El documento explora la identificación de salmonellas, abordando sus características culturales, métodos de diagnóstico tradicionales y técnicas modernas como PCR. Se describen los requerimientos nutricionales y los procedimientos de cultivo para el aislamiento y la confirmación bioquímica de salmonellas. Además, se discuten ventajas y desventajas de métodos serológicos y moleculares en la detección de infecciones.

1. TEMA: IDENTIFICACION DE SalmonellaSAUTORACAROLINA VILLAVICENCIO

2. Características Culturales: requerimientos nutricionales ideales El género Salmonella, familia Enterobacteriaceae, bacilos Gram negativos anaerobios facultativos. Glucosa-positivo

3. Catalasa - positivo

4. Oxidasas - negativo

5. Lactosa-negativas

6. Sacarosa-negativas

7. Ureasa-negativas

8. Indol-negativas,

9. H2S-positivas

10. Lisinodescarboxilasa -positivas

11. Citrato y TSI

12. Xilosa - negativaActuales Técnicas de Diagnóstico para la identificación de salmonellasEl aislamiento y la identificación de Salmonella se realizan mediante métodos de cultivo tradicionales:Pre-enriquecimiento en medio líquido no selectivo;Enriquecimiento en medios líquidos selectivos;Aislamiento diferencial sobre medios sólidos selectivos;Confirmación bioquímica de las colonias sospechosas;Todos los medios se incuban en aerobiosisa 37ºC y deben examinarse a las 24 horas. La utilización de sustratos bioquímicos es la base para la identificación del Género Salmonella.Según el método bacteriológico de cada laboratorio las colonias pueden ser inicialmente seleccionadas por algunas pruebas bioquímicas antes de proceder a su biotipificación completa.La confirmación de estas colonias requiere tiempo y la mayoría de ellas no son Salmonella, sino otros géneros relacionados, tales como Proteuso Citrobacter.Métodos rápidos (normalmente tras preenriquecimiento y enriq.) ISO-GRID Detección con sondas DNA ELISA, inmunofluorescenciaImpedancia

13. Preenriquecimiento: Agua peptonadaIncubar a 35º C durante 24 h.Peptona, nutrientes necesariosCloruro de sodio, el equilibrio osmótico. verde de malaquita y el cloruro de magnesio, favorecen el crecimiento de Samonella. El fosfato de potasio controla el pH del medio.Enriquecimiento: Caldo Rapapport VassiliadisIncubar 24 h a 42 º C.

14. Las peptonas proporcionan los nutrientes necesarios para el desarrollo del microorganismo.

15. El cloruro de sodio ayuda a mantener el equilibrio osmótico.

16. El verde de malaquita y el cloruro de magnesio, favorecen el crecimiento de Samonella.

17. El fosfato de potasio controla el pH del medio.Aislamiento O Detección en Agares Selectivos :Agar XLD Incubar 24 h a 37.Desoxicolato de sodio, inhibe a los MO Grampositivos.Xilosa es fermentada por casi todos los microorganismos entéricos a excepción de Shigella.La lactosa y la sacarosa inducen la producción de ácido por los coliformes.El tiosulfato de sodio y el citrato férrico de amonio, sistema indicador de la formación de S2H produciendo un precipitado negro en el centro de las colonias.El género Salmonella desarrolla colonias rojas con centro negro por la producción de ácido sulfhídrico.

18. E.M.B. AgarAislamiento selectivo de bacilos Gram-negativos.pH 7.2Diferenciación de organismos capaces de utilizar la lactosa y/osacarosa,Indicadores eosina y azul de metileno, ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram-positivas.peptona aportan los nutrientesLactosa, hidrato de carbono fermentable, Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia

19. Salmonella ShigellaAgarAislamiento de Salmonella spp. Y de algunas especies de Shigellaspp.Sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Grampositivas, de la mayoría de coliformes y Proteusspp.Diferencial , fermentación de lactosa, y a la formacióndeácidosulfhídricoapartirdeltiosulfatodesodio.

20. Identificación bioquímica:2 colonias típicas sospechosas, bien aisladas de cada placa. Transferir con un asa cada colonia seleccionada a la siguiente serie de tubos.Agar TSI:Sembrar por picadura en el fondo y por estría en la superficie.Agar LIA: Sembrar por picadura en el fondo y por estría en la superficie.Agar Citrato de Simmons: Sembrar por picadura el fondo y por estría el la superficie.Caldo urea: Inocular el caldo.Incubar a 35o C por 24 h.

21. Identificación bioquímica:Agartriple azúcar de hierro TSIDiferenciación de Enterobacterias, capacidad para utilizar la glucosa, lactosa y sacarosa Formación de sulfuros.La fermentación de la lactosa y sacarosa se observa en la superficie y de la glucosa en el fondo, con formación de ácido que se manifiesta por cambio de color del indicador Rojo de fenol que vira de anaranjado rojizo a amarillo.La combinación del citrato férrico de amonio y tiosulfato de amonio permite la detección de sulfuro de hidrogeno por la formación de un precipitado negro.

22. Identificación bioquímica:Agarlisina descarboxilasa LIALa peptona de gelatina, soporte de crecimiento.Extracto de levadura, la fuente de vitaminas necesarias.Dextrosa, el carbohidrato fermentable.Se observa la fermentación de glucosa, producción de ácido sulfhídrico, la descarboxilación u desaminación de la lisina.Los MO tienen enzima descarboxilasa, descarboxilan el aminoácido lisina a cadaverina (amina primaria, liberando CO2) , debido a la alcalinidad, el pH se modifica con los siguientes resultados: POSITIVA si la coloración en el fondo se observa morada o violeta-púrpura.NEGATIVA si la coloración en el fondo es amarilla y la superficie permanece del color del medio, ya que solo hay fermentación de glucosa.La desaminación de la lisina a ácido cetocarbónico, este forma compuestos pardo-rojizos en el pico de flauta del medio con la sal de hierro y por la acción del oxigeno.La formación del ácido sulfhídrico da una coloración negra debida al sulfuro de hierro producido.

23. Agar Citrato de Simmonsidentificación de Enterobacterias, basándose en el citrato como única fuente de carbono.El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico del medio.Cuando las bacterias utilizan el citrato, el medio se alcaliniza y cambia de color inicial verde (neutro), que esta dado por la presencia de azul de bromotimol a color azul (alcalino, prueba positiva)La reacción negativa , ausencia de crecimiento y no hay cambio de color.

24. Identificación bioquímica:Caldo ureaUrea como fuente de carbono.La enzima ureasa hidroliza la urea en amoniaco y anhídrido carbónico, ante la variación del pH por la alcalinización el indicador Rojo Fenol, vira de amarillo claro a ligeramente rosado o rosa mexicano.Si los nutrientes suministrados por el extracto de levadura se consumen antes que la bacteria muestre crecimiento no podrá determinarse con exactitud su capacidad de hidrolizar urea.Pero si es capaz de hidrolizar la urea, pero no utilizar el amoniaco como fuente de nitrógeno, no se produce crecimiento y puede dar un falso negativo.

25. Actuales Técnicas de Diagnósticoy Nuevo Sistema con PCR…Método serológico rápido utilizando sangre total y un antígeno coloreado en una prueba rápida de aglutinación en placa, aunque las infecciones identificadas mediante este método deben ser confirmadas mediante una técnica bacteriológica clásica. También existen métodos de aglutinación, tales como las técnicas de ELISA, principalmente usada para detectar a S. Enteritidis. La ventaja de los exámenes serológicos es que se detecta la persistencia de los anticuerpos IgGcirculantes, aunque el principal inconveniente es que las concentraciones séricas de IgGpueden ser bajas al principio de la infección y por ende indetectables, mientras que la excreción fecal es elevada. Otra ventaja de la prueba de ELISA consiste en su facilidad de aplicación para la detección en gran escala de aves infectadas.Este enfoque ha sido reconocido por la Unión Europea y la OMS para S. Typhimurium y S. Enteritidis. Nuevo Método de Detección MolecularLa técnica molecular basada en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR, delinglésPolymerase Chain Reaction) diferencia de los métodos tradicionales, que requieren 6 o 7 días para dar un resultado definitivo, por el método de PCR esto mismo se logra en sólo 1 a 3 días, dependiendo de diversas modificaciones en el protocolo de trabajo.

26. Nuevo Sistema con PCRUn método rápido método aplicable a la detección e identificación de Salmonella y de otros patógenos. Además, las cepas carentes de antígenos somáticos (O) y/o flagelares (H) (cepas rugosas), que sólo son reconocidas como Salmonella spp. por el método tradicional de serotipificaciónpueden ser identificadas mediante PCR, debido a que esta técnica detecta secuencias específicas de DNA y no es alterada por variaciones fenotípicas, que se pueden evidenciar por patrones bioquímicos.

27. GRACIAS