Este documento describe la funcionalidad y preparación de varios agares y caldos comúnmente usados en microbiología. El Agar TCBS se usa para aislar Vibrio cholerae y otras especies de Vibrio. El Agar TSI sirve como prueba bioquímica inicial para bacilos gram negativos basada en la fermentación de azúcares. El Caldo Urea detecta la presencia de la enzima ureasa producida por ciertos microorganismos. Cada medio se prepara disolviendo el deshidratado en

1. FUNCIONALIDAD DE LOS
AGARES

2. AGAR TCBS
• BD TCBS Agar (agar tiosulfato citrato bilis sacarosa) es un medio selectivo de
diferenciación para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae y otras especies Vibrio
a partir de muestras clínicas y de otras clases.
Las siglas TCBS significan tiosulfato citrato bilis sacarosa. A este
agar también se le conoce con el nombre de medio selectivo
para Vibrios. La fórmula original fue creada por Nakanishi y
posteriormente modificada por Kobayashi.

3. CONSUMIDORAS DE SACAROSA Y
NO CONSUMIDORAS
• Las colonias de las cepas fermentadoras de sacarosa se desarrollan de color amarillo
y harán virar el medio de verde a amarillo por la producción de ácidos. Las no
fermentadoras crecen traslúcidas y el medio queda del color original (verde).
Vibrio parahaemolyticus crecimiento
satisfactorio (colonia con centro
verde y borde traslúcida).
-Vibrio cholerae crecimiento
satisfactorio (colonias amarillas,
borde traslúcido).

4. ¿QUE CRECE?
• bacterias del género Vibrio, especialmente Vibrio cholerae, V. vulnificus y V.
parahaemolyticus como principales patógenos de este género.
V. parahaemolyticus Vibrio cholerae
Como también
E. Coli
Ps. aeruginosa
P. aeruginosa,

5. PREPARACIÓN
Pese 89 gr del medio deshidratado y disuelva en un litro
de agua destilada. Ayude la disolución por
calentamiento y agitación frecuente. La mezcla puede
dejarse hervir hasta por 2 minutos.
Este medio no se autoclava. Después de su disolución se
sirve directamente sobre placas estériles. Al solidificar se
ordenan de forma invertida en plaqueros y se guardan
en nevera (2-8°C) hasta su uso.
El medio después de preparado debe quedar a pH 8,6 ±
0,2.
El color del medio deshidratado es de color beige claro
o beige-verdoso, y el color del medio es verde bosque o
verde azulado.
Es importante dejar atemperar las placas antes de
sembrar las muestras.

6. AGAR TSI
• El agar TSI o agar hierro triple azúcar es un medio de cultivo sólido que sirve como
prueba bioquímica para orientar la identificación inicial de los bacilos Gram
negativos. Se fundamenta en evidenciar la fermentación de los azúcares presentes, y
la producción de sulfuro de hidrógeno y gas.

7. ¿QUE CRECE?
Bacilos gram negativos entéricos basado en la fermentación de carbohidratos
¿Qué son las gram negativas?
Se denominan bacterias gramnegativas aquellas que no se tiñen de azul oscuro o de violeta por
la tinción de Gram como:
E. Coli
P. aeruginosa,
P. Aeruginosa Salmonella
Typhimurium
Shigella flexneri

8. PREPARACIÓN
• Pese 62,5 gr del medio agar hierro triple azúcar (TSI)
deshidratado y disuelva en un litro de agua destilada.
Caliente hasta disolver completamente el agar. Hervir por un
minuto agitando frecuentemente. Distribuir 4 ml del medio
en tubos de ensayo 13/100 con tapa de algodón.
Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 minutos. Sacar del
autoclave y dejar reposar de forma inclinada. Se debe cuidar
que tanto la base como el bisel tengan la misma distancia.
Almacenar en nevera 2-8°C. Dejar atemperar antes de
sembrar la cepa bacteriana.
El color del medio deshidratado es beige claro y el medio
preparado es de color rojo-naranja
El pH final del medio preparado es 7,3 ± 0,2.

9. AGAR CITRATO SIMMONS
• El agar citrato de Simmons se emplea comúnmente como parte de un grupo de pruebas
bioquímicas. ​ Es un medio definido, selectivo y diferencial que prueba la capacidad de un
organismo para usar citrato como única fuente de carbono e iones de amonio como única
fuente de nitrógeno.
El agar Citrato de Simmons es un medio
sólido utilizado como prueba
bioquímica de identificación de
microorganismos, especialmente de
bacilos Gram negativos. El medio
original fue creado por Koser en 1923.

10. ¿QUÉ CRECE?
• El agar citrato de Simmons es usado para la identificación de ciertos microorganismos, en
especial los bacilos pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae y otros bacilos no
fermentadores de glucosa.
Edwarsiella tard Citrobacter
koseri
Lebsiella
oxytoca

11. PREPARACIÓN
Pesar 24,2 gr del medio deshidratado para un litro de agua. Mezclar
y dejar en reposo durante 5 minutos aproximadamente. Terminar de
disolver el medio calentando durante 1 o dos minutos, agitando
frecuentemente.
Servir 4 ml en tubos de ensayo y autoclavar a 121°C durante 15
minutos. Al salir del autoclave, inclinar con ayuda de un soporte de
tal manera que el agar se solidifique en forma de pico de flauta con
poco taco o fondo y más bisel.
El pH final del medio citrato es de 6,9 (color verde). Este medio es
muy sensible al cambio de pH.
A pH 6 o por debajo, el medio se torna color amarillo. Este color no
es observado en la prueba con bacterias.
Y a pH 7,6 o por encima, el medio cambia a color azul de prusia
intenso.

12. CALDO UREA
• El caldo urea es un medio de cultivo líquido, utilizado para evidenciar la presencia de la
enzima ureasa en ciertos microorganismos. La ureasa es una enzima microbiana que se
produce de manera constitutiva, es decir, es sintetizada independientemente de estar o no
presente el sustrato sobre el que actúa.
La función de la ureasa está relacionada con la
descomposición de los compuestos orgánicos. No todos los
microorganismos son capaces de sintetizar esta enzima, por
tanto su determinación en el laboratorio permite identificar
ciertas cepas bacterianas e inclusive diferenciar entre
especies de un mismo género.

13. ¿QUE CRECE?
• La primera es especial para evidenciar gran cantidad de ureasa producida por especies del género
Proteus.
La segunda es más sensible y puede detectar pequeñas cantidades de ureasa generadas tardíamente por
otros géneros bacterianos, tales como Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella,
Bacillus, Micrococcus, Helicobacter y Mycobacterium.
Proteus es un género de bacterias gramnegativas, que
incluye patógenos responsables de muchas infecciones
del tracto urinario.​ Las especies de Proteus normalmente
no fermentan lactosa por razón de no tener una β
galactosidasa
Yersinia
Enterocolitica

14. PREPARACIÓN
• Disolver 24 gr del agar base deshidratado en 950 ml de
agua destilada. Esterilizar en el autoclave a 121°C por 15
minutos. Dejar reposar hasta que alcance una temperatura
de 50°C y agregar la urea anteriormente preparada de
forma aséptica.
Verter 4 a 5 ml en tubos estériles e inclinar hasta que
solidifiquen. Debe quedar un pico de flauta largo.
Este medio también se puede preparar de forma líquida.

15. AGAR ENTÉRICO DE HEKTOEN
(HEK)
• El agar Hektoen o agar Hektoen entérico es un medio de cultivo sólido, selectivo y
diferencial. Fue creado en el Instituto Hektoen por King y Metzger para el
aislamiento de bacterias enteropatógenas de los géneros Shigella y Salmonella.

16. ¿QUÉ CRECE?
• Para el aislamiento de bacterias enteropatógenas de los géneros Shigella y
Salmonella.
¿Qué es un
Enteropatogeno?
Agente enteropatógeno
Microorganismo que
bajo ciertas
circunstancias puede
producir enfermedad
en el ser humano a
nivel del sistema
digestivo, se transmite
vía oral-fecal.
Shigella
Salmonella

17. PREPARACIÓN
Pesar 76 gr del medio deshidratado y disolver en un litro de agua
destilada. Agitar vigorosamente la mezcla y luego se deja en reposo
por 10 a 15 minutos. Se puede calentar y hervir, dando movimientos
rotatorios hasta su disolución total. Este medio no se esteriliza en
autoclave.
Cuando el medio alcance una temperatura aproximada de 45°C se
vierte de forma directa un volumen de 20 ml en placas de Petri
estériles.
Se deja solidificar el agar. En ese momento ya están listas para su uso.
Es recomendable utilizarlas de forma inmediata. De no ser posible se
guardan en nevera hasta su uso.
Las placas deben sacarse anticipadamente de la nevera antes de
sembrarlas para que tomen temperatura ambiente.
El pH del medio debe quedar en 7,5 ± 0,2. El color del medio
deshidratado es color púrpura y preparado es verde amarronado.

18. CALDO TIOGLICOLATO
• El caldo tioglicolato es un medio de cultivo enriquecido de consistencia fluida. Se le
conoce con las siglas FTM por sus siglas en inglés Fluid Thioglycollate Medium. Fue
creado por Brewer y modificado en 1944 por Vera, quien le incorporó peptona de
caseína.
• Este medio posee un bajo potencial de oxidación –reducción, por ello no es
recomendable para el desarrollo de bacterias aerobias estrictas, pero es ideal para
recuperar bacterias aeróbicas facultativas, anaerobias estrictas y microaerófilas poco
exigentes.

19. ¿QUE CRECE?
• bacterias aeróbicas facultativas, anaerobias estrictas y microaerófilas poco exigentes.
Bacillus subtilis
Bacteroides fragilis

20. PREPARACIÓN
Pesar 29,75 gr del medio deshidratado y disolver en 1 litro de
agua destilada. La mezcla se deja en reposo por 5 minutos
aproximadamente. Llevar a una fuente de calor y agitar
frecuentemente hasta que se disuelva completamente.
Verter el medio en tubos de ensayos y autoclavar a 121°C por 15
minutos. Dejar enfriar antes de usar. Revisar el inserto de la casa
comercial para su conservación. Algunas recomiendan guardar a
temperatura ambiente en lugar oscuro, y otras en nevera
protegidos de la luz.
El pH del medio preparado es de 7,1 ± 0,2.
El color del medio deshidratado es beige claro y preparado es
ámbar claro con cierta opalescencia.

21. !GRACIAS POR SU ATENCIÓN¡