1. CITOMETRIA DE FLUJO

2. FSC
90º
2- 4º
Columna
de muestra
Meeting point
Láser
Amplificación
digitalización
Representación
y Analisis
Flujo

3. Figura 1) 4.

5. • Dispersión:
*FSC: Tamaño
*SSC: Complejidad.
• Fluorescencia:
• Uniones AG-AC
• Marcaje con fluorocromos.
• Poblaciones celulares
detectadas simultáneamente.
PARÁMETROS

7. FLUOROCROMOS
• Absorben luz a una Emiten a otra.
• Espectros de excitación y de emisión.
• Uso Tipo de láser y su long.de onda.
• Corto estado de excitación.
• Fotoestables.
• Alto rendimiento cuántico.

8. FLUOROCROMO DESCRIPCION
FITC Isotiocianato de Fluoresceína
PE Ficoeritrina
PerCP Proteína Clorofila Peridinina
TRITC Isotiocianato de tetrametil rodamina 540---570
PEC Ficoeritrina cianina
RT Rojo Texas 596----615nm
PC Ficocianina 620---650nm
APC Aloficocianina 650-----660nm
TRICOLOR TRICOLOR 540--------570nm
ALEXA-FLUOR FLUOROCROMO : Molecular Probes

9.  Sistema de flujo
 Dispersión de la luz
 Fluorescencia
 Separación y detección de la luz
 Amplificación
 Corrección de errores: solapamiento espectral y
formación de dobletes
 Digitalización y almacenamiento de la información

10. SISTEMA DE ABSORCION DE MUESTRA
AIRE
MUESTRA
FLUJO
MUESTRA

11. CÁMARA
DE FLUJO
FSC
90º
Columna
de muestra
Luz dispersada lateralmente
y luz fluorescente, a = 90º
Fluido envolvente
Luz incidente
Luz dispersada hacia delante, a=2- 4º

12. Luz dispersada a 90 grados
(Side SCattered light )
Detector FSC
Detector de 90º SSC
Laser

13. DETECCION DE LUZ DISPERSADA HACIA DELANTE (FORWARD SCATTERED
LIGHT, FSC)
FSC
SSC
El detector de FSC convierte luz dispersada hacia delante en un
pulso de voltaje proporcional al tamaño de la célula/particula

14. DETECCION DE LUZ DISPERSADA LATERALMENTE (SIDE
SCATTERED LIGHT, SSC)
FSC
SSC
El detector de SSC convierte la luz dispersada lateralmente en un pulso
de voltaje proporcional a l contenido en orgánulos membranosos
(granularidad)

15. Laser
DETECTORES DE FLUORESCENCIA
Freq
Detector
Fluorescencia
Detector de fluorescencia
(PMT3, PMT4 etc.)

16. Fluorescencia
FSC
FL-1
FL-2

17. FLUORESCENCIA
• Proceso por el que una molécula absorbe luz, aumenta su energía y
vuelve al estado basal emitiendo un fotón.
• Parte de la energía se pierde en las transiciones entre los distintos
estados por tanto el fotón emitido tiene menos energía (mayor longitud de
onda) que el que fue absorbido.
t (ms)
1<2
 1
 2

18. CITOMETROS FLUJO
• Citómetros con 1 láser: 2 D (dispersión) y 3 Fl
(fluorescencia)
• Citómetros de 2 láser: 2D y 4 Fl
TIPOS DE LASER
• Láser Violeta 405 nm
• Láser Azul 488 nm (Argón)
• Láser Verde 543 nm
• Láser Rojo 633-635 nm (He-Ne)

23. • Múltiples marcajes.
• Analizar un elevado numero de
partículas en un corto periodo de
tiempo.
• Cuantificación de la actividad
antigénica.
• Mayor sensibilidad y objetividad.
• Análisis de poblaciones celulares
• Almacenamiento de la información
para análisis posteriores.
VENTAJAS