Este documento presenta información sobre las rutas metabólicas de los carbohidratos y pruebas bioquímicas para su identificación. Explica procesos como la glicólisis, fermentación y ciclo de Krebs, e incluye detalles sobre pruebas de Durham, Kligler, Rojo de Metilo y Voges-Proskauer para determinar la fermentación de azúcares. También cubre pruebas de Simmons y caldo malonato para evaluar el uso de ácidos orgánicos. El objetivo es proporcionar fundament

1. I n s t i t u to P o l i t é c n i c o N a c i o n a l
E s c u e l a N a c i o n a l D e C i e n c i a s B i o l ó g i c a s
Q u í m i c o Fa r m a c é u t i c o I n d u s t r i a l
6FM2 – Equipo 6 (Lab3) & Equipo 6 (Lab.4)
Microbiología General
Castro Loa Fernando Adrian
Cruz Martínez Karen Guadalupe
Pacheco Juárez Noemí
Prieto Martínez Fernando

2. F u n d a m e n t o s T e ó r i c o s
C a r b o h i d r a t o s
Para sobrevivir TODAS las células precisan de
energía, la cual habitualmente proviene de
moléculas de ATP el cual se obtiene de una gran
variedad de compuestos como carbohidratos,
lípidos y aminoácidos.
De forma integral se compone de reacciones de
degradación (catabolismo) y reacciones de síntesis
(anabolismo).
Metabolismo

3. F u n d a m e n t o s T e ó r i c o s
C a r b o h i d r a t o s
Rutas metabólicas de carbohidratos
•Glicólisis (EMP)
•Fermentación
•Ruta de las Pentosas Fosfato
•Ciclo del ácido Tricarboxílico
Rutas de obtención de energía
•Fermentación
Obtención de ATP por Fosforilación a nivel de sustrato.
•Respiración
Obtención de ATP por fosforilación oxidativa.
•Fotosíntesis
Obtención de ATP por fotofosforilación.

4. F u n d a m e n t o s T e ó r i c o s
C a r b o h i d r a t o s
Fermentación
Se trata de un proceso metabólico en el cual los compuestos orgánicos actúan
como aceptores o donadores de electrones, debido a ello las moléculas que
pueden fermentarse son muy diversas.
Fermentación Productos Principales Ejemplos
Alcohólica Etanol y CO2
Ciertas Levaduras y
Zymomonas
Homoláctica Ácido Láctico Lactobacillus, Streptococcus sp.
Heteroláctica Ácido Láctico, Etanol y CO2 Lactobacillus, Leuconostoc
Ácido Mixta
Butanol, Succinato, Lactato,
Acetato, Formiato, H2 y CO2
Enterobacterias: Shigella sp.,
Salomnella sp., Klebsiella sp.,
Escherichia coli.
Butírica Butirato, Acetato, H2 y CO2 Clostridium Butyricum
Propiónica Propionato, Acetato y CO2
Propionibacterium, Clostridium
propionicum.
Acética Acetato
Costridium aceticum,
Acetobacterium
El producto principal de la fermentación es el Ácido Láctico

5. F u n d a m e n t o s T e ó r i c o s
C a r b o h i d r a t o s
La identificación de un microorganismo es un
proceso integral.
Las pruebas bioquímicas son una herramienta
fundamental por su importancia clínica y
diagnóstica.
Pruebas Bioquímicas

6. F u n d a m e n t o s T e ó r i c o s
C a r b o h i d r a t o s
Pruebas de Fermentación Los carbohidratos son moléculas
compuestas fundamentalmente de
Carbono y Agua que poseen enlaces
glicosídicos, pueden dividirse en:
1. Monosacáridos (aldosas o cetosas)
2. Disacáridos
3. Oligosacáridos
4. Polisacáridos
Algunos polialcoholes reciben la
designación de azúcares debido a que
provienen de la reducción de los
mismos como: Manitol, Dulcitol y
Sorbitol.
1. Prueba de Durham
2. Prueba de Rojo de Metilo
3. Prueba de Voges-Proskauer
4. Prueba de Kligler

7. F u n d a m e n t o s T e ó r i c o s
C a r b o h i d r a t o s
Algunas bacterias pueden obtener energía en ausencia del proceso de fermentación, en
este caso el citrato es el que funge como fuente de carbono.
El medio incluye citrato de sodio y algún fosfato de amonio como única fuente de
nitrógeno.
El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y Piruvato. Este último, en
presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como
fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos.
Prueba del Citrato

8. F u n d a m e n t o s T e ó r i c o s
C a r b o h i d r a t o s
Prueba de Fermentación de Lactosa
Permite diferenciar organismos sobre la base de sus múltiples reacciones metabólicas en
un medio lácteo como la fermentación de lactosa.
La leche contiene lactosa, caseína, lactalbúmina y lactoglobulina, por lo tanto, un
organismo puede mostrar una o varias propiedades metabólicas ayudando así a su
identificación bacteriana.
Cuando un organismo es capaz de fermentar lactosa, produce principalmente ácido
láctico.

9. D i a g r a m a d e F l u j o
C a r b o h i d r a t o s
Inocular los tubos de
Durham con los
diferentes azúcares.
Incubar a 37°C
durante 24 h.
Observar y registrar los
resultados indicando:
Producción de ácido y
Producción de gas.
Inocular por picadura y
en la superficie de los
tubos cada una del
cepas.
Incubar a 37°C durante
24 h.
Observar y registrar los
resultados indicando:
Fermentación de glucosa,
Fermentación de lactosa,
Producción de gas,
Producción de H2S y
Alcalinización.

10. D i a g r a m a d e F l u j o
C a r b o h i d r a t o s
Inocular las cepas en
dos tubos de caldo
glucosado.
Incubar a 37°C durante
24 h.
Añadir al tubo MR 5
gotas de rojo de metilo
sin agitar
Añadir al tubo VP 6 gotas
de ɑ-naftol y 2 gotas de
KOH-creatina
Agitar suavemente y
dejar reposar de 20 a 30
minutos.
Sembrar un tubo de
Simmons por estría
abierta y uno con caldo
malonato con una
asada.
Incubar a 37°C durante
24 h.
Observar y registrar el
resultado.

11. R e s u l t a d o s d e P r u e b a s B Q .
C a r b o h i d r a t o s
Prueba de Durham
Sin inocular Prueba positiva de Fermentación de
Carbohidratos y generación de Biogás
Prueba negativa de Fermentación de
Carbohidratos y generación de Biogás *
El medio contiene Glucosa, Sacarosa o Manitol, además de un indicador REDOX, que es rojo de fenol el cual vira :
pH Ácido 6.8 (Amarillo)
pH lig. Alcalino 7.4 (Anaranjado)
pH Alcalino (Rojo) * Nota: La prueba no seria
negativa si hubiera gas

12. R e s u l t a d o s d e P r u e b a s B Q .
C a r b o h i d r a t o s
Prueba de Kligler
Sin inocular
Prueba positiva de
Fermentación de
Glucosa
El medio contiene Glucosa, Lactosa, FE2SO4 y un indicador REDOX de Rojo de Fenol
pH Ácido 6.8 (Amarillo)
pH lig. Alcalino 7.4 (Anaranjado)
pH Alcalino (Rojo) Nota: Si hay crecimiento, la prueba de fermentación de
glucosa y lactosa se toman como positivas
Prueba positiva de
Fermentación de
Glucosa y Lactosa Prueba positiva de la
formación de Gas y de
H2S Prueba positiva de la
formación de H2S

13. C a r b o h i d r a t o s
Prueba de Fermentación de Carbohidratos
Prueba de Rojo de Metilo
Fermentación Ácido Mixta
Los productos finales son ácidos orgánicos
(ácidos fórmico, acético, láctico o succínico)
que provocan un descenso del pH del medio.
Puede detectarse por el vire del indicador de
rojo de metilo que permanece amarillo por
encima de pH 5,1 y rojo por debajo de 4,4.
Positivo: Rojo en la superficie del medio (pH=4.4)
Negativo: Amarillo o anaranjado (pH=6)
Nota: Si una bacteria resultó ser RM positiva el
resultado con VP debe ser negativo
R e s u l t a d o s d e P r u e b a s B Q .

14. C a r b o h i d r a t o s
Prueba de Fermentación de Carbohidratos
Prueba de Voges-Proskauer
Fermentación Butilén-Glicólica
Los productos finales son compuestos como el
butanodiol y el etanol, produciéndose Acetoína
como intermediario que podrá ser detectado
añadiendo al medio KOH y alfa-naftol
(Reactivo de Voges-Proskauer) que al incubar la
suspensión reaccionará con la Acetoína
produciendo un color rojo característico en su
superficie.
Prueba positiva
Nota: Si hay un cambio de coloración a anaranjado, la prueba se considera
positiva ya que hay bacterias que producen cantidades de acido muy bajas.
La prueba será negativa sino hay aparición del vire de color y permanece
amarillo.
R e s u l t a d o s d e P r u e b a s B Q .

15. C a r b o h i d r a t o s
Prueba de utilización de Ácidos Orgánicos
Agar Citrato de Simmons
Sin Inocular Negativo
Positivo por
crecimiento
Positivo por
alcalinización
Positivo por
crecimiento
Azul: Positivo por alcalinización
Verde: Negativo sin vire
R e s u l t a d o s d e P r u e b a s B Q .
El indicador REDOX, es Azul de Bromotimol el cual
tiene como cambios de coloración:
• pH 6.0 : Amarillo
• pH 6.9 : Verde
• pH 7.6 : Azul

16. C a r b o h i d r a t o s
Prueba de utilización de Ácidos Orgánicos
Caldo Malonato
Azul: Positivo
Verde: Negativo
En el caldo Fenilalanina-Malonato se determina la capacidad
que tiene una bacteria de desaminar la fenilalanina y de
utilizar el Malonato como única fuente de carbono.
La bacteria puede utilizar el Malonato de sodio como única
fuente de carbono con la consiguiente alcalinidad del medio o
puede desaminar la fenilalanina produciendo acido
fenílpirúvico acidificando el medio.
El indicador REDOX, es Azul de Bromotimol el cual tiene como
cambios de coloración:
• pH 6.0 : Amarillo
• pH 6.9 : Verde
• pH 7.6 : Azul
R e s u l t a d o s d e P r u e b a s B Q .

17. B i b l i o g r a f í a y R e f e r e n c i a s
Atlas de Pruebas Bioquímicas 2003 (Manual de Practicas). Universidad Nacional Autónoma de México.
Brock, Microbiología, Pearson Hall 10° Ed. Cap. 17 Diversidad metabólica. Cap.22 Microbiología e Inmunología Médica.
McFaddin J.F. Pruebas bioquímicas para la identificación de los microorganismos; Panamericana
C a r b o h i d r a t o s