Diferencial manual Linfocitos: 4.5% Neutrófilos:81.5% Monocitos: 5% Bandas: 9% (CD) Diferencial automatizado Linfocitos: 8.4% Granulocitos:87.7% MID: 3.9%
  • 75. ERITROCITOSIS MICROCÍTICA Diferencial manual Linfocitos: 55% Neutrófilos: 36% Monocitos: 5 Bandas: 1% Basófilos: 3% Anisocitosis: + Poiquilocitosis: + Policromasia: + GR nucleados: 1/1000GR (CD) Diferencial automatizado Linfocitos: 45.9% Granulocitos: 49.5% MID: 4.6 % Valores serie roja alterados Alarma URI
  • 76. LIGERA MONOCITOSIS Y EOSINOFILIA CON NEUTROPENIA Diferencial manual Linfocitos: 34% Basófilos: 2% Monocitos: 16% Neutrófilos: 26% Eosinófilos: 13% Bandas:7% Mielocitos: 1% Metamielocitos: 1% (CD) Diferencial automatizado Linfocitos: 32.6% Granulocitos: R3 51.6% MID: R3 15.8 % Poiquilositosis:+ Policromasia: + Células en diana: + GRnucleados:1/100G Reticulocitos:23/1000GR Valores serie roja alterados
  • 77. DISPLASIA MEDULAR CON FIBRINA. CÉLULAS AFECTADAS POR QUIMIOTERAPIA CITÓXICA Diferencial manual Linfocitos: 28% Bandas: 11% Monocitos: 24% Eosinofilos: 3% Neutrófilos: 34% (CD) Diferencial automatizado Linfocitos: RM 54.3 % Granulocitos: RM 33.1 % MID: R3 12.6 % Reticulocitos: 13/1000GR Anisocitosis: ++ Poiquilocitosis: ++ Valores serie roja alterados Alarma URI
  • 78. SISTEMA MODULAR TOTALMENTE AUTOMATIZADO MUCHAS GRACIAS !