El rastro del ADN. El Destino delos ROMANOV

1. Serie: "El rastro del ADN"
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1. El destino de los Romanov
Introducción
Restos humanos, que podrían pertenecer a los miembros de la última familia real rusa-
Zar Nicolás II de Rusia, Zarina Alexandra y sus hijos- asesinados por los bolcheviques
en 1918, fueron encontrados cerca de la ciudad de Yekaterinburg en los Urales, Rusia
Central. Dichos restos fueron asignados a la familia del zar Nicolás II, basándose en
datos históricos.
En 1991, el gobierno autorizó una excavación oficial supervisada por la Chief Forensic
Medical Examiner of Russian Federation.
La fosa, de aproximadamente 1.6 m x 2.1 m y menos de 1 m de profundidad, contenía
restos de esqueletos humanos. Muchos de los huesos estaban muy dañados, pero a
pesar de eso fue posible reconstruir nueve cuerpos. Todos los cuerpos mostraban
rastros de violencia y de tortura.
Esto coincide con la información que se tenía acerca de lo sucedido entre la noche del
16 de julio de 1918 y unos días después, cuando los integrantes de la familia real rusa-
Zar Nicolás II, Zarina Alexandra, sus hijas Olga, Tatyana, María y Anastasia y su
único hijo, Alexei- fueron llevados junto con tres de sus sirvientes y el médico de la
familia, Evgeny Botkin, a la prisión, y fueron fusilados por el escuadrón Bolchevique.
Los cuerpos debían ser transportados a una mina. Como en el trayecto se descompuso
el camión, la fosa fue cavada al costado de la ruta. Luego, se arrojó ácido sulfúrico
para evitar la identificación de los cuerpos.
Esta versión había sido aceptada debido a las evidencias recolectadas por el
investigador Nikolai Sokolov. De todos modos, los cuerpos de la familia Romanov nunca
fueron encontrados, y nadie había podido verificar dicha versión.
Expertos forenses llevaron a cabo una investigación llegando a la conclusión de que
era muy probable que algunos de los esqueletos exhumados de la fosa, pertenecieran
a miembros de la familia Romanov. De ser así, los restos encontrados eran los
pertenecientes al Zar, la Zarina, y tres de sus hijos, mientras que los dos cuerpos
ausentes corresponderían a Alexei y una de las hijas. En 1992 se hizo un pedido oficial
para llevar a cabo análisis de DNA y así verificar la autenticidad de los restos
encontrados.
Resultados
El objetivo de la investigación era comparar el DNA extraído de los huesos
encontrados con parientes de la familia Romanov, para reforzar la autenticidad de los
restos, hasta ese momento no identificados.
Se utilizaron dos estrategias para analizar el DNA:
1. Tipificación comparativa de los microsatélites nucleares del DNA de los restos.
2. Amplificación de DNA mitocondrial a partir de DNA de los huesos.

2. Serie: "El rastro del ADN"
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Dado que el DNA mitocondrial es heredado de madre a hijos, las variaciones en la
secuencia de este DNA puede ser usado para determinar el linaje materno de los
individuos investigados.
El primer paso seguido fue la determinación del sexo de los esqueletos, usando el
polimorfismo del DNA cromosómico X/Y ( Amelogenina). A pesar que el DNA extraído
se encontraba en malas condiciones ya que estaba degradado y en baja concentración,
todas las muestras fueron amplificables.
Análisis del DNA cromosómico, test de sexo.
La identificación de sexo de las muestras de huesos fue determinada por la
amplificación de un segmento del gen de la amelogenina de los cromosomas X-Y. Los
análisis se llevaron a cabo a partir de 20 pg de DNA extraído de cada uno de los 9
esqueletos. Con este método se determinó que 4 de los cuerpos pertenecían a
hombres y 5 a mujeres.
Análisis de los STRs.
Se usaron análisis de DNA genómico para establecer si había relación familiar entre
los 9 cuerpos exhumados.
Se amplificaron 5 loci STRs tetraméricos: HUMTH01, HUMVWA31, HUMF13A1,
HUMFES/FPS y HUMACTPB2 de cada uno de los 9 esqueletos. Para este análisis se
usaron entre 40 y 80 pg de DNA. Todas las muestras fueron analizadas como mínimo
4 veces, y 6 veces aquellas que aparentemente eran homocigotas.
Según los resultados de estos análisis, 5 de los 9 esqueletos pertenecían al grupo
familiar. Si se trataba de la familia Romanov, entonces los cuerpos de una de las
princesas y de Alexei estaban ausentes.
Si bien los resultados de los análisis corroboraban que se trataba de una familia, no
había ninguna evidencia concreta que asegurara que se trataba de los Romanov. Para
probar que se trataba de la familia Romanov era necesario comparar las secuencias
de DNA mitocondrial con descendientes de la familia.
Tabla 1: Genotipos STR de los 9 esqueletos
1. Sirviente
2. Doctor
3. Hijo
4. Zar
5. Hijo
6. Hijo
7. Zarina
8. Sirviente
9. Sirviente

3. Serie: "El rastro del ADN"
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Análisis de DNA mitocondrial
Se eligió este método porque al haber un gran número de copias de mtDNA por célula,
es más probable que perdure períodos prolongados de tiempo, comparado al DNA
cromosómico. Además, puede ser usado para rastrear herencia materna, y es la única
opción si hay muchas generaciones entre los antecesores y los descendientes vivos.
Se llevaron a cabo dos amplificaciones a partir de los extractos de DNA de cada uno
de los 9 esqueletos. Luego se realizó la secuenciación. Comparaciones entre las
muestras de los 9 cuerpos indicaban que 5 de las muestras diferían en la posición de
4 nucleótidos, mientras que el resto de las muestras correspondientes a la zarina y
los tres hijos eran idénticas. Además, esta última secuencia era idéntica a la del
Duque de Edimburgo, el nieto de la hermana de la zarina Alexandra. Este resultado
era el esperado si los restos eran auténticos, dado que el mtDNA es heredado de
madre a hijos.
La secuencia del mtDNA del zar fue comparada con 2 descendientes de la rama
materna. Estas secuencias eran idénticas, con excepción de un nucleótido.
Conclusión
La significación de la evidencia del DNA no puede ser considerada sin tener en cuenta
la evidencia antropológica e histórica la cual dió importante información acerca de la
probabilidad de que los restos pertenecieran a la familia Romanov.
La evidencia aportada por los análisis de STR avaló la hipótesis de que los cuerpos 3
a 7 eran una familia, y los datos obtenidos por el análisis del mtDNA también aportó
evidencias para confirmar la hipótesis que sostenía que la madre y tres de los hijos
estaban presentes.
Una vez más, los análisis de DNA aportaron evidencias fuertes como para afirmar que
los restos encontrados eran los correspondientes a la familia del Zar Nicolás II de
Rusia.
Sistema 1 2 3 4 5 6 7 8 9
HUMVWA31 14-20 17-17 15-16 15-16 15-16 15-16 15-16 15-17 16-17
HUMTH01 9-10 6-10 8-10 7-10 7-8 8-10 8-8 6-9 6-6
HUMF13A1 6-16 5-7 5-7 7-7 5-7 3-7 3-5 5-7 6-7
HUMFES/FPS 10-11 10-11 12-13 12-12 12-13 12-13 12-13 8-10 11-12
ACTBP2 ND 11-30 11-32 11-32 11-36 32-36 32-36 ND ND