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Enok Hedsaid Lara Rosey
Características Taxonómicas.
• Bacilos cortos
• Gram +
• Asporógenos
• Catalasa Positivos
• Anaerobios Facultativos
• Ocasionalmente toman forma cocoide o
  células aisladas de 10µm de longitud




                         • Colonias color gris-azulado, azul-verde con
                            iluminación de Henry en medio LMP
                         • Borde Circular
                         • Elevación Concava
Características de crecimiento y supervivencia.
• Supervivencia en condiciones de congelación

• Supervivencia y crecimiento entre -1°C a 50°C

• Resistente al calor cuando se encuentra a altas concentraciones (105 y 106
  UFC/g o ml)

• Resistencia a la irradiación gamma similar a otras bacterias vegetativas
  Gram-positivas (ICMSF, 1980) de 0.34-0.5 KGy

• Crecimiento con una actividad de agua de 0.90 a 30°C
• Intervalo de pH de 4.6 a 9.2

• Su desinfección es eficaz a concentraciones de 200ppm de cloro para
  hortalizas

• En condiciones aeróbicas, microaerofilicas y anaerobias se observan
  tiempos de generación parecidos
Determinación de Listeria monocytogenes.1


                             25 ml o g                     Homogenizar




    Preparación de la
                                         225 ml de Caldo                    Incubar 48h a 30º
     muestra, NOM-
                                               EB                                   C
     110-SSA1-1994




           Identificación:                                                                      Resiembra en Medio de cloruro
    LMP.- Luz a 45º colonias color                                                              de litio feniletanol-moxolactam
           blanco o azul.                                                                        (LMP) y Medio base Oxford
     OXA.- Colonias negras con                                                                                 (OXA)
             halo negro
                                                  Incubar LMP a
                                                 30ºC por 24 a 48h
                                                    y OXA 35ºC
                                                   mismo tiempo

                  1

1Norma   Oficial Mexicana NOM-143-SSA1-1995, Bienes y servicios. Método de prueba microbiológico para alimentos. Determinación de
Listeria monocytogenes. Secretaria de Salud. México 1997.
1
                                 Incubar 35ºC por
                                       24h
    Seleccionar 5
        colonias
    resembrar en
       Agar soya
     tripticaseína
        (ASTEL)




                                                     Identificación:
                                                     Bacilos cortos
                                                     con movilidad
                                                        rotatoria


Realizar preparación en fresco      Observar con    Hasta este punto
 de las colonias sospechosas         objetivo de     se reconoce a
  en solución salina al 0,85%        inmersión        Listeria ssp.
Identificación:
                                                              + Inmediata presencia de
                                                                      burbujas
                                                               - Ausencia de burbujas




Tomar una muestra de los     Emulsificar la muestra de cepa
 cultivos identificados de         con Peróxido 3%
          Listeria




                                  La Listeria se presenta
                                    como bacilo corto
                                      Gram positivo


    Realizar tinción Gram
       de cultivos con
   antigüedad de entre 16
            y 24h
Observar reacción
                                                                                hemolítica




Cuadricular una placa    Inocular por          Incubar 48h a           L. monocytogenes y L. seeligeri tienen
  de agar sangre de        picadura                35 C                actividad hemolítica presentando una
carnero al 5% en 20 a                                                    zona clara alrededor de la picadura
     25 cuadros




                                                                                          Identificación:
                                                           Lectura:                     + Coloración roja
                                                      Agregar 0.2ml de                   - Presencia de
                                                      reactivo A y 0.2ml                coloración roja 1h
                                                        de reactivo B.                     después de
                                                                                         adición de Zinc.

  Inocular tubos de       Incubar 35 C por 5
ensaye que contienen             dias
 caldo nitratos con la
   cepa de Listeria
Observar crecimiento.




 Inocular tubos de           Incubar 7 días a        Las especies de Listeria son
   medio SIM por          Temperatura ambiente.      móviles con crecimiento de
     picadura                                                paraguas.




                                                                 Identificación:
                                                              Prueba + coloración
                                                                   amarrilla.



Inocular tubos de caldo           Incubar 7 a 35 C
     purpura para
   fermentación de
    carbohidratos
Observar la sinergia
                                                                              entre las hemolisinas
                                                                             de S. aureus, R. equi y
                                                                                      Listeria



Sembrar una estría de      Sembrar en líneas        Incubar de 24 a 48h. A
S. aureus y otra de R.     perpendiculares las               35 C
    equi paralela;        cepas de Listeria sin
                         tocar las otras estrías.
Especies de Listeria y
                            sus diferencias.
  Especie de      Fermentación de Carbohidratos        Prueba CAMP      Hemólisis β
   Listeria
                 Manitol    L-ramnosa     D-xilosa      SA       RE

monocytogenes        -           +            -         +         -          +

   Innocua           -          +/-           -          -        -          -

 welshimeri          -          +/-          +           -        -          -

   seeligeri         -           -           +          +         -          +

   Ivanovii          -           -           +           -        +          +

   murrayi           +          +/-           -          -        -          -
   (grayi)
Fermentación de azucares y formación de gas, Fenómeno Christie, Atkins, Munch-
Petersen y Acción β-Hemolítica en agar sangre.
Listeriosis.

      Es una enfermedad infecciosa grave que afecta
al hombre cuando consume alimentos contaminados
con la bacteria Listeria monocytogenes, que se
encuentra con frecuencia en el suelo y en aguas
contaminadas . La enfermedad esta reconocida como
un importante problema de salud publica, poco común
pero con una alta tasa de mortalidad
Listeriosis.

• Mujeres embarazadas
• Personas con inmunidad debilitada por tratamientos
  específicos (cáncer, sida, utilización de corticosteroides)
• Enfermos de Leucemia
• Diabéticos, cirróticos, asmáticos y ulceroso gástricos; son el
  grupo de menor riesgo
• Ancianos
• Personas sanas que se predisponen a tener algún riesgo
  cuando consumen antiácidos de forma continua y excesiva
Listeriosis.


      • Enfermedad relativamente rara
      • Altas tasas de letalidad (20%-30%)
      • Afecta principalmente a sectores vulnerables de la población
      • Microorganismo altamente distribuido en el medio ambiente
        y alimentos
      • Enfermedad asociada a productos listos para el consumo*




*Conforme a la definición del Codex (CCA/GL22-1997) los alimentos listos para el consumo incluyen todo alimento (incluyen bebidas) que se
consume normalmente en su estado crudo o todo alimento manipulado, elaborado, mezclado, cocido o preparado de otra manera de forma que
se consume normalmente sin una elaboración ulterior.
Listeriosis.

Alimentos vehículo de algunos brotes importantes de Listeriosis:
• Col cruda. Canadá 1981
• Queso fresco tipo mexicano. Estados Unidos 1984
• Queso de pasta blanda vacherin Mont d’ Or. Suiza 1987
• Hot Dogs. Estados Unidos 1999
• Fiambre de lengua de cerdo. Francia 2000

También se asocia a la L. monocytogenes con:
• Helados
• Vegetales crudos
• Salchichas fermentadas
• Pollo crudo y cocido
• Carnes y pescados crudos
• Pescado ahumado
• Alimentos deficientemente cocidos
• Alimentos expuestos a contaminación después de su elaboración (leche
  pasteurizada, quesos)
Listeriosis.


• Los síntomas suelen presentarse después de la primera semana de la
  infección
• Puede causar Meningitis, Meningoencefalitis o septicemias, a veces
  mortales
• Fiebre
• Dolor muscular
• En ocasiones se presenta nauseas y diarrea
• Dolor de cabeza, rigidez de cuello, confusión, perdida de equilibrio y
  convulsiones; cuando la infección se extiende al sistema nervioso
Listeriosis.


• Signos de leve infección (fiebre ligera)
• La enfermedad puede transmitirse al feto por medio de la
  placenta
• En el segundo o tercer trimestre del embarazo se puede
  presentar un aborto espontaneo, parto prematuro, muerte
  del feto o complicaciones de salud del recién nacido
Listeriosis.

•   Separar alimentos crudos de origen animal de los que están listos para el consumo
•   Limpieza y desinfección periódica de maquinaria y utensilios
•   Mantener la temperatura de refrigeración por debajo de los 5°C
•   Cocer a la perfección los alimentos de origen animal
•   Recalentar los alimentos hasta la emisión de vapor (70°C-75°C)
•   Evitar contaminación cruzada
•   Lavar minuciosamente los vegetales
•   Consumir leche y productos lácteos que sean previamente pasteurizados

Para las personas con alto riesgo de contraer Listeriosis se recomienda:

• No consumir alimentos listos para el consumo
• Lavar las manos con agua caliente y jabón después de manipular cualquier
  alimento
• No consumir quesos de pasta blanda, azules, o frescos sino han sido elaborados
  con leche pasteurizada
• No consumir pates o productos cárnicos sin tratamiento térmico previo
• No consumir pescados ahumados, sushi, semiconserva, surimi o seviche sin
  ninguna garantía.
Bibliografia.
 The International Commission on Microbiological Specifications for Foods (ICMSF)
  Microbiología de los Alimentos; Características de los patógenos microbianos.
  España, 1998. Ed. Acribia. Pag 165-174

 Pascual, Ma. Del Rosario Anderson. Enfermedades de origen alimentario: su
  prevención. Ed. Diaz de Santos. 2005. Pag 65-68

 Consulta Mixta FAO/OMS de Expertos Sobre la Evaluación de Riesgos Asociados a
  los Peligros Microbiológicos en los Alimentos: Caracterización del Riesgo de
  "Salmonella" Spp. en Huevos y Pollos para Asar y de "Listeria Monocytogenes" en
  Alimentos para el Consumo. Ed. Food & Agriculture Org. 2001. Pag 20

 M, Adams R; M, Moss O. Microbiologia de los Alimentos. España. 1997. Ed.
  Acribia. Pag 234-239

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Caracterización taxonómica y determinación de Listeria monocytogenes

  • 2. Características Taxonómicas. • Bacilos cortos • Gram + • Asporógenos • Catalasa Positivos • Anaerobios Facultativos • Ocasionalmente toman forma cocoide o células aisladas de 10µm de longitud • Colonias color gris-azulado, azul-verde con iluminación de Henry en medio LMP • Borde Circular • Elevación Concava
  • 3. Características de crecimiento y supervivencia. • Supervivencia en condiciones de congelación • Supervivencia y crecimiento entre -1°C a 50°C • Resistente al calor cuando se encuentra a altas concentraciones (105 y 106 UFC/g o ml) • Resistencia a la irradiación gamma similar a otras bacterias vegetativas Gram-positivas (ICMSF, 1980) de 0.34-0.5 KGy • Crecimiento con una actividad de agua de 0.90 a 30°C • Intervalo de pH de 4.6 a 9.2 • Su desinfección es eficaz a concentraciones de 200ppm de cloro para hortalizas • En condiciones aeróbicas, microaerofilicas y anaerobias se observan tiempos de generación parecidos
  • 4. Determinación de Listeria monocytogenes.1 25 ml o g Homogenizar Preparación de la 225 ml de Caldo Incubar 48h a 30º muestra, NOM- EB C 110-SSA1-1994 Identificación: Resiembra en Medio de cloruro LMP.- Luz a 45º colonias color de litio feniletanol-moxolactam blanco o azul. (LMP) y Medio base Oxford OXA.- Colonias negras con (OXA) halo negro Incubar LMP a 30ºC por 24 a 48h y OXA 35ºC mismo tiempo 1 1Norma Oficial Mexicana NOM-143-SSA1-1995, Bienes y servicios. Método de prueba microbiológico para alimentos. Determinación de Listeria monocytogenes. Secretaria de Salud. México 1997.
  • 5. 1 Incubar 35ºC por 24h Seleccionar 5 colonias resembrar en Agar soya tripticaseína (ASTEL) Identificación: Bacilos cortos con movilidad rotatoria Realizar preparación en fresco Observar con Hasta este punto de las colonias sospechosas objetivo de se reconoce a en solución salina al 0,85% inmersión Listeria ssp.
  • 6. Identificación: + Inmediata presencia de burbujas - Ausencia de burbujas Tomar una muestra de los Emulsificar la muestra de cepa cultivos identificados de con Peróxido 3% Listeria La Listeria se presenta como bacilo corto Gram positivo Realizar tinción Gram de cultivos con antigüedad de entre 16 y 24h
  • 7. Observar reacción hemolítica Cuadricular una placa Inocular por Incubar 48h a L. monocytogenes y L. seeligeri tienen de agar sangre de picadura 35 C actividad hemolítica presentando una carnero al 5% en 20 a zona clara alrededor de la picadura 25 cuadros Identificación: Lectura: + Coloración roja Agregar 0.2ml de - Presencia de reactivo A y 0.2ml coloración roja 1h de reactivo B. después de adición de Zinc. Inocular tubos de Incubar 35 C por 5 ensaye que contienen dias caldo nitratos con la cepa de Listeria
  • 8. Observar crecimiento. Inocular tubos de Incubar 7 días a Las especies de Listeria son medio SIM por Temperatura ambiente. móviles con crecimiento de picadura paraguas. Identificación: Prueba + coloración amarrilla. Inocular tubos de caldo Incubar 7 a 35 C purpura para fermentación de carbohidratos
  • 9. Observar la sinergia entre las hemolisinas de S. aureus, R. equi y Listeria Sembrar una estría de Sembrar en líneas Incubar de 24 a 48h. A S. aureus y otra de R. perpendiculares las 35 C equi paralela; cepas de Listeria sin tocar las otras estrías.
  • 10. Especies de Listeria y sus diferencias. Especie de Fermentación de Carbohidratos Prueba CAMP Hemólisis β Listeria Manitol L-ramnosa D-xilosa SA RE monocytogenes - + - + - + Innocua - +/- - - - - welshimeri - +/- + - - - seeligeri - - + + - + Ivanovii - - + - + + murrayi + +/- - - - - (grayi) Fermentación de azucares y formación de gas, Fenómeno Christie, Atkins, Munch- Petersen y Acción β-Hemolítica en agar sangre.
  • 11. Listeriosis. Es una enfermedad infecciosa grave que afecta al hombre cuando consume alimentos contaminados con la bacteria Listeria monocytogenes, que se encuentra con frecuencia en el suelo y en aguas contaminadas . La enfermedad esta reconocida como un importante problema de salud publica, poco común pero con una alta tasa de mortalidad
  • 12. Listeriosis. • Mujeres embarazadas • Personas con inmunidad debilitada por tratamientos específicos (cáncer, sida, utilización de corticosteroides) • Enfermos de Leucemia • Diabéticos, cirróticos, asmáticos y ulceroso gástricos; son el grupo de menor riesgo • Ancianos • Personas sanas que se predisponen a tener algún riesgo cuando consumen antiácidos de forma continua y excesiva
  • 13. Listeriosis. • Enfermedad relativamente rara • Altas tasas de letalidad (20%-30%) • Afecta principalmente a sectores vulnerables de la población • Microorganismo altamente distribuido en el medio ambiente y alimentos • Enfermedad asociada a productos listos para el consumo* *Conforme a la definición del Codex (CCA/GL22-1997) los alimentos listos para el consumo incluyen todo alimento (incluyen bebidas) que se consume normalmente en su estado crudo o todo alimento manipulado, elaborado, mezclado, cocido o preparado de otra manera de forma que se consume normalmente sin una elaboración ulterior.
  • 14. Listeriosis. Alimentos vehículo de algunos brotes importantes de Listeriosis: • Col cruda. Canadá 1981 • Queso fresco tipo mexicano. Estados Unidos 1984 • Queso de pasta blanda vacherin Mont d’ Or. Suiza 1987 • Hot Dogs. Estados Unidos 1999 • Fiambre de lengua de cerdo. Francia 2000 También se asocia a la L. monocytogenes con: • Helados • Vegetales crudos • Salchichas fermentadas • Pollo crudo y cocido • Carnes y pescados crudos • Pescado ahumado • Alimentos deficientemente cocidos • Alimentos expuestos a contaminación después de su elaboración (leche pasteurizada, quesos)
  • 15. Listeriosis. • Los síntomas suelen presentarse después de la primera semana de la infección • Puede causar Meningitis, Meningoencefalitis o septicemias, a veces mortales • Fiebre • Dolor muscular • En ocasiones se presenta nauseas y diarrea • Dolor de cabeza, rigidez de cuello, confusión, perdida de equilibrio y convulsiones; cuando la infección se extiende al sistema nervioso
  • 16. Listeriosis. • Signos de leve infección (fiebre ligera) • La enfermedad puede transmitirse al feto por medio de la placenta • En el segundo o tercer trimestre del embarazo se puede presentar un aborto espontaneo, parto prematuro, muerte del feto o complicaciones de salud del recién nacido
  • 17. Listeriosis. • Separar alimentos crudos de origen animal de los que están listos para el consumo • Limpieza y desinfección periódica de maquinaria y utensilios • Mantener la temperatura de refrigeración por debajo de los 5°C • Cocer a la perfección los alimentos de origen animal • Recalentar los alimentos hasta la emisión de vapor (70°C-75°C) • Evitar contaminación cruzada • Lavar minuciosamente los vegetales • Consumir leche y productos lácteos que sean previamente pasteurizados Para las personas con alto riesgo de contraer Listeriosis se recomienda: • No consumir alimentos listos para el consumo • Lavar las manos con agua caliente y jabón después de manipular cualquier alimento • No consumir quesos de pasta blanda, azules, o frescos sino han sido elaborados con leche pasteurizada • No consumir pates o productos cárnicos sin tratamiento térmico previo • No consumir pescados ahumados, sushi, semiconserva, surimi o seviche sin ninguna garantía.
  • 18. Bibliografia.  The International Commission on Microbiological Specifications for Foods (ICMSF) Microbiología de los Alimentos; Características de los patógenos microbianos. España, 1998. Ed. Acribia. Pag 165-174  Pascual, Ma. Del Rosario Anderson. Enfermedades de origen alimentario: su prevención. Ed. Diaz de Santos. 2005. Pag 65-68  Consulta Mixta FAO/OMS de Expertos Sobre la Evaluación de Riesgos Asociados a los Peligros Microbiológicos en los Alimentos: Caracterización del Riesgo de "Salmonella" Spp. en Huevos y Pollos para Asar y de "Listeria Monocytogenes" en Alimentos para el Consumo. Ed. Food & Agriculture Org. 2001. Pag 20  M, Adams R; M, Moss O. Microbiologia de los Alimentos. España. 1997. Ed. Acribia. Pag 234-239