ensayos confirmatorios

1. Unidad III:
Pericias Químicas de Manchas de Sangre
Parte 328/03/2015 1

2. Ensayos confirmatorios
1. Ensayo del Luminol
2. Pruebas microscópicas
3. Identificación espectroscópica
4. Identificación espectrofotométrica
5. Identificación cromatográfica
6. Transformación de porfirinas
7. Ensayos microcristalográficos
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3. 1. Ensayo del Luminol
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4. 1. Ensayo del Luminol
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5. 1. Ensayo del Luminol
Esta técnica es altamente sensible
a la presencia de manchas que han
sido limpiadas.
También se emplea para visualizar
huellas sanguinolentas de zapatos
dejadas en la escena del delito.
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6. 1. Ensayo del Luminol
• derivado del ácido ftálico (3-aminonaftilhidracina)
• sólido verdoso poco soluble
• reacción de quimioluminiscencia con
peróxidos en presencia de complejos de
Fe como catalizadores.
• usada para la visualización de manchas
tan diluidas que son invisibles al examen
ocular directo
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7. 1. Ensayo del Luminol
Este producto puede ser preparado en
el laboratorio ó bien adquirido en su
preparación comercial.
Laboratorio: presenta la dificultad de
ser difícil de preparar y estabilizar.
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8. 1. Ensayo del Luminol
Método
Altamente sensible
Específico
Permite tratar rápidamente grandes
superficies y localizar manchas
invisibles al examen ocular directo.
No interfiere en la ejecución de
ensayos similares.
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9. 1. Ensayo del Luminol
Se aplica por aspersión sobre la zona
donde se cree puede existir un rastro
de sangre, de donde viene su principal
ventaja: se puede aplicar en extensas
superficies, detectando sangre hasta a
nivel de trazas.
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11. 28/03/2015 11

12. 28/03/2015 12

13. es una prueba inmunocromatográfica de confirmación de
la presencia de trazas de sangre humana.
Se comercializa como complemento de BLUESTAR®.
Es una prueba muy simple de usar.
DOS ó TRES minutos son suficientes para comprobar,
si la traza revelada por BLUESTAR® es o no sangre
humana.
La hemoglobina humana (hHb), reacciona con un
conjugado compuesto de partículas azuladas y
anticuerpos monoclonales de hemoglobina
humana.
Hexagon OBTI®
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14. 2. Pruebas microscópicas
• Puede usarse aún en manchas secas
• Método:
a.Tinción con colorantes hemáticos
apropiados ( MG-G)
b.Observación al MO.
Dificultad: mamíferos: carnero, vacuno,
equino.
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15. 2. Pruebas microscópicas
MO sangre
Pruebas de aglutinación ( grupo y factor:
GR intactos).
humana
animal
menstrual
vaso
mamífero
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16. 3.Identificación espectroscópica
• Método: comparación visual con un
patrón
• Coloración de la hemoglobina en medio
ácido
Hb hematina +
HCl
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17. • Método de Sahli:
Reactivo: HCl = 11,2 ml
H2Od csp 1000 ml
reactivo
muestra
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18. 4.Identificación espectrofotométrica
• Fundamento:
Hb MetaHb CianmetaHb
NaHCO3= 1g
KCN = 0,05 g
FeCNK= 0,2 g
H2Od csp= 1000ml
reactivo de Drabkin
reactivo
muestra
Filtro verde
540 nm
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19. 5. Identificación cromatográfica
• Cromatografía sobre papel.
• Técnica resolutiva, específica,práctica
y sensible.
• No interfieren: citocromos,herrumbre,
oxidantes directos, sales metálicas
• Peroxidasa vegetales: se destruyen
por tratamiento térmico a 100º - 10 ‘
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20. 5. Identificación cromatográfica
Cromatografía en capa delgada
Materiales: Placas de vidrio
Placas de Silicagel G
Líquido resolutivo: MetOH- AcAc= 99:1
Revelador: mezclar al momento de usar,
volúmenes iguales de sol. de bencidina
(acética o alcohólica) +H2O2 10 Vol
Técnica: se recomienda usar placas
compradas.
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21. 7.Ensayos microcristalográficos
a. Modificación de Bertrand
MgCl2= 1g
Glicerol= 5ml
AcAc g= 20 ml
H2O d= 1ml
Reactivo
flamear
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22. 7.Ensayos microcristalográficos
a. Modificación de Bertrand
MgCl2= 1g
Glicerol= 5ml
AcAc g= 20 ml
H2O d= 1ml
Reactivo
flamear
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23. 5. Identificación cromatografica
Mancha: tratarla con 0,5 ml de H2Od,
macerar hasta obtención del pigmento
hemático
Machas antiguas: HCl 0,02N: hematina
ácida.
Cromatografía ascendente
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24. 6. Transformación de porfirinas
Luz de Wood: filtro azul
fluorescencia
mancha
semen
H2SO4 c
fluorescencia
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25. 7.Ensayos microcristalográficos
Fundamento: obtener derivados de
descomposición de la Hb de forma y
color definidos realizando tratamientos
adecuados con reactivos H+ o HO-
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26. 7.Ensayos microcristalográficos
•Método de Teichmann: al tratar la
muestra de sangre con AcAc aparecerán
cristales castaños característicos
60 º
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27. 7.Ensayos microcristalográficos
a. Modificación de Bertrand
MgCl2= 1g
Glicerol= 5ml
AcAc g= 20 ml
H2O d= 1ml
Reactivo
flamear
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28. 7.Ensayos microcristalográficos
b. Modificación de Nippe
KCl= 0,1g
KBr= 0,1g
KI=0,1g
AcAc=100ml
Reactivo
flamear
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29. 7.Ensayos microcristalográficos
c. Modificación de Bruno y Ross
FNa = 0,056g
AcAcg = 100ml
H2O d= 1ml
Reactivo
flamear
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