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Práctica 2. Tinción de Gram

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Práctica 2. Tinción de Gram

  1. 1. Identificar la morfología (coco, bacilo, etc) y tipo de tinción (Gram positiva o Gram negativa) de las cepas proporcionadas.
  2. 2. La tinción de Gram es una técnica diferencial comúnmente empleada en el diagnóstico microbiológico, fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. La mayor parte de las muestras sometidas a examen cuando se sospecha infección bacteriana deben ser extendidas en frotis sobre laminillas de vidrio, teñidas y examinadas en el microscopio. Los reactivos empleados en la tinción de Gram son el cristal violeta (colorante básico), lugol (mordiente), alcohol cetona (decolorante) y safranina (colorante de contraste).
  3. 3. El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la pared celular bacteriana, con ayuda del mordiente (lugol) que refuerza la unión del colorante. Las bacterias Gram positivas, debido a la estructura y composición bioquímica de su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun después del tratamiento con el decolorante conserva el colorante básico, por lo que se observan de color púrpura o violeta al microscopio. Las bacterias Gram negativas pierden el colorante básico cuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular (lo que aumenta la permeabilidad celular), dando como resultado la pérdida del complejo cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razón por la cual estas bacterias se observan de color rojo al microscopio.
  4. 4. Equipo: Microscopio óptico Materiales: •Mechero de Bunsen •Asa bacteriológica •Portaobjetos •Varillas de vidrio (soporte) •Pizeta •Gasas Reactivos: •Cristal violeta •Solución de lugol Muestra: Proporcionada •Alcohol acetona por el profesor (a). •Safranina •Aceite de inmersión
  5. 5. Limpiar el portaobjetos con gasas y encender el mechero. Colocar una gota de solución salina sobre el portaobjetos y luego esterilizar el asa bacteriológica.
  6. 6. Tomar una pequeña muestra de la cepa y diluirla en el portaobjetos. Posteriormente esterilizar el asa.
  7. 7. Fijar la muestra al calor flameándola en el mechero, cuidando no quemar la muestra. Colocar el portaobjetos sobre un soporte.
  8. 8. Cubrir la muestra con cristal violeta. Esperar que transcurra 1 minuto. Escurrir y enjuagar.
  9. 9. Cubrir la muestra con solución de lugol y esperar que transcurra 1 minuto. Escurrir y enjuagar.
  10. 10. Cubrir la muestra con alcohol cetona. Esperar que transcurran 5 segundos. Escurrir y enjuagar.
  11. 11. Cubrir la muestra con safranina, y esperar que transcurra 1 minuto. Escurrir y enjuagar.
  12. 12. Dejar secar la muestra. Agregar una gota de aceite de inmersión y observar en el microscopio a 100x.
  13. 13. En nuestra muestra se observaron levaduras en destrucción.
  14. 14. Se observaron bacilos Se identificaron bacilos Gram – Gram + en la muestra de En el campo se logran observar otro equipo. extractos del medio de cultivo de donde obtuvimos la muestra.
  15. 15. Levaduras en etapa de destrucción.
  16. 16. El tamaño de las bacterias dificulta su visión al microscopio, por eso la tinción de estas en la microbiología es un apartado sumamente trascendente. La técnica de tinción tiene como finalidad crear un contraste entre la célula y el medio que la rodea, y una de las más importantes, tanto por su aplicación clínica para hacer una identificación preliminar de la bacteria causal de la infección y por su practicidad, es la tinción de Gram. Es por eso que esta técnica se vuelve fundamental en el estudio de la microbiología, y el conocimiento de su correcta realización es prácticamente obligatorio para todo aquel que se encuentra en el aprendizaje las ciencias médicas. El estudio de la literatura acerca de la tinción de Gram nos permite tener un preámbulo para poder diferenciar frente al microscopio los diferentes tipos de microorganismos,. Sin embargo, no hay que pasar por alto que es de suma importancia tener un completo estudio previo de los organismos y su reacción a la tinción para poder dar una respuesta certera ante el cuestionamiento de la naturaleza de un microorganismo.
  17. 17. • Jawetz E., et al. “Microbiología Médica de Jawetz, Melnick y Adelberg”. Editorial Manual Moderno, 19a Ed. México 2008; 702-703. • Murray PR, et al. “Microbiología Médica”. Editorial Elsevier Mosby. 6a Ed. España 2009: 158-159. • Caldas A. L., “Guía de Microbiología y Parasitología básico clínica”. Disponible en: http://www.facultadsalud.unicauca.edu.co/Documento s2010/DptoMedInt/Tencion_de_gram.pdf.

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